禽腺病毒鸽分离株在鸡胚原代细胞上的生长特性和血清学特征

禽腺病毒（ＦＡＶ）在禽类中广泛分布,现有知识大多来源于由１２个血清型（ＦＡＶ１－１２）组成的Ⅰ群鸡腺病毒。ＭｃＦｅｒａｎ等（１９７６）首次报道了鸽的腺病毒,两个分离株被鉴定为ＦＡＶ血清型８。以后的几篇报道表明腺病毒很可能与幼鸽的包涵体肝炎有关。最近有...     

进口鸽的禽结核病及其分离株的致病性

一只２岁龄公鸽在其泄殖腔后部皮肤上发现一结核病灶（直径１５ｍｍ），从皮肤结构病灶和粪便中分离出血清２型禽分枝杆菌，分离的光滑圆形（ＳｍＤ）变异株（４．９×１０＾６ＣＦＵ）和粗糙粒状（ＲＧ）变异株（３．７×１０＾７ＣＦＵ）静脉接种鸡，用ＲＧ变异株接种的鸡在接种后第３９天死亡，用ＳｍＤ变异株脾肿大，用ＳｍＤ变异株接种鸡的肝，脾和肺中，观察到许多白色结构病变，而用ＲＧ变异株接种的鸡没有观察到大体病变，从     

鸡胚绒毛膜源和鸡肾细胞源禽腺病毒抗原用于AGP试验检测…

将不同血清型的禽腺病毒（ＦＡＶ）毒株分别接种鸡胚绒毛膜（ＣＡＭ）和鸡肾细胞（ＣＫＣ）制成抗原，用琼扩试验（ＡＧＰ）比较这两种不同来源ＦＡＶ毒株的抗原反应。结果表明，两种抗原对同株ＦＡＶ的抗血清反应比对异株的抗血清敏感，且血清型间在敏感性上存在量的差异。ＣＡＭ源抗原对异株抗血清反应比ＣＫＣ源抗原敏感。多价ＣＡＭ源抗原（２￣３种抗原），可以提高敏感性，检测田间血清样品得到较高的阳性检出率。     

禽腺病毒AH株的分离与鉴定

为获得禽腺病毒毒株,将临床疑似Ⅰ群禽腺病毒感染病例的肝组织,通过接种SPF鸡胚进行病毒分离,用PCR方法对分离产物进行扩增,将PCR产物进行序列测定,对测定的序列在NCBI网上进行分析,结果显示,从病料可分离出病毒,用PCR方法特异性地扩增出了与设计片段大小相一致的片段,序列分析表明,分离株序列与禽腺病毒SD1-15分离株序列同源性99%,说明分离株为Ⅰ群禽腺病毒血清4型。     

鸽痘病毒在鸡胚上的增殖和纯化研究

通过实验建立了鸽痘病毒的鸡胚绒毛尿囊膜和鸡胚尿囊腔培养方法，并对这两种方法的病毒收获量进行了比较研究。结果表明：这两种培养方法实用易行，实验所收集的病毒可以满足电子显微镜观察、核酸分析等科研及疫苗生产的需要。为鸽痘病毒的深入研究提供有利的试材。     

鸡肠上皮细胞的分离及原代培养方法

取18日龄鸡胚，研究鸡肠上皮细胞（IEC）分离及原代培养的方法。结果表明：较好的分离条件是肠组织经0.1g／L中性蛋白酶和300U／mL胶原酶Ⅺ联合消化；较佳的培养条件是细胞在含2．5％～5％胎牛血清的DMEM培养基中，39℃、5％～7．5％CO2下培养，IEC可在1～2d贴壁，6～7d明显增殖，11～12d汇合成片。     

鸽痘病毒在鸡胚上的增殖和纯化研究

通过实验建立了鸽痘病毒的鸡胚绒毛尿囊膜和鸡胚尿囊腔培养方法,并对这两种方法的病毒收获量进行了比较研究.结果表明:这两种培养方法实用易行,实验所收集的病毒可以满足电子显微镜观察、核酸分析等科研及疫苗生产的需要.为鸽痘病毒的深入研究提供有利的试材.     

鸽新城疫病毒在鸡胚上的增殖动态

采用红细胞凝集试验（HA），通过对鸽新城疫病毒（NDV）在鸡胚上增殖动态的研究表明，ND－gs01病毒经尿囊腔接种9－10日龄鸡胚、24h内病毒处于“掩蔽期”，24h后开始增殖，72h左右鸡胚死亡。新城疫病毒在尿囊膜、羊膜、尿囊液、羊水中含量较高，增殖动态趋于一致。卵黄、胚体中含量较低。上述结果，为该病毒的进一步研究和应用提供了科学依据。     

一株分离自外观正常鸡胚的禽呼肠孤病毒的鉴定

从外观正常的鸡胚体内分离到一株病毒,其在鸡胚原代成纤维细胞上繁殖产生稳定的以合胞体为特征的CPE;病毒呈二十面体对称,无囊膜,有双层衣壳,直径为50～60nm;SDS-PAGE显示病毒基因组分为10个片段,呈3—3—1—3分布,与禽呼肠孤病毒(ARVS)FDO株基本相同。以上资料说明,鸡胚所带病毒为一株ARVS,其在CEF-2代上的TCID_(50)为10~(-6.16)/0.1ml。     

鸡胚血液中PGCs的分离及原代培养

在鸡胚孵化48,50,54,56,60h的不同时期，分离血液中原始生殖细胞（PGCs)，分离前的浓度分别为0.011%,0.007%,0.006%,0.006%,0.004%,0.001%,分离后的浓度分别为0.245,1.21%,1.02%,0.64%,0.27%,孵化48－54h，血液中PGCs浓度差异不显著，但孵化48h的鸡胚液较少，PGCs绝对量较低。孵化52－54h的鸡胚血液量较大，获取PGCs的绝对值较高，故分离PGCs的时间以孵化52－54h为宜，鸡胚血液中PGCs在未中任何外源生长因子而含10％FCS的TCM－199培养基中体外培养，能够存活3－4d。     

鸽Ⅰ型副粘病毒广东分离株鸡胚培养参数的测定

鸽Ⅰ型副粘病毒病俗称鸽瘟 ,是由鸽Ⅰ型副粘病毒引起的一种高度接触性、致死性传染病。主要特征是腹泻和神经症状。据资料查阅及通讯联系 ,目前国内各养鸽省市都有发生。它的发病率和死亡率都很高 ,给养鸽业造成巨大的损失。为了更好地了解该病毒特性 ,我们做了该病毒广东分离株鸡胚培养参数的测定。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　ＰＰＶ -Ⅰ毒株　收集广东不同地区的鸽病料 ,经实验室分离鉴定为鸽Ⅰ型副粘病毒 ,并将其命名为Ｐ1 、Ｐ3、Ｐ4、Ｐ5、Ｐ6、Ｐ7、Ｐ8共7个毒株。1 1 2　鸡胚　由南海市墟岗黄种鸡场提供。1 1 3　%红细胞　…     

血清4型禽腺病毒广西分离株单克隆抗体的制备及鉴定

为制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)广西分离株(FAdV-4-GX2018-005)的特异性单克隆抗体,将FAdV-4-GX2018-005作为免疫原免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株。利用阳性杂交瘤细胞株制备腹水并纯化得到单克隆抗体,利用ELISA和IFA鉴定单克隆抗体的特异性。结果表明,成功获得3株单克隆细胞株3A3、13A11和4D5。3株杂交瘤细胞株分泌的抗体,能与FAdV-4产生特异性反应,与其他血清型禽腺病毒(FAdV-1、FAdV-2、FAdV-3、FAdV-5、FAdV-6、FAdV-7、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-9、FAdV-10和FAdV-11)不发生反应。本研究成功制备FAdV-4广西分离株单克隆抗体,为FAdV-4检测方法的建立奠定了良好基础。     

禽腺病毒QU分离株的致病性及细胞适应性研究

QU分离株是一株类似产蛋下降综合征病毒,属于鸭腺病毒1型病毒。通过人工感染和细胞增殖试验,结果显示QU分离株接种无特定病原雏鸡未出现临床病症及生长发育障碍,不致死鸡胚,对鸭胚的致死率明显比引起产蛋下降的HS株低。QU株在鸡胚肝细胞、鸭胚成纤维细胞及鸡胚成纤维细胞上生长良好,产生典型细胞病变,且在鸡胚肝细胞上的增殖滴度最高,但不适应鸡胚肾细胞。这些数据说明QU株系对鸡具有低毒力的腺病毒,有可能用作禽用基因疫苗或基因治疗的候选病毒载体。     

鸽新城疫病毒在鸡胚中的生长规律

目前,国内用于ND免疫预防的主要措施是以鸡胚作为病毒繁殖的载体,收集尿囊液,经灭活制成不同佐剂的灭活疫苗。为了探索ND在鸡胚中的生长规律,笔者采用ND接种9日龄鸡胚,以HA检测不同时间的胚体、卵黄、尿囊膜、羊膜、尿囊液、羊水中ND的血凝效价,从而掌握ND在鸡胚内的生长规律。1材料与方法1.1材料1.1.1鸡蛋来源于非疫区的非免疫区的非免疫鸡场。1.1.2鸽新城疫种毒种毒为自行分离,经中国农业科学院哈尔滨兽医研究所鉴定确认为ND。1.1.3红细胞采自20周龄健康非免疫的伊沙蛋用公鸡,由本所提供。1.2方法1.2.1病毒的接种将种毒作1∶100稀释…     

禽腺病毒家禽分离株的生物学特性

为了解禽腺病毒(FAV)家禽分离株的致病性,通过病毒凝集试验、电镜观察、细胞病变试验以及接种鸡胚或鸡体,研究了3株A型FAV分离株的生物学特性。结果表明,分离株具有腺病毒的典型形态,不能凝集鸡的红细胞;不引起鸡胚成纤维细胞的病变,可导致鸡胚肾细胞变圆、折光性增强;对SPF鸡胚无明显致病作用;以1.0×1010TCID50的剂量,经皮下注射和口服2种途径接种1日龄的SPF鸡,攻毒后未出现明显的临床症状,体重和免疫器官的重量基本不受影响,除肝脏出现一过性病变,大部分脏器基本无病变。因此,FAV分离株致病性低,生物安全性高,可能是较好的FAV载体。     

禽副粘病毒Ⅰ型鹅源分离株YG97和鸡源分离株Y98在体外培养细胞中的形态发生

用禽副粘病毒Ⅰ型鹅源分离株YG97和鸡源分离株Y98的鸡胚尿囊液毒感染原代CEF，制作超薄切片，运用透射电镜观察，结果显示，2株病毒引起CEF细胞器肿胀等轻微的超微结构改变，但不引起细胞的皱缩和裂解。结果表明鹅源YG97分离株和鸡源Y98分离株与NDV强毒株F48E8在致细胞病变特性上的差异。透射电镜观察结果还表明：鹅源分离株YG97鸡源分离株Y98在培养细胞上的形态发生与鸡新城疫病毒F48E8强毒株相似，是由细胞核复制的“纤丝样”结构出核孔在细胞浆内发育而成的。     

I群禽腺病毒江苏分离株(FAVI-JS)的分离鉴定

通过形态学、致细胞病变和序列比较等对一株疑为I群禽腺病毒江苏分离株FAVI_JS进行了鉴定 ,试验结果表明 :该病毒为球形、无囊膜、二十面体对称 ,直径为 70nm～ 80nm ;不具有凝集鸡、鸭、鹅红细胞的能力但可以凝集大鼠红细胞。在鸡胚肾细胞 (CEK)上可致细胞变圆 ,折光性增强等病变 ;通过PCR方法扩增出的FAVI_JSL、R、ITR三个片段 ,经过测序分析并与GenBank上发表的属于血清I型的CELO病毒、FAV_1、FAV_A和血清 8型的禽腺病毒 (FAV_8)全基因组的相应序列比较 ,FAVI_JS与I群禽腺病毒各毒株在三个片段上同源性都很高 ,其中与血清I型的同源性高达 96 %以上 ,在根据对遗传上具有重要意义的ITR序列绘制的遗传进行树分析 ,FAVI_JS与Ⅲ群禽腺病毒EDS、Y81G4株明显属于不同的分支 ,而与群禽腺病毒 ,特别是与血清I型的禽腺病毒更接近 ,这些结果证明 ,FAVI_JS确为I群禽腺病毒     

鸽新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的生长规律

运用红细胞凝集试验(HA)，对鸽新城疫病毒(NDV)在坞胚尿囊液中的生长变化的研究表明，ND—gs病毒经尿囊腔接种9日龄坞胚，24h内病毒处于“掩蔽期”，24h后开始生长，96h左右死亡，血凝价达到最高。这一结果，为该病毒的进一步的研究奠定了基础。     

Ⅰ群禽腺病毒江苏分离株(FAVI-JS)的分离鉴定

通过形态学、致细胞病变和序列比较等对一株疑为Ⅰ群禽腺病毒江苏分离株FAVI-JS进行了鉴定,试验结果表明:该病毒为球形、无囊膜、二十面体对称,直径为70 nm～80nm;不具有凝集鸡、鸭、鹅红细胞的能力但可以凝集大鼠红细胞.在鸡胚肾细胞(CEK)上可致细胞变圆,折光性增强等病变;通过PCR方法扩增出的FAVI-JS L、R、ITR三个片段,经过测序分析并与GenBank上发表的属于血清Ⅰ型的CELO病毒、FAV-1、FAV-A和血清8型的禽腺病毒(FAV-8)全基因组的相应序列比较,FAVI-JS与Ⅰ群禽腺病毒各毒株在三个片段上同源性都很高,其中与血清Ⅰ型的同源性高达96%以上,在根据对遗传上具有重要意义的ITR序列绘制的遗传进行树分析,FAVI-JS与Ⅲ群禽腺病毒EDS、Y81G4株明显属于不同的分支,而与群禽腺病毒,特别是与血清Ⅰ型的禽腺病毒更接近,这些结果证明,FAVI-JS确为Ⅰ群禽腺病毒.