兔超数排卵效果及早期胚胎体外发育的研究

实验分30、40、50和60 IU PMSG和150 IU hCG 4组超数排卵处理,对卵巢进行组织学观察,获得胚胎进行体外培养,研究其发育形态学变化。结果表明:注射30 IU PMSG超排效果较好,平均回收卵(18.4±11.1)枚,回收率89.7%;4种剂量显著(P<0.05)影响充血卵泡中颗粒细胞层数和直径,对原始卵泡没有显著影响(P>0.05),对次级卵泡的颗粒细胞层厚、颗粒细胞层数和颗粒细胞直径有极影响显著(P<0.01);30 IU组初级卵泡中颗粒细胞直径显著(P<0.05)小于40 IU和60 IU组;实验所采用的培养体系可以使胚胎正常发育至孵化囊胚,胚胎发育速度与在体内相近,受精后62～74 h开始进入囊胚期,受精后86～98 h囊胚开始孵化,15 h所有存活胚胎全部进入孵化胚阶段,囊胚发育率85.4%,孵化率70.7%。     

不同体外培养条件对家兔早期囊胚贴壁行为的影响

采集家兔自然交配后96h的早期囊胚，以低糖DMEM＋150mL／L胎牛血清＋0．1mmol／L非必需氨基酸＋100IU／mL青霉素＋100IU／mL链霉素为基础培养基，比较了不同胚胎处理方法、不同饲养层以及培养液中添加不同成分对兔早期囊胚贴壁和增殖的影响，以完善兔胚胎干细胞的建系方法。结果表明，以胚胎分割法和链霉蛋白酶-E（proteinaseE）处理掉黏蛋白及部分透明带的胚胎容易贴壁和增殖；在小鼠成纤维细胞饲养层和兔胎儿成纤维细胞饲养层上，胚胎的脱带率差别不大，但在小鼠成纤维细胞饲养层上贴壁率明显提高，且贴壁后内细胞团增殖较快；添加胰岛素、白血病抑制因子和伊巯基乙醇均利于抑制ES的分化和促进内细胞团的增殖。     

氨基酸对哺乳动物胚胎体外发育的影响

在培养液中添加氨基酸可促进胚胎发育,提高囊胚率和孵化率,增加胚胎的细胞数。本文对氨基酸在胚胎体外发育中的作用进行了综述,并对生殖道液、胚胎体外培养液和胚胎内氨基酸浓度的差异进行了比较。     

兔胚胎体外培养液研究进展

兔胚胎体外培养研究受到广泛重视。传统的兔胚胎体外培养方法主要采用基础培养液 ,添加各种成分 ,如血清、生长因子、酶及其他营养成分促进胚胎发育。近年来 ,国内外学者对氨基酸、牛磺酸和亚牛磺酸等能源物质 ,胰岛素及胰岛素样因子 1、碱性成纤维细胞生长因子、血小板活化因子、血小板衍生生长因子和白血病抑制因子等多种生长因子 ,以及抗氧化剂如EDTA、过氧化氢酶、牛磺酸和超氧化物歧化酶等物质促进兔早期胚胎发育的作用进行了研究。此外 ,采用联合培养体系及体细胞条件培养液 ,模拟体内生长环境 ,来提供兔胚胎发育所需的物质条件也正成为研究热点     

活性氧对兔早期胚胎体外发育的影响

研究旨在探讨活性氧-过氧化氢(H2O2)对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响。在添加不同浓度过氧化氢的含胎牛血清的TCM-199培养液中,培养兔2-细胞期胚胎的对照组、≤88μmol/L、94μmol/L、103μmol/L≥118μmol/L组的囊胚发育率分别为86%、75%、34%、26%和5%;不同发育时间添加H2O2时对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响为第1天处理组(37.14%)、第2天处理组(54.29%)与对照组(91.42%)差异显著。不同发育时间停止H2O2处理对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响为第1天不处理组(82.26%)与对照组(97.14%)无显著性差异,但与第2天不处理组(52.50%)和第3天不处理组(30.00%)有差异。可以抑制兔2-细胞期胚胎体外发育的最低过氧化氢浓度为94μmol/L。兔2-细胞胚胎体外发育过程中,16-细胞之前的胚胎对环境中的过氧化氢都敏感,尤其是8-细胞之前的胚胎对环境中的过氧化氢更为敏感。     

影响牛早期胚胎体外发育的因素

早期胚胎的体外培养系统比较复杂，包括培养液、温度、气相、湿度、pH值、渗透压、离子浓度、能量来源、血清成分、光、水质和培养皿等等。不同物种的早期胚胎代谢具有差异性，而培养液的组成又极为复杂，这可能是造成各种胚胎培养基差异的根本原因。因为简单培养液不能较大限度地满足胚胎发育的需求成分，所以现在一般培养胚胎都用复合培养液。     

Iloprost对猪早期胚胎体外发育的影响

本研究旨在探讨PGI2类似物iloprost对猪胚胎体外发育的影响。试验以IVF胚胎为研究对象,分别在不同时期(0、24、48、72h)将不同浓度(0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μmol.L-1)iloprost加入到猪胚胎培养液中,于156h时记录囊胚发育率和囊胚细胞数,筛选获得最佳添加方案,检测胚胎脂肪代谢速度和代谢相关基因(cox2、creb、pparδ、pdk、cpt2)的表达水平,分析iloprost影响胚胎发育的机制。结果显示,最佳的添加方案为,在受精后48h加入2.0μmol.L-1 iloprost,胚胎囊胚发育率(28%)和囊胚细胞数(49.42)显著高于(P<0.05)对照组的囊胚发育率(16%)和囊胚细胞数(28.22);添加iloprost后,胚胎脂肪酸降解速度也显著加快(P<0.05),脂肪酸代谢相关基因cox2、creb、pparδ、cpt2的表达量上升,糖代谢相关基因pdk表达量无显著变化。结果表明,PGI2类似物iloprost可以促进胚胎降解脂肪酸,为胚胎发育提供能量,提高了胚胎体外发育能力。     

家兔的超数排卵和胚胎冷冻方法的研究

哺乳动物胚胎冷冻是近十年在鲜胚移植基础上发展起来的一项新技术,冷冻保存胚胎首先于1972年在小鼠获得成功(Whittingham leibo and Mazur, 1972)以后,牛(Wilmat and Rowson, 1973),羊(Willadsen, Polge, Rowson and Moor, 1974),兔(Whittingham and Adams, 1974)和大鼠(Whittingham, 1975)的胚胎相继冷冻成功。应用冷冻保存技术不但能根据需要随时进行胚胎移植,而且还可以进行胚胎长途运输和建立基因库——长期保存有价值的遗传材料和珍贵的品种资源,它和精液冷冻一样在家畜的良种繁     

影响犊牛早期胚胎体外发育的因素

犊牛超数排卵不但可为科研和生产提供大量可用卵母细胞,而且对于加快育种进程、缩短育种间隔、基因优良个体扩繁等存在巨大的潜力和意义。但是,多数研究表明犊牛卵母细胞在体外发育方面还不及成年牛卵母细胞,文章就诱导犊牛卵泡发育取得的主要研究成果和犊牛卵母细胞及其胚胎在发育等方面存在的问题及其影响因素进行了综述。     

牛胚胎体外生产与早期胚胎发育的探讨

试验对牛胚胎体外生产技术中的体外受精液、精卵共育时间、血清和培乔液等影响早期胚胎体外发育的因素进行了研究。以BO（Brackett ＆ Oliphant）和BM（BO：成熟培养液=3：2）作为受精液，受精卵的囊胚发育率分别为26．0％和15．0％；精卵共育时间以9-12h为宜；受精卵在含血清FBS或OCS培养液中的专胚发育率分别为26．4％或29．9％，明显高于在无血清培养基中的囊胚发育率（10．3％）；TCMl99、mBECMaa、mSOFaa3种胚胎培养液均能支持受精卵的体外发育，在其中培养受精卵囊胚发育率分别为18．O％、30．7％和29．2％。试验结果表明：精卵于BM受精液中共育9～12h后，将假定受精卵置于添加5％OCS的mBECMaa或mSOFaa培养液中培养，能显著提高体外生产胚胎的囊胚发育率。     

黄淮白山羊孤雌胚胎的体外培养

采用离子霉素和6-DMAP对黄淮白山羊体外成熟卵母细胞进行联合激活,分别在不同的培养体系进行体外培养,观察孤雌胚胎的发育情况。培养体系分别为:无共培养条件下,M199(10?S)、CR1aa和HTF P1;颗粒细胞共培养条件下,CR1aa、HTF P1和SOFaa。结果发现,无共培养条件下,CR1aa和HTF P1组孤雌胚胎的卵裂率显著高于M199组(P<0.05),但3组均未有囊胚;共培养条件下,HTF P1组的卵裂率显著高于CR1aa和SOFaa组(P<0.05),而CR1aa组的囊胚率却显著高于其他2组(P<0.05)。综合试验结果说明,CR1aa联合颗粒细胞共培养能够获得较好的培养效果,适用于山羊孤雌胚胎的体外培养。     

In vitro production of porcine embryos: current status,future perspectives and alternative applications

The pig is considered to be a suitable source of cells and organs for xenotransplants, as well as a transgenic animal to produce specific proteins, given the biological similarities it shares with human beings. However, the in vitro embryo production system in pigs is inefficient compared with those in other mammals, such as cattle or mice. Although numerous modifications have been applied to improve the efficiency of in vitro embryo production systems in pigs, not much progress has been made to overcome the problem of polyspermy, and low developmental ability due to insufficient cytoplasmic abilities of in vitro matured oocytes and improper culture conditions for the in vitro produced embryos. Recent achievements, such as the establishment of chemically defined medium and utilization of ‘zona hardening’ technique, have gained some success. However, further research for the reduction of polyspermy and detrimental effects of the culture systems in pigs is still needed.     

Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响

本研究的目的是探讨Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响.体外成熟的水牛卵母细胞经体外受精或离子霉素孤雌激活后.分别在舍0,0.5,5,50和500 μg/L Ghrelin的培养液中进行体外培养,观察各组胚胎的卵裂率和囊胚率.结果显示,在培养液中添加不同浓度的Ghrelin对体外受精和孤雌激活胚胎的卵裂率均无显著影响(P>0.05),但添加500 μg/L的Ghrelin显著提高体外受精胚胎的囊胚发育率(33.5% vs 13.7%,P<0.05),50 μg/L或500 μg/L的Ghrelin均显著提高孤雌激活胚胎的囊胚发育率(32.4%和34.6% vs 14.5%,P<0.05).结果表明,培养液中添加Ghrelin对胚胎的早期卵裂没有影响,但可促进水牛体外受精和孤雌激活胚胎囊胚的形成.     

赖草属几种植物幼胚离体培养研究

以大赖草、欧滨麦、野麦、窄颖赖草、赖草和羊草为材料,在离体培养条件下对幼胚的发育进行了研究.结果表明,6种赖草属植物的幼胚在不含任何激素的培养基上能够直接发育成完整小植株,幼胚发芽率因物种而异,其中羊草最高,发芽率达到98.8%.当幼胚被培养在减半的N6培养基上时,发芽率普遍降低.在N6培养基或在减半的N6培养基上,幼胚均没有发生脱分化现象.相反,在含有2,4-D的培养基上,91.7%～93.5%的羊草幼胚发生了脱分化,从脱分化的愈伤组织里出现了少量再生芽.这些结果对禾本科牧草幼胚的发育研究具有重要参考价值,对羊草等多年生牧草的杂交育种具有潜在利用价值.     

兔早期胚胎PCR性别鉴定体系的建立

根据兔SRY基因序列设计两对引物作为兔雄性特异性引物,根据兔APP基因序列设计1对引物作为内标引物,分别建立了兔早期胚胎性别鉴定的双重PCR和巢式PCR反应体系,在不同浓度的基因组DNA和兔早期胚胎上进行性别鉴定应用,同时,对兔SRY巢式PCR引物特异性进行了分析。结果表明,多重PCR扩增兔基因组DNA可以准确判定其性别,扩增灵敏度为100pg基因组DNA;多重PCR鉴定24枚兔32细胞桑椹胚性别,只能对整胚成功鉴定。巢式PCR,公兔基因组DNA扩增出282bp的SRY基因片段,母兔没有扩增产物,扩增灵敏度为10pg;对24枚兔32细胞桑椹胚性别鉴定结果表明,巢式PCR可以对少至4个胚胎细胞进行准确鉴定,同一胚胎结果符合率为100%(24/24)。SRY引物只对兔雄性基因组DNA特异,而其他动物(人、牛、绵羊、小鼠)雄性DNA及兔的冲卵液,均无PCR产物。     

Importance of oil overlay for production of porcine embryos in vitro

Technologies to edit the zygote genome have revolutionized biomedical research not only for the creation of animal models for the study of human disease but also for the generation of functional human cells and tissues through interspecies blastocyst complementation technology. The pig is the ideal species for these purposes due to its great similarity in anatomy and physiology to humans. Emerging biotechnologies require the use of oocytes and/or embryos of good quality, which might be obtained using in vitro production (IVP) techniques. However, the current porcine embryo IVP systems are still suboptimal and result in low monospermic fertilization and blastocyst formation rates and poor embryo quality. During recent years, intensive investigations have been performed to evaluate the influence of specific compounds on gametes and embryos and to avoid the use of undefined supplements (serum and serum derivate) in the incubation media. However, little consideration has been given to the use of the mineral oil (MO) to overlay incubation droplets, which, albeit being a routine component of the IVP systems, is a totally undefined and thus problematic product for the safety of gametes and embryos. In this review, we provide an overview on the advantages and disadvantages of using MO to cover the incubation media. We also review one important concern in IVP laboratories: the use of oils containing undetected contamination. Finally, we discuss the effects of different types of oils on the in vitro embryo production outcomes and the transfer of compounds from oil into the culture media.     

牛的体外受精技术研究进展

本文阐述了体外受精技术在牛胚胎工程和育种研究中的意义,介绍了牛体外受精技术的研究历史和目前的研究进展,对牛IVF技术的技术指标现状及经济效益进行了评估,并就牛的体外受精技术当前研究存在的问题作了评述,对其前景做了展望。