基于实时荧光定量反转录PCR技术的动物miRNA表达分析策略

在人体内有约60%的蛋白质编码基因受到到miRNA调控。近年来,miRNA参与调控的与动物生长相关的细胞周期、发育、分化和新陈代谢等多种生物学过程也越来越受到关注。目前针对miRNA表达检测的常用方法有很多,其中基于反转录PCR(RT-PCR)的放大检测技术是应用范围最广,实施手段最灵活的一种研究策略。主要包括miRNA的全定量PCR法(miR-Q)、基于茎环引物的实时荧光定量PCR法、Poly(A) 加尾性通用反转录法、miRNA表达谱的高通量RT-PCR分析和miRNA扩增谱系(mRAP)法。作者对这几种基于实时荧光定量RT-PCR技术的动物miRNA表达分析策略分别进行了介绍,对其原理、方法和应用范畴进行了概括性总结。     

基于UniGene寻找山羊新的miRNA及其试验验证

根据miRNA进化的保守性,以已知动物的miRNA为搜索序列与山羊的UniGene进行BLAST比对,预测山羊新的miRNA,并通过RT-PCR和克隆测序进行验证。对新发现的山羊miRNA进行实时荧光定量,检测其在12个月皮肤及肌肉中的表达量;用基于UniGene的方法获得了5条山羊miRNA候选分子,通过RT-PCR和克隆测序验证,发现这5条miRNA分子在山羊的皮肤和肌肉中均有表达,其中由chi-miR-374b、chi-miR-421和chi-miR-421*构成了山羊miRNA基因簇,chi-miR-2284n是牛和山羊特异的。实时荧光定量结果显示,chi-miR-1839、chi-miR-374b和chi-miR-2284n在2月份皮肤中的表达量明显高于其他月份,chi-miR-421和chi-miR-421*在10月份皮肤中的表达量最高;发现了5条山羊新的miRNA(chi-miR-2284n、chi-miR-421*、chi-miR-421、chi-miR-1839和chi-miR-374b,登录号:JQ002550-JQ002554),补充了山羊miRNA数据库的不足。     

miRNA在猪主要经济性状调控中的研究进展

microRNA（miRNA）是一类广泛存在于真核生物中的内源性单链非编码小RNA分子,长度为21~22 nt,以特异的序列互补结合方式调控基因的表达。在经典的miRNA作用机制中,miRNA通常与靶基因3'UTR种子区序列完全或不完全互补配对,从而在转录后水平调控靶基因的表达。越来越多的报道证实,miRNA还可与靶基因5'UTR区、编码区及启动子区结合,进而参与复杂的基因调控过程。随着高通量测序技术和分子生物学实验技术的发展,大量miRNA被鉴定,其参与调控的生物学机制也被逐渐揭示。大量研究表明,miRNA能够参与动物生殖、生长发育、新陈代谢和疾病调控等生物学过程,对维持正常的生命活动具有重要意义。在猪的遗传改良工作中,对主要经济性状（繁殖、生长发育、胴体肉品质、抗病等）进行改良,选育优良品种,是未来养殖业发展的必然趋势。作者就miRNA生成和作用机制及近年来在猪生殖调控、肌肉发育、脂肪沉积和抵抗疾病感染等方面的研究进行综述,为系统了解miRNA在猪重要经济性状调控中的应用提供参考,并为深入开展相关遗传育种研究工作提供依据。     

miRNA与家禽主要疾病的致病机制研究进展

miRNA是长度约22 nt、具有高度保守性的非编码单链小RNA,通过与靶基因mRNA互补作用,参与基因的表达调控及多种生理生化过程。文章综述了miRNA与家禽主要疾病的致病机制研究概况,以期为进一步深入研究miRNA在防治家禽疾病中的作用提供参考。     

弓形虫感染鼠脾细胞microRNA表达谱的检测分析

MicroRNA（miRNA）是一类约22个核苷酸组成的单链非编码RNA,在分化、发育、肿瘤形成等方面起着重要作用。本研究对弓形虫RH株感染小鼠脾细胞miRNA的表达进行了特异性基因芯片检测分析,并应用荧光定量RT-PCR方法进行验证。结果表明,感染鼠脾细胞中与免疫应答及细胞增殖和肿瘤发生相关的三大类miRNA中,有39种表达下调,同时有36种表达上调。上述结果揭示,弓形虫感染机体后伴随着靶细胞功能性miRNA表达谱的显著改变,这为进一步研究弓形虫感染致病的分子机制开辟了新的方向。     

两种内参基因在鸡循环miRNA相对定量检测中的比较分析

选择5S rRNA和snRNA U6作为内参基因,比较分析其在鸡血清循环miRNA定量检测中的应用效果。结果显示,5S rRNA和snRNA U6两个内参基因在不同发育阶段血清中表达稳定,5S rRNA的Cq值在24.4~25.0之间,snRNA U6的Cq值在24.0~24.5之间,组间Cq值的变化幅度小于0.6;同一测定miRNA的组内Cq值变异也较小。两种内参基因条件下,3个测定循环miRNA的表达变化规律均一致。表明5S rRNA和snRNA U6是适于鸡血清循环miRNA定量检测的内参基因。     

MicroRNA对皮肤毛囊发育调控的研究进展

miRNA是一类由19～25个核苷酸组成的内源性非编码单链小分子RNA,通过与靶基因mRNA3’端非编码区配对结合,降解靶mRNA或阻碍其翻译,进而调节靶基因的表达。文章综述了miRNA的生源说及功能、miRNA在皮肤毛囊中的表达检测以及miRNA对皮肤毛囊发育的调控。     

检验医学干化学分析技术进展

随着社会的发展,医学逐渐发达,针对各种疾病的医学手段也不断产生与得到进步,检验医学是一门专门应对一些医学样品进行检验的一门学科,而检验医学干化学分析技术是在临床医学中重要的一种医学技术,可以对样品进行精确度很高的检验,他涵盖了化学,光学,数学,物理学等等一些知识,通过这些知识技术的应用可以帮助样品获得更加精确的检测,通过这样的技术检验,可以帮助医生更加了解病人的情况,针对电源的情况进行及时的治疗,这样可以帮助病人早日恢复健康。本文通过分析检验医学的含义以及特点,指出检验医学干化学分析技术的具体含义以及重要作用,希望给相关的医学工作人员一些借鉴性的参考意见,推动检验医学干化学分析技术的进一步发展。     

miRNA在哺乳动物性腺发育中的功能

MicroRNA(miRNA)作为一种内源性的非编码RNA,以影响靶基因表达的方式来调节机体功能。miRNA能调控哺乳动物性腺(睾丸和卵巢)的发育,促进精子与卵母细胞的分化成熟,影响受精卵的发育过程,并可能作为诊断生殖疾病卵巢癌的重要指标。本文对miRNA的生物合成过程,miRNA在哺乳动物性腺发育以及卵巢癌变过程中的调控功能进行了综述,提出该领域主要发展方向是miRNA在哺乳动物性腺发育中的体内功能研究,希望以分子生物学和生物信息学手段,从分子、系统等不同角度阐明单一某种miRNA在哺乳动物性腺发育及卵巢癌变过程中的具体调节机制和信号通路情况。这为研究哺乳动物生殖疾病,选育畜牧生产中优质品种提供了新的思路和途径。     

microRNA在乳腺肿瘤诊断中的研究进展

microRNA(miRNA)是一类长度约18nt~23nt的非编码单链RNA,广泛存在于动植物中,通过促进靶mRNA降解或抑制mRNA翻译对基因的表达进行调控,miRNA的异常表达影响细胞的发育、增殖、分化、凋亡等。miRNA在肿瘤形成发展中可作为肿瘤抑制基因或癌基因存在。miRNA可作为乳腺癌早期诊断与预后复发的潜在标志物,同时miRNA差异表达对肿瘤机制的研究具有重要的作用,论文就miRNA的生物学功能、检测方法及与乳腺肿瘤的关系,分析miRNA作为潜在的标志物在肿瘤诊断中的研究进展。     

山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞的miRNA表达谱变化分析

本研究旨在分析山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和正常MDBK细胞差异表达的miRNA,以探索miRNA在CPIV3感染过程中的作用及其调控机制。将CPIV3感染MDBK细胞,利用高通量测序技术检测分析MDBK细胞中miRNA表达谱,并筛选差异表达的miRNA。对靶基因进行GO注释和KEGG富集。结果显示,有37个miRNA显著差异表达(P0.001),其中18个miRNA在病毒感染中上调,19个miRNA在病毒感染中下调。经RT-qPCR方法验证5个差异表达的候选miRNA,结果与高通量测序分析有很好的一致性。进一步GO功能注释表明:差异表达的miRNA靶基因生物学功能相对集中在免疫调节、细胞生物调控及细胞新陈代谢等生物过程。这些靶基因参与多种细胞的信号通路,包括细胞黏附分子、B细胞受体信号通路、MAPK信号通路、代谢通路、黏合斑、钙离子信号通路和趋化因子信号通路等。本研究为进一步探讨CPIV3致病机制奠定了基础。     

miRNA对乳腺发育及泌乳调节作用的研究进展

microRNA(miRNA)是一类在转录后调节基因表达的非编码RNA,已有大量研究表明,miRNA参与多种生命活动的调节,包括细胞增殖与分化、激素分泌、新陈代谢、肌肉和脂肪的形成发育、免疫应答反应、疾病的发生和肿瘤的形成等.近年来miRNA已成为生命科学研究中的亮点.随着miRNA的发现及其功能研究的深入,有关乳腺生长发育和泌乳调控的研究也进入了miRNA调控的新层面.文章总结了乳腺发育和泌乳过程中miRNA表达的阶段特异性及健康乳腺和乳腺病变时miRNA的差异表达,综述了miRNA对乳腺发育和泌乳的调节作用,旨在为从miRNA层面研究乳腺发育及泌乳提供新思路.     

传染性法氏囊病病毒感染细胞内源性microRNA表达差异分析

细胞内源性microRNA（miRNA）在宿主与病原相互作用过程中发挥着重要的调节功能。为了分析细胞内源性miRNA与传染性法氏囊病病毒（IBDV）的相互作用,用IBDV弱毒和强毒分别感染鸡胚成纤维细胞（CEF）和SPF鸡,24h后,取感染CEF和法氏囊组织,提取细胞总RNA,用Hy3/Hy5双色荧光标记,与miRNA芯片杂交,进行芯片内标准化、芯片间标准化、表达差异比较以及聚类分析。结果显示：在IBDV弱毒感染的CEF中,有17个细胞内源性miRNA表达上调,17个miRNA表达下调;在IBDV强毒感染的鸡法氏囊组织细胞中,有30个细胞内源性miRNA表达上调,18个miRNA表达下调。根据表达差异显著的miRNA序列设计引物,用荧光定量RT-PCR方法验证芯片检测结果,2种方法的检测结果一致。结果表明,IBDV感染可诱导细胞内源性miRNA表达变化,这些上调或下调的miRNA能调控细胞内多种代谢和信号传导途径发生异常,引起细胞及组织器官发生病理学变化。     

茎环RT-PCR检测马立克氏病毒感染鸡相关miRNA方法的建立

本研究旨在建立一种检测马立克氏病毒人工感染鸡相关miRNA表达变化的RT-PCR方法,探讨该方法在miRNA定量检测方面的应用价值.试验选择6个具有典型肿瘤结节的马立克氏病毒感染脾脏样品作为研究材料,同时采用6个正常鸡的脾脏样品作为对照材料.利用特异的茎环反转录引物以及miRNA上下游引物对gga-miR-181a进行基于SYBRGreen Ⅰ的荧光定量PCR检测,并以U6为内参基因、2<'-ΔΔα>法检测gga-miR-181a的相对表达量.结果,在马立克氏病毒人工感染鸡的脾脏和正常鸡的脾脏中成功检测出gga-miR-181a-1的表达.证明茎环RT-PCR法能用于检测马立克氏病毒人工感染鸡的相关miRNA,并具有准确、快速、节约成本的优点.     

miRNA在动物繁殖性能中的研究进展

miRNA是近年来发现的一类长度在18～25 nt的小分子RNA，它们不编码mRNA，但是在基因的转录水平或转录后水平上发挥重要的调控效应，控制着机体生长发育、分化、代谢和疾病等许多生物过程。近年来的研究表明，miRNA在哺乳动物生殖过程中起重要作用，miRNA表达异常与多种生殖道疾病密切相关．引起生殖力下降甚至不育。综述了miRNA的发现、生物合成与作用机制，以及在动物繁殖性能中的研究进展，以期为miRNA深入研究提供参考。     

miRNA调节卵泡颗粒细胞凋亡及其机制的研究进展

微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类内源性非编码RNA,具有广泛的基因表达调控作用,可以在转录后水平通过影响靶基因来调控相应蛋白质的表达,进而调节细胞的生命活动。miRNA在哺乳动物卵泡颗粒细胞中表达,并调控颗粒细胞的凋亡。颗粒细胞作为卵巢卵泡中数量最多的细胞群,在卵泡发育过程中起着至关重要的作用,不仅为卵母细胞提供营养物质,还调控其发育和成熟。颗粒细胞凋亡是导致卵泡闭锁的重要原因,影响卵泡的数量和质量从而影响雌性动物的繁殖性能。颗粒细胞凋亡过程受多种因素的调控。文章简述了miRNA对卵巢颗粒细胞凋亡的调控作用及其机制,其中包括miRNA通过调控激素分泌和细胞凋亡相关因子的表达进而调节颗粒细胞的凋亡,miRNA对颗粒细胞凋亡相关信号通路的影响,miRNA调控颗粒细胞凋亡导致的卵巢相关疾病,并总结了对颗粒细胞凋亡有调控作用的miRNA,以及miRNA在疾病诊断和治疗中的潜在作用,以期为后续相关卵巢疾病的发病机制和治疗方案研究,以及提高雌性哺乳动物生殖性能提供指导和参考。     

动植物miRNA实现跨物种基因调控的研究进展

近年来,有研究发现动物体内存在一类非自身的miRNA,这类miRNA主要是随着食物进入,并在动物体内发挥一定的调控功能,这一研究发现可为从植物中提取特殊物质作为添加剂或是为探究中草药治疗疾病的作用机理提供一定的理论支持,拓宽了外源性动植物miRNA的研究方向。从动植物miRNA的形成过程、结构特点、跨物种后稳定性、组织特异性表达、靶基因结合方式、生物学功能以及跨物种调控等方面,系统阐述了动植物miRNA进行跨物种调控的作用机制及研究进展,对动植物miRNA未来的研究方向和应用进行了展望,以期为miRNA在疾病治疗和营养补充方面的开发利用提供参考。     

miR-27a和miR-378在中外猪种背最长肌中的差异表达研究

为了研究miRNA表达量与肉质风味表型指标的相关性,试验采用荧光定量PCR技术(Q-PCR)检测了4个猪种背最长肌中miR-27a和miR-378的差异表达。结果表明:背最长肌组织中2种miRNA的表达水平在4个猪种中趋于一致。相关性分析显示,2种miRNA在背最长肌中的表达水平与肌内脂肪含量和硫胺素含量呈正相关,与肌纤维直径、眼肌面积和瘦肉率呈负相关。表明miR-27a和miR-378对猪肉品质具有正调控作用,而对猪胴体品质具有负调控作用。该研究可为阐明miRNA在猪肌肉生长和脂肪沉积过程中的调控机制提供基础数据。     

猪卵泡发育过程中差异表达miRNA的鉴定

本研究旨在探讨miRNAs对猪卵泡发育过程的影响。以卵泡期第4天杜洛克猪中等M1卵泡(直径3.0~4.9 mm)与M2卵泡(直径5.0~6.9 mm)为试验材料,通过miRNA芯片杂交检测筛选到在杜洛克母猪中等M1卵泡与M2卵泡之间的差异表达miRNAs,随机抽选若干个检测到的miRNA用Q-PCR的方法对芯片结果进行验证,并预测差异表达miRNA的靶基因,进行GO及KEGG分析。结果表明:芯片检测出347个猪miRNA的表达,筛选得到表达量高且差异大的34个miRNA;随机筛选出6个差异表达的miRNA经Q-PCR验证,与基因芯片结果一致;分析得到的靶基因涉及最多的为Jak-STAT、细胞因子及其受体的相互作用信号通路,且两个信号通路均与卵泡发育相关。结果提示:检测筛选得到的差异表达miRNA可能对猪的卵泡发育过程具有调控作用。     

miRNA的研究进展及其展望

近年来,miRNA已成为生命科学领域的研究热点。文章综述了miRNA在真核和原核生物中的功能,以及miRNA的分子克隆、生物信息学等预测和鉴定方法,并阐述了miRNA研究中的问题及应用前景。