猪肺泡巨噬细胞的分离、纯化和冷冻保存研究

通过冷PBS气管灌洗法分离猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM),优化了PAM的纯化和冷冻保存方法,并进行了PAM纯度鉴定、细胞吞噬功能和存活率检测.结果表明:RPMI-1640培养液比DMEM培养液更适于PAM的培养和冷冻保存;巨噬细胞抗体MAC387免疫荧光检测表明,贴壁2h后更换培养液获得的PAM纯度最高(P＜0.05);用70％ RPMI-1640+20％新生牛血清+10％ DMSO的体系冷冻保存细胞密度为1×107个/mL的PAM可获得高达98.09％的存活率,冻存前后PAM的墨汁吞噬率无显著差异(P＞0.05).     

水貂附红细胞体的体外培养试验

在RPMI-1640、D-MEM、M-199、HL培养液中添加30%的新生牛血清或水貂血清,采用37℃、5%CO2条件下体外培养水貂附红细胞体,每12 h更换1次培养液,补充适量健康水貂红细胞,并作传代培养。试验结果表明,RPMI-1640和HL培养液附红细胞体的感染率和感染强度高于D-MEM和M-199培养液,在RPMI-1640和HL培养液中添加30%水貂血清的感染率和感染强度高于添加30%新生牛血清,且RPMI-1640略好于HL培养液,培养12 h后,获得了高达80%以上的感染率;体外传代连续培养23代。     

水貂附红细胞体的体外培养试验

[目的]对水貂附红细胞体进行体外培养试验。[方法]在 RPMI-1640、DMEM、M-199和 HL培养液中添加30%的新生牛血清或水貂血清,在37℃、5% CO2条件下体外培养水貂附红细胞体,每12 h更换1次培养液,补充适量健康水貂红细胞,并进行传代培养。[结果]RPMI-1640和 HL培养液中附红细胞体的感染率和感染强度高于 DMEM和 M-199培养液,在RPMI-1640和 HL培养液中添加30%水貂血清附红细胞体的感染率和感染强度高于添加30%新生牛血清,且 RPMI-1640略高于HL培养液,培养12 h后获得了80%以上的感染率,且体外传代可连续培养23代。[结论]该研究为筛选有效防治水貂附红细胞体的药物及制备诊断抗原与研制疫苗提供了有效的途径。     

姜曲海猪肺泡巨噬细胞的分离培养与鉴定

通过冷PBS气管灌洗法分离培养姜曲海猪肺泡巨噬细胞(PAM),进行了PAM纯度鉴定、细胞吞噬功能和存活率检测。从健康20日龄仔猪,分离得到PAM。以10%RPMI-1640培养液对PAM进行培养,观察细胞形态,用墨汁吞噬和免疫荧光检测了PAM的吞噬功能和纯度,比较冻存前和复苏后细胞的活率和细胞吞噬功能,以获得一批高纯度的PAM,用于猪体外呼吸道疾病发病机理的研究。     

不同来源血清对体外培养驴巨噬细胞的影响

为比较驴血清和胎牛血清对体外培养驴巨噬细胞的影响,采用含10%驴血清或胎牛血清的培养液进行驴巨噬细胞培养的对比试验,分别在培养的1、4、7、10 d时观察细胞的生长状况,并用MTT法通过细胞吸光度检测细胞活力;培养后4 d采用流式细胞仪检测巨噬细胞的纯度。结果表明,含10%驴血清培养液培养的驴巨噬细胞的分化能力优于胎牛血清;培养后1、4 d时,2种血清对巨噬细胞活力的影响没有显著差异,但培养后7、10 d,驴血清组的细胞活力显著(P0.05)或极显著(P0.01)高于胎牛血清组;培养后4 d,2组试验中巨噬细胞的纯度分别为(92.72±0.45)%和(81.16±2.13)%。综上,驴血清组培养的巨噬细胞其分化能力、活力和纯度均优于胎牛血清组,故更适合用于驴巨噬细胞的体外培养。     

山羊附红细胞体体外药物杀灭试验

以RPMI-1640为基础培养液,加入30%犊牛血清,选用四环素、盐酸吖啶黄、泰乐菌素、咪唑苯脲、依沙吖啶、磷酸伯氨喹等药物原粉,在37℃,5%CO2气体条件下,对山羊附红细胞体进行了体外药物杀灭试验。结果表明:依沙吖啶杀灭效果最好,盐酸吖啶黄和磷酸伯氨喹次之,咪唑苯脲、四环素有效。     

犬旋毛虫肌幼虫的体外培养

系统地探讨了不同培养条件对犬旋毛虫肌幼虫体外培养的影响．结果表明，犬旋毛虫肌幼虫包囊最佳消化时间为38℃下消化14h；最佳培养温度为37℃，气体条件为8％CO2，培养液为pH=7．0的RPMI-1640．按所选择的最佳条件进行培养，明显延长了犬旋毛虫肌幼虫的体外培养时间，体外培养持续时间达24d。     

牛温氏枝原体体外药物筛选试验(英文)

以RPMI-1640为基础培养液,加入30%犊牛血清,选用贝尼尔、四环素、敌百虫、泰妙菌素、咪唑苯脲、氟苯尼考、依沙吖啶、磷酸伯氨喹等药物原粉,在37℃、5%CO2气体条件下对温氏枝原体进行了体外药物筛选试验。结果表明,依沙吖啶效果最好;敌百虫和磷酸伯氨喹效果次之,但敌百虫毒性较大;贝尼尔、咪唑苯脲、氟苯尼考有效。     

牛附红细胞体体外药物筛选试验

以RPMI-1640为基础培养液,加入30%犊牛血清,选用贝尼尔、四环素、敌百虫、泰妙菌素、咪唑苯脲、氟苯尼考、依沙吖啶、磷酸伯氨喹等药物原粉,在37℃,5%CO2气体条件下对牛附红细胞体进行了体外药物筛选试验。结果表明,依沙吖啶效果最好;敌百虫和磷酸伯氨喹次之,但敌百虫毒性较大;贝尼尔、咪唑苯脲、氟苯尼考有效。     

Hepa1-6细胞的最佳培养条件研究

[目的]探索Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[方法]以小鼠Hepa1-6肝癌细胞为材料,采用正交试验设计研究RPMI1640和DMEM2种不同培养基及细胞接种密度、血清浓度、双抗浓度、D-Hanks漂洗次数、胰蛋白酶浓度和消化时间6个不同因素对Hepa1-6传代培养的影响;根据细胞在6个时间点的生长状况评分,筛选出Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[结果]Hepa1-6细胞在含有20%血清的RPMI-1640培养基,接种密度为4×104个/cm2,100U/ml的双抗浓度,贴壁率在90%以上时,D-Hanks漂洗1次,0.5%胰蛋白酶消化2min,传代效果最好。[结论]通过正交设计筛选,为Hepa1-6细胞体外培养探索出最佳培养条件。     

不同培养条件下欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞的生长优势

为建立欧洲鳗鲡病毒性疾病分离、鉴定的细胞模型,以欧洲鳗鲡胸鳍细胞人工培养适应株(第21代)为试验材料,采用人工培养基体外传代培养的方法,探讨欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞体外培养的最适条件。观察比较不同培养基(L-15、RPMI-1640、高糖型DMEM)、血清成分(BS和FBS)及其浓度(5%、10%、15%、20%)对欧洲鳗鲡胸鳍细胞生长状态的影响。结果表明:含有10%胎牛血清(FBS)的L-15培养基最适合欧洲鳗鲡胸鳍细胞的生长。     

“无饲养细胞”杂交瘤制备技术

在３７℃温度下，用４５％ＰＥＧ（ｐＨ７．４）对ＮＳ０瘤细胞和免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠脾脏细胞做１ｍｉｎ融合。细胞融合后，加入１６４０／ＨＡＴ培养基，在不加饲养细胞和预加饲养细胞的两种环境中培养。结果发现融合细胞培养中不加小鼠腹腔巨噬细胞，杂交瘤克隆孔形成的量较预加小鼠腹腔巨噬细胞的多。     

绵羊毛囊的分离培养及生物学特性研究

采用Philpott方法分离毛囊并培养于无血清培养液和常规培养液。毛囊在2种培养液中的生长速度分别为0.181 mm/d和0.143 mm/d(3 d),差异不显著。在无血清培养液中,毛囊形态较常规培养液不规则,但生长速度与体内接近;而常规培养液中的转化生长因子(TGF-β)等生长因子对毛囊生长有抑制作用。     

Hepa1-6细胞的最佳培养条件研究

[目的]探索Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[方法]以小鼠Hepa1-6肝癌细胞为材料,采用正交试验设计研究RPMI1640和DMEM2种不同培养基及细胞接种密度、血清浓度、双抗浓度、D-Hanks漂洗次数、胰蛋白酶浓度和消化时间6个不同因素对Hepa1-6传代培养的影响;根据细胞在6个时间点的生长状况评分,筛选出Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[结果]Hepa1-6细胞在含有20%血清的RPMI-1640培养基,接种密度为4×104个/cm2,100U/ml的双抗浓度,贴壁率在90%以上时,D-Hanks漂洗1次,0.5%胰蛋白酶消化2min,传代效果最好。[结论]通过正交设计筛选,为Hepa1-6细胞体外培养探索出最佳培养条件。     

狐狸附红细胞体体外药物筛选试验

[目的]对狐狸附红细胞体进行体外药物筛选试验。[方法]以 RPMI-1640为基础培养液,加入30%犊牛血清,选用贝尼尔、土霉素、大蒜素、强力霉素、咪唑苯脲、氟苯尼考、附红绝杀、磷酸伯氨喹等药物原粉,在37.3℃、5% CO2条件下对狐狸附红细胞体进行体外药物筛选试验。[结果]附红绝杀效果最好;磷酸伯氨喹和贝尼尔药物次之;咪唑苯脲、大蒜素、氟苯尼考有效。[结论]该研究为附红细胞体病的临床治疗提供了科学的理论依据。     

银杏叶多糖抑制人白血病细胞增殖的试验研究

[目的]明确银杏叶多糖(PGBL)对白血病的治疗价值。[方法]以干燥银杏叶为材料,提取PGBL;向100μl对数增长期的人急性早幼粒白血病HL-60细胞悬液中分别加入100μl含PGBL50、100、200μg/ml的RPMI-1640培养液,以加入100μlRPMI-1640纯培养液为对照,研究不同浓度(50、100、200μg/ml)PGBL对HL-60细胞增殖的抑制率。[结果]50、100、200μg/ml PGBL对人急性早幼粒白血病HL-60细胞增殖均有不同程度的抑制作用,且随着药物浓度和作用时间的增加,抑制作用增强,即PGBL对HL-60细胞增殖的抑制作用存在剂量-时间依赖性;方差分析结果表明,PGBL对HL-60细胞增殖的抑制率显著高于对照(P<0.01)。[结论]PGBL对HL-60细胞增殖具有较好的抑制作用,且该抑制作用具有浓度-时间依赖性。     

Mechanism of a reaction in vitro associated with delayed-type hypersensitivity

The cell type responsible for inhibition by antigen of migration in vitro of peritoneal exudate cells obtained from tuberculin-hypersensitive guinea pigs was studied. Exudate populations were separated into component cell types, the lymphocyte and the macrophage. Peritoneal lymphocytes from sensitive donors were the immunologically active cells in this system, the macrophages, being merely indicator cells which migrate. Sensitized peritoneal lymphocyte populations, upon interaction with specific antigen in vitro, elaborated into the medium a soluble material capable of inhibiting migration of normal exudate cells.