产朊假丝酵母尿酸酶的纯化和特性研究

产朊假丝酵母尿酸酶经2次DEAE-cellulose 52层析后比活性提高20倍以上, SDS-PAGE分析发现其含一种约33.0 kD多肽, Sephadex G-200层析发现此天然尿酸酶分子量约134.0 kD. MALDI-TOF-MS分析比活性＞7.0 U/mg样品没有检测到单一肽链, 而丰度最高成分为67.7 kD, 次高成分为131.4 kD. 此酶最适pH值接近8.8, 在pH 7.4时可保留50%以上活性, 37 ℃时4 h内稳定, 米氏常数为(32.8±3.1)μmol/L(n=10), 黄嘌呤的抑制常数为(4.8±0.2)μmol/L(n=3);用蒸馏水透析后失活90%以上, 且随后加NaCl处理后酶活性不能恢复. Cu2+ 和Fe3+在1.0 mmol/L时对此酶有明显抑制作用. 这些结果表明此尿酸酶需通过分子工程改造才能用作治疗高尿酸血症相关疾病的药物.     

产朊假丝酵母原生质体制备的研究

利用产朊假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｕｔｉｌｉｓ）２．２８１株研究了原生质体的制备。结果表明,该菌经复合剂０．１４ｍｏｌ·Ｌ－１β－ＭＥＴ、０．０４ｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ予处理;蜗牛酶浓度为７０ｍｇ·（１０ｍＬ）－１;并于３０℃酶解１２０ｍｉｎ;是制备原生质体的理想条件     

产朊假丝酵母增殖发酵培养基的优化研究

[目的]对产朊假丝酵母培养基进行优化,以提高其产率.[方法l通过单因素试验,研究不同碳源、氮源、无机盐对产阮假丝酵母产量的影响,对产朊假丝酵母发酵培养基成分进行筛选和优化研究,在此基础上,利用响应曲面法对主要影响因素进行回归分析.[结果]获得最优的增值发酵培养基组成为蛋白胨36.32g/L,蔗糖76.17 g/L,磷酸二氢钾1.98 g/L,硫酸镁1.5 g/L,硫酸铵1 g/L.[结论]产朊假丝酵母在优化后的培养基下OD值可达0.916,菌体于重可达11.15 g/L,比对照组提高了2.08倍.     

产朊假丝酵母富硒条件的优化及发酵罐培养

用富硒产朊假丝酵母制备饲料添加剂饲喂家畜家禽可获得富硒农产品。为获取富硒产朊假丝酵母,以产朊假丝酵母为出发菌株,优化摇瓶培养条件(摇瓶装液量、接种量、亚硒酸钠添加量、添加时间和培养液初始p H),通过L₉(3⁴)正交试验,获得最佳发酵工艺,即：装液量为35 mL,初始p H为6.5,接种量8%,培养时间为12 h,亚硒酸钠添加量为15μg/mL,此时最终发酵液中总有机硒含量最高,为9 792.732μg/L,菌体有机硒含量为1 400.362μg/g。用获得的高生物量富硒产朊假丝酵母制作饲料添加剂,通过补料培养,获得生物量为19.128 g/L,发酵液中总有机硒量为10 089μg/L。     

产朊假丝酵母和DCDHCHO联合工艺处理皂素废水

采用产朊假丝酵母预处理和DCD-HCHO絮凝剂再处理的联合工艺处理皂素废水.通过单因素试验和正交试验来分析和确定联合工艺的最佳处理条件.结果表明:1)产朊假丝酵母法预处理的最适条件为温度25℃、pH5.5、接种率10％、发酵时间3 d;2)DCD-HCHO絮凝剂法再处理的最适条件为pH值7、DCD-HCHO投加量4 m...     

一株产朊假丝酵母10 L罐发酵工艺优化

[目的]优化产朊假丝酵母10 L罐发酵条件,提高产朊假丝酵母发酵产率.[方法]在10 L发酵罐中研究溶氧量和pH控制方式对产朊假丝酵母分批发酵的影响.[结果]当装液量为7L且通气量控制在8 L/min、搅拌转速达到300 r/min即可满足产朊假丝酵母生长对溶氧的需求.通过流加碱的方式控制发酵pH环境,结果显示,流加氨水控制pH在5.5时最佳.[结论]通过优化发酵溶氧量和pH,产朊假丝酵母干重产量提高了54;,优化成效明显.     

响应面法优化制备高富硒产朊假丝酵母

考察了发酵条件对产朊假丝酵母富硒能力的影响。通过单因素的筛选,对酵母富硒能力影响较大的3个因素:亚硒酸钠浓度、初始pH值及培养温度,以胞内总硒含量为响应值,利用响应面法对其进行优化。结果显示:在培养时间30 h、加硒时间对数生长中期、亚硒酸钠浓度35 mg·L^-1,初始pH 6.6、接种量10%、培养温度27℃、装液量150 mL/500 mL的条件下,最大的菌体生物量为6.87 g·L^-1;胞内总硒含量达到12 639.7μg·L^-1,硒含量为1 839.8μg·g-1,其中亚硒酸钠转化率为79.1%,有机硒含量占90%以上;胞内实际总硒含量与数学模型理论值12 518.8μg·L^-1相差不显著,响应面法能较好地优化产朊假丝酵母富硒工艺条件。     

一株产朊假丝酵母菌表达体系的研究初报

产朊假丝酵母是一种GRAS生物,已经作为添加剂广泛应用于食品和化妆品行业. 它在作为宿主菌的表达系统方面的研究也有报道.但目前国内尚无产朊假丝酵母通用的高效表达体系的报道.简单介绍了其在国内外的研究进展.并以青贮饲料中的一株产朊假丝酵母为出发菌株,结合项目研究,就构建产朊假丝酵母表达载体的几个元件进行重点评述.研究结果表明:初步构建了一种产朊假丝酵母通用的整合表达载体,对其表达体系的应用进行了初步探索.为微生物青黄贮菌剂的分子改良及应用提供一定的理论基础.     

粟酒裂殖酵母mae1基因的克隆及其在产朊假丝酵母中的整合表达

以粟酒裂殖酵母基因组DNA为模版,逆转录获得cDNA;以cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增,得到苹果酸通透酶(mae1)基因,将其与pMD-18T连接并测序.结果表明cDNA全长为1316 bp,编码438氨基酸,分子质量49ku,与已报道的mae1基因序列的同源性达到99％.mae1与整合型表达质粒...     

产朊假丝酵母C-27利用甜高梁秸秆汁产SCP的培养基优化

应用二次正交旋转组合试验设计方法对产朊假丝酵母C-27产单细胞蛋白(SCP)的发酵培养基组分(甜高粱秸秆汁、葡萄糖、蛋白胨、MgSO4和KH2PO4)进行了优化.结果显示,甜高粱秸秆汁和蛋白胨的浓度对SCP的产量有显著的正效应,而其他组分未表现出显著的影响.产朊假丝酵母C-27产SCP最终的优化发酵培养基配方为:甜高粱秸秆汁220 mL/L、葡萄糖3.25 g/L、蛋白胨37.5 g/L、MgSO4 0.325 g/L 、KH2PO4 0.325 g/L.该优化的发酵培养基配方下SCP产量达8.72 g/L,比初始发酵培养基配方(甜高粱秸秆汁120 mL/L、工业葡萄糖20 g/L、工业蛋白胨20g/L、MgSO4·7H2O 2.0 g/L、KH2PO4 2.0 g/L)下的SCP产量(7.00 g/L)提高了24.57％.     

Utilization of Exogenous Proline by the Yeast Candida utilis

Utilization of labeled proline by the yeast Candida utilis has been studied. Conversion of the labeled material to biochemically related compounds was observed in the metabolic pools in this organism. The kinetic flow of these molecules into protein was observed, and an explanation is proposed in terms of the absolute cellular concentrations and specific activities of the precursors.     

大蒜超氧化物歧化酶的分离纯化及其性质的研究

以壳聚糖为基质的金属螯合亲和层析法纯化大蒜SOD ,得到比活为 1191U/mg的酶蛋白 ,回收率为 71% ,纯化倍数为7.2 9。实验表明 ,经 8mol/L的尿素处理后大蒜SOD活性不发生变化 ,并且可耐 6 0℃高温 1h而活性不下降     

斑马鱼尿酸酶基本特性研究

分别研究了反应环境、处理环境对斑马鱼尿酸酶活力以及稳定性的影响。在不同温度及酸碱度环境下分别测定斑马鱼尿酸酶的活性来确定其最适反应温度、pH值。通过测定在不同温度及酸碱度条件下处理后斑马鱼尿酸酶的残余活力来确定其稳定性。通过测定不同pH值缓冲体系下制备的斑马鱼尿酸酶活力来确定其最佳溶解pH值。用Lineweaver-Burk作图法计算斑马鱼尿酸酶的Km值。斑马鱼尿酸酶最佳溶解pH值为8.0～9.5。其最适反应温度为40～45℃。其最适反应pH值为8.4～9.0。其温度在50℃以下、pH值为7.0～9.0时稳定性最好。另外该酶与尿酸底物反应过程的米氏常数(Km)为18.67μmol/L。     

猪脑中硫氧还蛋白还原酶的纯化与表征

[目的]用新的方法从猪脑中提取纯化硫氧还蛋白还原酶(TrxR)并对其进行表征。[方法]通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换凝胶色谱柱层析、Blue-Sepharose亲和色谱柱层析、Resource Q强阴离子交换色谱柱层析和Superdex 200 prep grade凝胶过滤色谱柱层析等方法,从猪脑中分离并纯化TrxR。采用聚丙烯酰胺电泳法、等电聚焦法、DTNB还原法和胰岛素还原法对TrxR的性质进行表征。[结果]从猪脑中分离并纯化出TrxR,其纯度大于99%,是酶粗提液的6 000倍,最终产率为13.9%。猪脑TrxR的分子量为56.0 kD,等电点为5.0。以DTNB为底物测得其K m和k cat值分别为62.9μmol/L和467 min-1,以硫氧还蛋白为底物测得其K m和k cat值分别为3.9μmol/L和2 813 min-1。[结论]用新的方法从猪脑中纯化得到较高纯度的TrxR,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。     

白梨PGIP的提取、纯化及其特征特性研究

半乳糖醛酸酶抑制蛋白(Polygalacturonase inhibitoryprotein,PGIP)是位于植物细胞壁的糖蛋白,能够抑制真菌半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,PGs)对细胞壁的降解,从而达到抵御病原菌侵入的目的。经高盐法提取和凝胶过滤层析,获得相对纯度为18.9倍的PGIP,保留活性分别为100%和51.6%;经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,相对纯化的白梨PGIP的分子量为29～42 kDa;用径向辐射法和还原糖法试验表明,PGIP活性受pH影响,但对提取液中KCl的浓度及提取时间不敏感;PGIP抑制活性对温度非常敏感,在85℃处理20 min,PGIP失去85%～90%的抑制活性,在100℃下,PGIP活性全部丧失。     

鸡心SOD的分离纯化及部分性质研究

为从新鲜鸡心中获得锰超氧化物歧化酶的电泳纯制品并进行性质研究,将鸡机心匀浆,抽提,正丁醇除脂,丙酮分级沉淀,DEAE-Sepharose层析和Superdex-200层析结果为:酶的比活是1 633U/mg,纯化倍数是139.16,全分子相对分子质量是1.037×105,亚基相对分子质量2.63×104.该酶在50℃～70℃有较好的稳定性,最适温度是40℃,pH值在3～9之间有较好的稳定性.Ca2+、二硫苏糖醇、尿素对鸡心SOD有一定的激活作用,Ba2+和Zn2+对鸡心SOD抑制作用较弱,Cu2+抑制作用较强,低摩尔浓度乙二胺四乙酸二钠对酶有激活作用,高摩尔浓度有抑制作用.     

蛹虫草超氧化物歧化酶的分离纯化及性质研究

以蛹虫草为材料,经过硫酸铵盐析、SephedexG!75柱层析和DEAE!52柱层析,得到纯化的超氧化物歧化酶(SOD),经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白区带,此酶比活力为17855.73U/mg,纯化倍数为53.7,回收率为21.8%。该酶在40℃保温150min,活性不变;在pH值5.0～9.0有较好的稳定性。该酶每亚基含1原子铁,对H2O2和乙醇-氯仿溶液敏感。