羊软骨II型胶原蛋白对鸡胚成纤维细胞生长的影响

采用体外细胞培养检测自制羊软骨II型胶原蛋白(Type II collagen from sheep,CII)的细胞毒性,将材料与鸡胚成纤维细胞(Chick embryo fibroblast,CEF)共同培养,观察其对生长的影响,确定鸡胚成纤维细胞对羊软骨CII的最大安全浓度,以及在安全浓度范围内有效促进鸡胚成纤维细胞生长的浓度。结果显示,羊软骨CII对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度为400μg/mL,当羊软骨CII浓度在25μg/mL时,可以极显著的促进鸡胚成纤维细胞的生长。     

紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞体系中安全浓度的测定

采用体外细胞培养法,将紫苏叶注射液与鸡胚成纤维细胞(Chick embryo fibroblast,CEF)共同培养,测定紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞培养体系中的最大安全浓度,检测紫苏叶注射液的细胞毒性。结果表明,紫苏叶注射液对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度为488.281μg/mL。     

不同中药多糖体外对鸡外周血和脾脏淋巴细胞增殖能力的比较

为比较玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖、商陆多糖、淫羊藿多糖体外增强免疫活性,采用酶学检测法测定各中药多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度,根据安全浓度测定结果,选择250.000μg/ml、125.000μg/ml、62.500μg/ml、31.250μg/ml、15.625μg/ml 5个浓度,用MTT法比较5种中药多糖单独和PHA协同刺激对外周血T淋巴细胞增殖指数的影响,以及比较5种中药多糖单独和LPS协同刺激对脾脏B淋巴细胞增殖率的影响。结果显示,玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖、商陆多糖、淫羊藿多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度分别为1 250.0μg/ml、625.0μg/ml、625.0μg/ml、625.0μg/ml、312.5μg/ml。玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖和淫羊藿多糖无论是单独还是协同PHA刺激外周血T淋巴细胞,均不同程度地表现出增强T淋巴细胞的活性。桑叶多糖、杜仲多糖和淫羊藿多糖无论是单独还是协同LPS刺激脾脏B淋巴细胞,均不同程度地显示出良好的增强B淋巴细胞的活性。桑叶多糖和杜仲多糖体外增强免疫效果最佳,在62.500μg/ml和125.000μg/ml时,均显示出较强的增强外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞增殖的能力。     

不同浓度胰岛素对鸡胚盲肠上皮细胞生长的影响

为了探讨不同浓度的胰岛素对体外培养的鸡胚盲肠上皮细胞生长和增殖的影响,试验选用16日龄SPF鸡胚,采用嗜热菌蛋白酶消化法无菌分离鸡胚盲肠组织,以含不同质量浓度胰岛素(0、5、10、15、20μg/m L)的培养基对盲肠上皮进行体外培养,对细胞克隆形成率、生长曲线和上皮细胞角蛋白18进行测定。结果表明,培养基中添加10μg/m L胰岛素时,鸡胚盲肠上皮细胞的增殖差异极显著,胰岛素质量浓度为15、20μg/m L时,鸡胚盲肠上皮细胞增殖略有升高,但与胰岛素10μg/m L组相比,细胞增殖差异不显著;角蛋白18鉴定结果为阳性。表明在体外鸡胚盲肠上皮细胞培养中,10μg/m L胰岛素能促进鸡胚盲肠上皮细胞分裂、生长和增殖。胰岛素作为一个体外细胞生长的关键因子,可促进鸡胚盲肠上皮细胞的生长和增殖。     

复方芩连汤对几种禽病病毒体外增殖的抑制作用

以黄连、黄芩、板蓝根、黄芪等为主要成分的复方芩连汤作为抗病毒药,利用细胞病变(CPE)抑制试验测定中药复方在长成单层的鸡胚成纤维细胞(CEFC)上对鸡新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)等几种禽病病毒的抑制作用。结果表明:中药复方对NDV具有较好的抑制作用,其最小直接杀灭浓度为7.81μg/mL,最小阻断浓度为3.9μg/mL,最小治疗浓度为15.62μg/mL;中药复方在体外对IBV的T株和M41株也具有显著定的抑制作用,而对IBDV的抑制作用则不明显。     

原核表达梅花鹿IGF-1成熟多肽对鸡CEF和CEK细胞增殖的影响

本实验利用原核表达载体pET-30a对梅花鹿胰岛素样生长因子-1(Insulin Growth Factor,IGF-1)成熟多肽基因进行诱导表达与纯化,经羟胺裂解和复性后获得重组梅花鹿IGF-1成熟多肽蛋白。再通过MTT法检测重组蛋白IGF-1对鸡胚成纤维细胞(Chick Embryo Fibroblast,CEF)及鸡胚肾细胞(Chicken Embryo Kidney,CEK)增殖的影响。MTT法检测结果发现不同浓度的重组IGF-1成熟多肽皆能促进鸡胚成纤维细胞的增殖,其中,在48 h、终浓度为200 ng/m L时对鸡胚成纤维细胞增殖的影响最显著。但不同浓度的重组IGF-1成熟多肽以及不同处理时间对鸡胚肾细胞增殖均无显著影响。本研究结果说明原核表达的IGF-1成熟多肽可显著促进鸡胚成纤维细胞的增殖,但对鸡胚肾细胞的增殖影响不显著。     

不同抗生素和防腐剂对小球藻Chlorella sorokiniana细胞生长的影响

[目的]分析不同抗生素和防腐剂对小球藻Chlorella sorokiniana细胞生长的影响,筛选出适宜的抗生素和防腐剂种类及其剂量,为建立小球藻C.sorokiniana无菌培养体系提供参考依据.[方法]在HSM培养基中分别添加10、20、40、60、80和100μg/mL抗生素,包括氯霉素、链霉素、青霉素、庆大霉素和头孢噻肟,以及山梨酸钾(50、100、150和200μg/mL)、乳酸钠(0.5%、1.0%和2.0%)、富马酸二甲酯(0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、25.0和50.0μg/mL)等防腐剂,培养3 d后测定小球藻C.sorokiniana的细胞密度、叶绿素含量及光系统Ⅱ最大光化学量子产量(Fv/Fm).[结果]添加10~100μg/mL青霉素或10~80μg/mL头孢噻肟对小球藻C.sorokiniana细胞密度、叶绿素含量和Fv/Fm的影响均不显著(P>0.05,下同);添加100μg/mL头孢噻肟会抑制藻细胞生长,抑制率为18.89%,并引起叶绿素含量和Fv/Fm极显著下降(P<0.01,下同).氯霉素、链霉素和庆大霉素等蛋白质合成抑制类抗生素对小球藻C.sorokiniana细胞的毒性较强,高于10μg/mL的链霉素和庆大霉素及高于20μg/mL的氯霉素均极显著抑制藻细胞生长,对应的叶绿素含量和Fv/Fm也极显著下降.3种防腐剂中,山梨酸钾对小球藻C.sorokiniana细胞生长无显著影响,添加200μg/mL山梨酸钾还会促进细胞叶绿素含量增加;乳酸钠对小球藻C.sorokiniana细胞有一定的毒性作用,其藻细胞密度、叶绿素含量和Fv/Fm随添加浓度增加而降低;添加0.1~10.0μg/mL富马酸二甲酯不影响小球藻C.sorokiniana的细胞密度及叶绿素含量,但Fv/Fm极显著下降.[结论]建立小球藻C.sorokiniana无菌培养体系时宜选用青霉素和头孢噻肟为抗生素、山梨酸钾为防腐剂,其推荐使用浓度分别为青霉素100μg/mL、头孢噻肟80μg/mL、山梨酸钾200μg/mL.     

稀土元素对仓鼠细胞和鸡胚细胞生长的影响

为从细胞学水平揭示稀土元素对动物的促生长机理,本文选择中国仓鼠肺成纤维细胞(Wg_3 1)和卵巢细胞(CHO),在含有不同浓度 STN 的1640完全培养液中培养;以及来自非免疫健康鸡群11日龄鸡胚所制成的鸡胚细胞,使之在0ppm、1.25ppm、2.5ppm、5ppm,10ppm、20ppm 和40ppm 稀土浓度的199培养液中培养.CHO 细胞的生长速率表现在10ppm浓度时细胞数最多,Wg_3 1 和 CHO 的细胞分裂指数也以10ppm 时显著高于对照组(P<0.05).96小时鸡胚细胞单层面形成状况表明:三种类型的稀土化合物均以5ppm 浓度时对鸡胚细胞的促生长作用最明显,STV-2优于 CL-1,CL-1优于 CL-3.20ppm 和40ppm 浓度使 CHO、Wg_3 1和鸡胚细胞生长受到抑制.结论认为,适量浓度的稀土可促进动物细胞生长,高浓度稀土抑制动物细胞生长.     

欧拉羊胚肾细胞的分离培养和鉴定

[目的]分离培养并鉴定欧拉羊胚肾细胞,为该品种基因组文库构建和遗传多样性研究提供生物学材料。[方法]用胰蛋白酶热消化法分离并培养欧拉羊胚肾原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染检测和连续传代培养试验。[结果]欧拉羊胚肾细胞呈成纤维型,复苏活力90%以上,生长良好,生长曲线呈"S",最大增殖浓度为4.61×105/ml,倍增时间26 h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性,连续传代培养在10代内生长正常。[结论]欧拉羊胚肾细胞分离培养成功,使这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。     

赤霉素和α—萘乙酸对羊肚菌菌丝生长的影响

采用不同浓度的赤霉素（GA）和α-萘乙酸（NAA）配制成综合马铃薯培养基对羊肚菌菌丝体生长情况进行了研究。结果表明：2种激素对其都有不同程度的促进作用。GA在0．5－10μg/mL浓度下有明显的促进作用，其中以5μg/mL处理促进作用最强（P＜0．001）；NAA也有促进作用，以其5μg/mL处理第6d时促进作用最强（P＜0．05）；GA对羊肚菌菌丝体生长的促进作用明显优于NAA。     

聚肌胞诱导鸡胚成纤维细胞和鸡胚及肉鸡抵抗新城疫病毒感染的研究

为探讨多聚核苷酸(聚肌胞)对新城疫病毒(NDV)的抑制作用,本研究通过聚肌胞对感染NDV的鸡胚成纤维细胞、SPF鸡胚和肉鸡进行了病毒抑制试验.结果显示:125和250 靏穖L-1的聚肌胞溶液能明显抑制100倍 TCID50的NDV在鸡胚成纤维细胞上的繁殖;5 mg·mL-1的聚肌胞溶液(每个胚0.1 mL)能明显抑制NDV在SPF鸡胚中的繁殖,减轻NDV对鸡胚生长的抑制作用,降低病毒血凝效价和鸡胚死亡数.聚肌胞对肉鸡抵抗NDV感染试验结果显示,肌肉注射0.01 mg·kg-1的聚肌胞注射液能明显提高治愈率和显效率.但反映细胞活性状态的中性红染色(D570值)随着聚肌胞浓度的增大而变小的结果说明,聚肌胞对鸡胚成纤维细胞的增殖有一定程度的抑制.     

甘草酸二钾体外诱导感染MDV鸡胚成纤维细胞 凋亡发挥抗病毒作用

【目的】探讨甘草酸二钾体外抗MDV的活性及作用机制。【方法】在体外以鸡胚成纤维细胞为MDV增殖模型,利用MTT比色法、噬斑减少法通过抗病毒试验、病毒复制抑制试验、直接灭活试验来评价甘草酸二钾的抗病毒效果;并通过细胞凋亡试验解释其抗病毒机制。【结果】抗病毒试验结果表明,在安全浓度范围内,甘草酸二钾在体外具有较强的抗MDV的活性,其EC50为（893.5±36.99）µg•mL-1,SI>3.36,最大抑制率达94.4%;在病毒复制抑制试验中,甘草酸二钾可以抑制病毒复制的整个过程;病毒直接灭活试验表明甘草酸二钾可直接杀灭病毒粒子且不呈时间依赖性;细胞凋亡试验结果显示甘草酸二钾能够诱导感染MDV的鸡胚成纤维细胞凋亡。【结论】甘草酸二钾在体外具有抗MDV的活性,可以通过诱导感染病毒的鸡胚成纤维细胞凋亡发挥抗病毒作用。     

复方三氮唑核苷注射液对鸡新城疫病毒的抑制试验

将复方三氮唑核苷（毒菌杀平）注射液、三氮唑核苷液和盐酸吗啉双胍液分别稀释成2，10，20，100μl/L的溶液，分别与等量鸡新城疫病毒（NDV）液混合，其中含抗病毒药含量分别为0.025,0.125，0.250,1.250μg/mL。将混合液37℃感作2h，尿囊腔接种9-11日龄鸡胚，每组接种11个鸡胚，每胚0.1mL，37℃培养，每6-8h照蛋1次，死亡鸡胚及时取出冷冻，活胚孵化至96h全部取出，冷冻后测定血凝效价，计算病毒滴度和病毒灭活率。试验结果表明：含量为0.025,0.125,0.250,1.250μg/mL的毒菌杀平注射液、三氮唑核苷液、盐酸吗啉双胍液对NDV均有不同程度的抑制作用，复方制剂没有降低原抗病毒药的药效，三氮唑核苷对该NDV的抑制效果好于盐酸吗啉双胍。     

几种中药粗提物对鸡胚成纤维细胞生长的影响

为筛选抗IBDV方剂的主药,采用组织培养方法,测试了黄芪、连翘等8种中药粗提物在体外鸡胚成纤维细胞(CEF)上的最大安全浓度及其对CEF增殖、存活时间的影响。结果显示,黄芪对CEF基本无毒性作用,最大安全浓度为25mg/ml,而连翘等其余7种中药粗提物则表现出较大的毒性作用,最大安全浓度极低,同时,黄芪对CEF还具有较强的促生长和延长存活时间的作用。因此,筛定黄芪作为抗IBDV方剂的主药。     

中药免疫调节剂体外细胞毒性测定

采用形态学观察和MTT两种方法,测试了中药免疫调节剂(TJJ)在鸡胚成纤维细胞(CEF)和小鼠纤维母细胞(L929)体外培养中的最大安全浓度。结果表明:⑴TJJ的细胞毒性很低,对CEF和L929的最大无毒浓度分别达3.12g/L和1.56g/L;⑵两种细胞比较,L929对药物毒性的反应性较CEF更敏感;⑶两种方法比较,MTT法更灵敏、更客观;⑷在同一种细胞的不同生长状态下(形成单层前后)加入TJJ,药物对细胞的毒性结果无变化,说明药物对细胞的毒性与细胞种类有关,而与细胞的生长状态关系不明显。     

复方糖苷抗新城疫病毒感染作用

采用2种方法研究了复方糖苷抗新城疫病毒(Newcastle disease Virus,NDV)感染作用。一是鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)培养法,通过观察NDV CPE的形成及测定CEF OD值的变化,计算病毒抑制率等指标,综合评价复方糖苷在细胞水平上抗NDV作用,并从直接灭活病毒、阻断病毒吸附与生物合成及释放等环节,探讨了复方糖苷的抗NDV途径。二是将复方糖苷稀释成1 200,1 000,800,600,300μg/m L 5种浓度与100 EID50 NDV液混合后接种9日龄SPF鸡胚,于72 h后统计鸡胚的存活数并测定尿囊液血凝效价(HA),依此判定复方糖苷在鸡胚内抗NDV作用。结果表明:随着药物浓度的增加CPE的特征逐渐减弱,OD值明显升高,病毒抑制率增大,当复方糖苷质量浓度为600μg/m L时对NDV具有显著的直接杀灭与阻断吸附作用。HA在1 200,1 000μg/m L时均为0。表明复方糖苷具有显著的抗NDV感染作用。     

金属离子对水稻纹枯病菌菌丝生长和菌核形成的影响

研究了12种金属离子对水稻纹枯病菌菌丝生长和菌核形成的影响，按其对菌丝生长和菌核形成有抑制作用的浓度范围不同分为3类：（1）对病菌有抑制作用的浓度最高，在2500μg/mL时，仍有菌丝生长和菌核形成，属于这一类的有Mg^2 ,Ba^2 ,Ca^2 和Mn^2 4种金属离子；值得一提的是，Mg^2 在100－2500μg/mL范围内促进菌丝生长和增加菌核干质量。（2）对病菌有抑制作用的浓度较高，在500或1000μg/mL时可严重抑制菌丝生长和菌核形成，属于这一类的有Fe^2 ,Fe^3 ,Cu^2 ,Pb^2 和Zn^2 5种金属离子。（3）在浓度为10或50μg/mL时严重抑制菌丝生长和菌核形成，属于这一类的有Ag^ ,Hg^2 和Cd^2 3种金属离子。     

银翘散抗禽流感病毒体外抑制试验

为测定银翘散对禽流感病毒(AIV)的抑制作用,将不同浓度的银翘散煎煮液分别与H9、H5亚型AIV在体外混合作用30 min后,接种SPF鸡胚,测定鸡胚的死亡率及尿囊液中AIV的血凝价,并采用RTPCR法对1 g/mL试验组鸡胚进行H9N2病毒检测。结果表明,药物浓度在0.2500 g/mL及以上时,H9N2试验组鸡胚存活率为100%,病毒血凝价为零,药物浓度为1 g/mL时,RT-PCR检测无目的条带出现;药物浓度在0.5000 g/mL及以上时,H5N1试验组鸡胚存活率为100%,病毒血凝价为零。因此,银翘散煎煮液在体外对禽流感病毒具有明显的抑制作用。     

丝裂霉素C处理后鼠胚成纤维细胞活力分析

为了探讨丝裂酶素C处理后鼠胚成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)活力的变化规律,试验用10μg/mL丝裂酶素C处理MEF,研究丝裂酶素C处理时间及其处理后细胞接种量、血清浓度和细胞代次对MEF活力的影响。结果表明,用10μg/mL丝裂酶素C处理2和3 h,MEF活力比处理4 h的稳定,处理2 h的MEF活力与处理3 h的没有显著差异;用10μg/mL丝裂酶素C处理3 h后,MEF以(0.8~1.6)×104/孔接种96孔板,其活力比2.0×104/孔和4.0×104/孔接种的稳定;用含体积分数10%犊牛血清培养液培养的MEF活力,比用含体积分数2%,5%,15%和20%犊牛血清培养液培养的稳定;第1,3代MEF活力比第5,7代的稳定。表明,用10μg/mL丝裂酶素C处理2~3 h,第1,3代MEF以(0.8~1.6)×104/孔接种96孔板,用含体积分数10%犊牛血清培养液培养,是利用丝裂酶素C制备MEF饲养层的适宜条件。     

黄芩甙对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞Toll样受体2、3、4、7 mRNA表达的影响

旨在探讨黄芩甙对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞Toll样受体2、3、4、7 mRNA表达的影响。新城疫病毒(NDV)感染鸡胚成纤维细胞,使用MTT法检测黄芩甙对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度,使用荧光定量PCR方法检测不同浓度黄芩甙对染毒细胞Toll样受体2、3、4、7 mRNA在不同时间表达的影响。结果表明,黄芩甙组和病毒对照组细胞TLR2、TLR4和TLR7 mRNA的表达水平起初受到抑制,TLR2和TLR4 mRNA在24 h内呈上升趋势,TLR7 mRNA在16 h内呈上升趋势,TLR3 mRNA的表达水平呈波动性变化。黄芩甙在24 h时能够促进NDV感染细胞TLR2和TLR4 mRNA的表达,且呈剂量依赖性,从而发挥免疫调节作用,具有抗NDV的功能。