猪瘟病毒广西地方流行株GX-3/98的致病性及其与兔化弱毒株的免疫相关性

从广西南宁某猪场分离1株病毒（GX-3/98）,通过RT-PCR扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2基因主要抗原编码区,与猪瘟石门系强毒株及兔化弱毒株核苷酸序列同源性分别为80.6%和81.1%,属于基因Ⅱ群,subgroup 2.1亚型。该毒株经本动物传3代,均不表现典型的猪瘟临床症状。用猪瘟兔化弱毒疫苗免疫后,以此分离病毒攻毒,进行免疫保护相关试验,结果免疫组100%（2/2）获得保护,且在攻毒前、后扁桃体HCFA检测均为阴性。对照组（非免疫猪）攻毒后50%（1/2）死亡,另1头猪耐过。扁桃体HCFA检测,于攻毒后1周开始出现阳性结果,且一直持续到猪死亡的第79天。本试验结果初步表明,我国现行使用的猪瘟兔化弱毒苗对目前猪瘟病毒流行毒株仍具有良好的保护力。GX-3/98流行株为1株毒力较低的猪瘟病毒,能够长时间散毒。     

79105株猪瘟病毒的生物学特性

某厂生产的猪瘟兔化弱毒乳兔苗,接种仔猪后出现死亡病例。从疫苗(79105批)中分离出非疫苗株猪瘟病毒,定名为79105株猪瘟病毒。这株病毒的某些特性与标准猪瘟强毒株不同:毒价低,接种非免疫仔猪后     

猪瘟疫苗种类及使用

用早期我国研制成功的猪瘟结晶紫疫苗预防猪瘟效果良好,但灭活疫苗产生免疫力慢,免疫期短,生产成本高,还要繁殖强毒制苗,存在散布病原的危险。自 1946 年开始,国外相继有 Raker、Kopramskc 和 Hadson 等培育兔化弱毒,但对猪仍保持一定的毒力而诱发严重反应,甚至导致流产和死胎。这些弱毒株不能单独注射,要与抗猪瘟血清共同注射,难以推广应用。 将猪瘟强毒通过非宿主异源动物传代,可以减弱病毒致病力。就全世界来说,公认安全有效,没有残余致病力的弱毒疫苗株主要有三种:第一,中国“54-III 系”,又称“C 株”兔化弱毒疫苗株;第二,日本 G …     

猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株复合实时荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立

根据GenBank中的猪瘟病毒强毒和弱毒株基因组序列设计了1对针对猪瘟病毒的通用引物和2条分别针对猪瘟病毒强毒和猪瘟兔化弱毒疫苗株的特异性TaqMan水解探针，建立了一种能区分猪瘟病毒强毒和兔化弱毒疫苗株的复合实时荧光定量RT—PCR检测方法。结果显示，该方法能将我国大陆流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒株与猪瘟兔化弱毒疫苗株完全区分开来，而不与其他猪源病毒发生非特异反应，分别可检测到初始模板中41．8和81．5个拷贝的病毒RNA，与已建立的复合RT-套式PCR的敏感性相近，两种方法对152份样品检测的符合率达96．9％～100％。通过对8份猪瘟兔化细胞疫苗效价的检测，证实本方法与兔体反应热测定法有一定的相关性，可用于猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗的定量和鉴别检测。     

我国猪瘟病毒基因流行变异研究

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性和致死性病毒性传染病,该病流行广泛,发病率和死亡率较高,是危害我国乃至世界养猪业的主要疫病之一。我国猪瘟病毒流行毒株主要分为猪瘟病毒基因Ⅰ群和基因Ⅱ群,且以基因Ⅱ群为主,尚未发现基因Ⅲ群。基于E2基因序列分析表明,我国猪瘟病毒的流行毒株正在向远离猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV株)方向变异;E0基因序列分析表明,流行株与疫苗株相比虽然发生了一定程度的变异,但是在RNase活性关键位点高度保守,未出现变异。     

猪瘟兔化弱毒疫苗的研究概况

猪瘟病毒兔化弱毒株因其优良的免疫原性,成为我国至今唯一使用的猪瘟疫苗株。本文就猪瘟兔化弱毒株的生物学特性、猪瘟兔化弱毒组织疫苗和细胞疫苗的研制以及疫苗的应用进行了综述。     

猪瘟病毒遗传发生关系分析

利用反转录及ＰＣＲ扩增并测定了中国猪瘟兔化弱毒兔组织毒,Ｃ－株细胞疫苗毒和近期甘肃省７个地区的１０个流行野毒株的Ｅ２基因核酸序列。通过序列比较和系统发生关系分析发现;Ｃ－株兔组织毒,Ｃ－株细胞毒和中国５０－６０年代流行的石门强毒株同属于组群１;近期猪瘟流行毒株同属于组群２的两个不同亚组群,其流行毒株与疫苗毒株有较大的差异,表明猪瘟流行毒株向远离疫苗毒株的方向演变。     

猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法的建立

本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析,验证上述方法。结果RT-PCR扩增片段为825bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322bp和503bp 2个片段,兔化弱毒疫苗株则不能被酶切,检测出RNA的最低浓度为0.028 6μg.mL-1;8株流行野毒株都含GGGCCC序列(ApaⅠ酶切位点),2株疫苗株相应序列为GAGCCC,不能被ApaⅠ酶切;8株流行野毒株属于基因2群,2株疫苗株与HCLV遗传关系近,为基因1群。建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP检测方法,为猪瘟的防控提供有效手段。     

新型反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别猪瘟强毒和弱毒疫苗方法的建立

对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守区设计1对通用引物,扩增片段为609bp,并在该对引物扩增区域内设计针对疫苗弱毒的特异引物,扩增片段为237bp,建立一种能够区分猪瘟病毒强毒和疫苗弱毒的敏感、特异、重复性好的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别诊断方法。该方法能将我国大陆地区流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒与疫苗弱毒完全区分开来,且不与牛病毒性腹泻病毒及其他猪源病毒发生非特异反应。应用本试验建立的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)方法可以及早对猪瘟作出准确诊断,并可将强毒感染猪迅速从弱毒疫苗免疫猪群中筛选出来,减少了未感染免疫猪被误杀的可能性。     

中小型猪场猪瘟免疫防控工作的注意问题

中小型猪场要有效控制猪瘟,除了搞好饲养管理外,免疫是最好的措施.目前,随着养猪业的快速发展,猪瘟病毒的毒株也在不断变化.因此,免疫防控方法必须不断改进,才能取得良好效果. 1疫苗选择 目前猪瘟免疫多使用猪瘟兔化弱毒单苗(猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗、猪瘟兔化弱毒兔脾淋组织苗),效果较为确定.过去常用的猪瘟-猪丹毒-猪肺疫"三联苗"已无法提供对猪瘟足够的保护力,已很少使用.     

我国部分地区猪瘟病毒流行株的基因差异

采用 RT-PCR方法 ,从我国 1 0个省、市、自治区收集的 2 3个猪瘟病毒 ( CSFV)流行毒株中 ,扩增了CSFV E2基因中主要抗原位点编码区。对各扩增片段进行了序列测定 ,通过计算机分析构建了系统发生树 ,并确定了它们间的遗传相关性。结果表明 ,2 3个流行毒株中的 1 8株属基因 群 ,占 78.2 6%;另外 5个流行株与传统石门强毒、兔化弱毒株属基因 群 ,占 2 1 .74 %。两群间测序区的核酸同源性只有 78.90 %。此外 ,根据序列差异程度 ,将基因 群流行株分为 3个亚群 ,各基因群 CSFV在地域分布上未发现有明显的特征性。本研究初步揭示了我国较大范围内流行的 CSFV毒株与传统的石门强毒和疫苗用兔化弱毒在抗原基因上存在较大的差异 ,以及我国猪瘟病毒流行株在地域分布上的多样性     

猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究

从全国7个省市1200多份可疑猪瘟病料中分离出9个猪瘟病毒（HCV）野毒株，编号分别为HCV－01－09。将9株野毒分别通过PK15细胞分别通过PK15细胞传6代，测其毒价，并提纯做电镜观察，结果表明：毒价范围在10^2-10^7TCID50，电镜观察均可清晰地见到直径为25－70nm，略呈圆形的病毒颗粒，具有较完整的囊膜和纤突结构。从9株野毒中选取5株经猪瘟阴性猪各传3－4代，测其毒力、病原性、致死性，结果表明：各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这5株野毒做免疫保护相关性试验，结果证明：攻毒后的疫苗接种猪100％保护，而攻毒对照猪100％死亡，且对照猪在攻毒1周后便出现猪瘟野毒感染，而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒，表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及1982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究，结果表明：猪瘟病毒可分2个基因组6个基因亚组，HCV－02、03、06、07等4个野毒株与国内的C株、石门强毒株、国外的C株、日本GPE株、ALD株、意大利Brescia株均属同一基困组，而HCV－08株及郑州株等2个野毒与法国的Alfor株同属另一个基因组。     

高效价猪瘟活疫苗的田间试验

1946年开始,国内外研究人员采用非猪源动物或用细胞传代驯化猪瘟病毒,培育猪瘟弱毒疫苗.1954年周泰冲等用猪瘟强毒经家兔传代减毒,并经继代纯化成功培育出一株能适应家兔的猪瘟病毒变异毒,该毒株对猪无致病性、遗传性能稳定[1-3]、具有良好的免疫原性,这就是国内外广泛使用的中国猪瘟兔化弱毒株(Chinese strain,简称“C株”).目前中国广泛使用C株来生产猪瘟活疫苗,按疫苗毒源类型为牛睾丸细胞源、兔源、传代细胞.本试验主要对高效价猪瘟活疫苗(STK克隆传代细胞源)进行田间应用效果跟踪,通过对收集到的数据进行对比分析,评估该疫苗的免疫效果.     

影响猪瘟疫苗质量的几个关键因素分析

正猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的以高热和出血为特征的,高度接触性、致死性传染病,严重危害养猪业生产。我国自1956年开始使用猪瘟兔化弱毒疫苗以来,猪瘟疫情逐步得到了控制。虽然我国驯化的猪瘟兔化弱毒疫苗毒株(C株)是目前世界上最优秀的猪瘟疫苗毒株且在我国广泛使用多年,但猪瘟在我国仍时有发生。其可能原因之一是猪瘟疫苗质量跟不上当前防疫的完全需求。笔者根据自己从事动物疫苗研发、生产和技术服务的工作体会,     

猪瘟E2亚单位疫苗攻毒保护效力研究

猪瘟E2亚单位疫苗是一种用杆状病毒载体系统表达的猪瘟病毒E2重组蛋白,与油佐剂按比例混合、乳化制成的新型灭活疫苗,可区分感染和接种疫苗动物,有助于猪场的猪瘟净化。为评价该疫苗免疫效力,本研究用猪瘟E2亚单位疫苗与猪瘟兔化弱毒疫苗(传代细胞源)分别免疫靶动物,二免后2 w用强毒人工感染试验动物,连续测温16 d,并记录试验猪临床症状,结合病理剖检、组织器官病毒含量测定结果,比较不同疫苗保护力。结果显示:对照组猪攻毒后体温高热稽留,表现出典型猪瘟症状,攻毒后11 d内5/5发病死亡,尸检剖检呈典型猪瘟病理解剖学变化;免疫猪全部健活,未表现任何猪瘟症状,组织器官剖检无病变。结果表明,猪瘟E2亚单位疫苗与活疫苗保护效力相当,可为靶动物提供可靠的免疫保护效力。     

辽宁地区猪瘟病毒流行株E2基因序列分析

为了解近年来辽宁地区猪瘟流行毒株的遗传变异情况,本试验利用RT-PCR方法对2006年～2011年辽宁地区发病猪群中猪瘟病毒感染情况进行了检测并获得了20株猪瘟病毒E2基因部分编码序列的扩增片段,测序后得到276 bp的E2基因编码序列;并在此基础上利用DNAStar和MegAlign等软件对所测定的20株毒株与国内外参考毒株的相应序列进行了同源性分析及氨基酸序列比对.结果表明,20株猪瘟野毒株分别属于基因2.1、2.2亚型和1.1亚型,其中基因2.1亚型已经成为辽宁地区猪瘟病毒的优势流行毒株.属于基因2.1亚型的猪瘟野毒株与疫苗株之间的同源性在76.8％～80.5％之间,与经典强毒Shimen株的同源性在77.4％～81.1％之间.而病毒E2基因变异位点主要分布在所测序列的前30个氨基酸,与强毒Shimen株、疫苗株相比其变异率高达20％以上.说明近期流行毒株的变异呈现一定的多样性,并且多数毒株已向远离强毒Shimen株、疫苗株方向变异.     

RT-PCR法快速检测与鉴别诊断猪瘟病毒野毒株和三个兔化弱毒疫苗株的研究

基于猪瘟病毒基因组中富含T的插入序列建立起的简捷一步法RT-PCR技术,用于同步检测与鉴别野毒株和疫苗株。依据猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株3′NTR独立存在富含T的插入序列,设计特异性的扩增引物,使用简捷一步法RT-PCR或巢式PCR之后用琼脂糖凝胶电泳或多毛细管电泳方法进行分析,能检测到并且准确鉴别在临床标本中的古典猪瘟病毒野毒株和兔化猪瘟疫苗株。这些检测技术至少可用于3个兔化弱毒疫苗株LPC、HCLV和C-株的检测。野毒株RT-PCR检测限量是6.3TCID50/mL,巢式PCR检测限量是0.63TCID50/mL。在前一次研究中,在猪瘟兔化弱毒疫苗株的基因组的3′NTR发现有12～13nt的富含T的插入序列;本次研究中,在LPC/PRK和LPC/TS兔化疫苗株的基因组中发现2个长为42和36nt富含T的插入序列。这些长为12、36、42nt富含T的插入序列增加PCR片段的大小,有利于遗传标记对猪瘟病毒野毒型和不同兔化疫苗株间的快速检测和鉴别。     

猪瘟病毒致弱机制研究进展

猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种严重的猪的传染病，其有效控制主要依赖于猪瘟兔化弱毒疫苗株的应用，但该毒株致弱的机制尚未完全阐明。对近年猪瘟病毒结构蛋白、非结构蛋白和非编码区对毒力影响的国内外研究成果进行了综述，以期为猪瘟病毒致弱相关机制的研究以及新型疫苗的研发提供参考。     

新型猪瘟疫苗研究进展

<正>亚单位疫苗安全无致病性,相对弱毒疫苗产生中和抗体的滴度较高,但保护力较弱。而重组活载体疫苗虽具有免疫原性高、保护效果好等优势,它们在猪瘟防疫中的价值值得进一步关注。猪瘟是一个古老的烈性传染性疾病,我国大部分猪场都存在猪瘟问题,疫苗免疫是对其最有效的预防手段。猪瘟兔化弱毒疫苗(C株)的应用有效地控制了该病在我国的流行,但目前仍有很多缺陷和不足,比如定量方法不精准,在病原监测中无法区分野毒感染与疫苗接种猪只的问题,因而它已经不能完全满足以后国家猪瘟扑灭计划的需要。     

猪瘟兔化弱毒疫苗的临床试验

1效力 用我国生产的猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞苗免疫无猪瘟抗体及抗原的易感猪，每头皮下注射1头份，14天后分别攻击猪瘟野毒，每头皮下注射猪瘟血毒2毫升。结果表明，猪瘟弱毒细胞苗对9株野毒均具有坚强的保护力，免疫组100％保护，对照组76．5％死亡。以猪瘟荧光抗体法（HCFA）检查，