牛支原体感染动物模型的建立及其在评估灭活疫苗免疫效力上的应用

为了找到能够成功模拟牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)感染的方便可行的替代动物,并为灭活疫苗的初步探索做出贡献,采用原代次、第80代次、第160代次的M.bovis,每代分别设1.0×109、1.0×1010和1.0×1011CFU/m L 3个浓度对健康家兔进行感染试验,通过临床表征、剖检观察、病理组织切片镜检、分离培养、PCR法进行验证,显示每个代次M.bovis均呈阳性,且浓度越高、代次越低,症状越明显。家兔可成功模拟M.bovis感染情况,并确定M.bovis在体外连续传代培养过程中毒力明显减弱但仍具有致病性,第160代次M.bovis可作为疫苗备选株;将160代次M.bovis灭活后与铝胶盐佐剂1∶1混合制成灭活疫苗对家兔进行免疫试验,在第1次免疫后第14天进行第2次免疫,在第28天时对免疫组和空白对照组家兔进行攻毒试验,结果显示免疫组家兔经血清抗体法检测出体内具有较高水平的抗体,且经上述方法检测免疫组结果均呈阴性,空白对照组检测结果均呈阳性。结果表明:弱毒的M.bovis灭活疫苗也能够起到免疫防御的作用,为M.bovis疫苗回归本动物试验的研究提供了有力的数据支撑。     

不同厂家猪肺炎支原体灭活疫苗免疫效力对比实验

本研究旨在评价不同厂家猪肺炎支原体灭活疫苗的免疫攻毒保护效果。选择4周龄仔猪25头,随机分为5组,每组5头猪,分别免疫四种猪肺炎支原体灭活疫苗（即疫苗A组、疫苗B组、疫苗C组、疫苗D组）,E组为攻毒对照组,不做任何处理,在同等条件下隔离饲养。各疫苗按照对应的说明书进行免疫,免疫后第14、28天进行采血,检测支原体抗体水平,一免后28 d时,所有免疫组连同攻毒对照组,各气管注射猪肺炎支原体CJ株5 m L/头（含0.01 g肺组织毒）。攻毒后饲养观察28 d,对所有实验组动物进行观察临床症状。A组实验动物攻毒后未出现咳嗽、腹式呼吸等支原体临床症状,B-D组实验猪攻毒后偶尔出现轻微间隔性咳嗽,E组实验动物攻毒后出现连续性咳嗽,个别猪出现腹式呼吸等临床症状。攻毒后第28天进行病理剖检。结果表明,攻毒对照组猪4/5头出现典型猪肺炎支原体病变,在肺脏尖叶、心叶、膈叶前1/3部位以及中间叶,出现“肉样”或“胰样”实质样病变,界限明显。B～D组解剖后个别猪出现典型猪肺炎支原体病变,A组实验动物解剖后个别猪肺脏出现零星病变,剩余实验动物肺脏均未出现猪肺炎支原体病变。根据肺部病变较少率计算,A～D组病变...     

甲醛灭活牛支原体的条件探究

为了优化牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)的灭活条件,确定灭活M.bovis的甲醛浓度和时间,为M.bovis灭活疫苗的研发提供可靠依据,试验采用不同浓度的甲醛对M.bovis进行灭活,每隔12 h测定M.bovis的最大代谢活力,并将灭活的M.bovis传代和感染家兔呼吸道以观察灭活效果,进一步通过血清抗体效价来测定免疫原性。结果表明:在36 h内终浓度为0.5%的甲醛就能将M.bovis彻底灭活,但其免疫原性大大降低,不利于灭活疫苗的制备;终浓度为0.3%的甲醛处理60 h后只能将M.bovis部分灭活;终浓度为0.4%的甲醛灭活48 h后能将M.bovis彻底灭活,免疫原性略微降低不影响免疫效果,为最佳灭活条件。     

致犊牛肺炎牛支原体南疆株的分离鉴定及oppF基因序列分析

本研究旨在调查新疆喀什某规模化奶牛场的犊牛死亡原因,并确定病原体.无菌采集3份因肺炎死亡的犊牛肺脏病料样品.采用牛支原体专用液体培养基和1.0%牛支原体琼脂固体筛选培养基从3份病死犊牛肺脏病料中分离得到2株牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis),分别命名为M.bovis-NJ-1和M.bovis-NJ-2.通过菌落形态学观察、特异性PCR和oppF测序比对对分离株进行鉴定.结果显示,2个分离株在固体培养基上的菌落呈现典型的"煎蛋状",且Dienes染色特点符合牛支原体菌落着色特征,中心呈深蓝色;PCR能扩增出牛支原体特异的448 bp目的片段;2个分离株的oppF基因序列与牛支原体国际标准株PG45的同源性分别为96.7%和95.3%.结果表明,引起犊牛发病死亡的病原是牛支原体,本研究为犊牛支原体肺炎的快速诊断和防制提供依据.     

致犊牛肺炎牛支原体新疆北屯株的分离鉴定及oppF基因序列分析

为确诊新疆北屯市某牛场致犊牛肺炎死亡的病原,试验无菌采集2头病死牛肺脏组织分离培养牛支原体,并进行特异性PCR鉴定及oppF基因的序列比对。结果表明:分离获得2株牛支原体,分别命名为M.bovis BT-1和M.bovis BT-2;2株分离株的菌落形态呈典型的"煎蛋样";PCR扩增出牛支原体oppF基因片段,与预期大小一致;2株分离株的oppF基因与国际牛支原体标准株PG45的同源性分别为97.3%和97.8%;与HB0801、CQ-70W在同一进化分支上,亲缘关系较近。     

牛支原体湖北株的分离鉴定及其oppF基因的进化分析

牛支原体(Mycoplasma bovis)是引起犊牛肺炎、关节炎和成牛乳房炎的主要病原之一。从湖北恩施暴发牛支原体的肉牛场(70头引种肉牛出现20%的死亡)分离得到一株牛支原体,命名为HB2015,并对其进行了保藏(保藏号:CCTCC M 2016559),进化分析结果显示该菌株与M.bovis NM2012内蒙株亲缘关系较近,为牛支原体的防控提供了理论依据。     

牛支原体感染家兔试验

为了探究牛支原体(Mycoplasma bovis)是否可以感染家兔,将不同浓度梯度的M.bovis分离株通过滴鼻法感染家兔呼吸道,观察感染后家兔的临床症状、剖检病理变化和肺脏组织病理变化等来确定家兔的感染情况,并从病变家兔的肺脏和血液中分离出病原,纯化后进行聚合酶链式反应(PCR)鉴定,进一步测序做亲缘关系的分析,血清抗体检测。结果表明,1.0×108 CCU/mL的M.bovis能引起家兔发病,1.0×1010 CCU/mL的M.bovis感染后家兔出现轻微的精神状态;剖检可见胸腔积水、肺脏轻微的大理石样病变且伴随水肿、结节等;从肺脏病变组织切片可见肺泡腔出血,肺泡间隙增宽,细支气管上皮黏膜坏死和脱落;将家兔血液和肺脏分离到的病原菌经PCR鉴定和测序,结果鉴定为M.bovis,且具有较高的抗体水平,证实家兔为M.bovis的易感动物,为M.bovis动物模型的建立及M.bovis的深入研究提供试验基础。     

一例牛支原体与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断与治疗

某肉牛养殖场经长途运输的犊牛暴发肺炎,并发生大规模死亡。经主诉和临床症状的分析、肺脏病变观察、病原的形态学检查、分子生物学鉴定,结果确诊为牛支原体(M.bovis)与荚膜血清多杀性巴氏杆菌(A型P.mutocida)混合感染。根据药敏试验结果推荐该场使用恩诺沙星肌肉注射辅以电解多维对患病牛进行治疗,疫情得到有效控制。     

蜂胶佐剂鸡毒支原体灭活疫苗的研制

收获鸡毒支原体培养液,甲醛灭活后加入一定比例蜂胶并进行乳化,制备3批蜂胶佐剂灭活疫苗。3批疫苗的物理性状、无菌检验、甲醛、硫柳汞含量等均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》(2000年版)中同类疫苗的基本要求;安全检验结果表明,受试鸡群无局部和全身反应,体温及采食量正常;效力检验结果表明,在免疫30d后攻毒,3批疫苗的免疫保护率均在60%以上。上述各指标显示,蜂胶佐剂鸡毒支原体灭活疫苗达到国家相关规定,为免疫预防鸡毒支原体病提供了新的方案。     

牛支原体NM2012株致病性研究

[背景]牛支原体是牛呼吸道疾病综合征的重要病因之一,可以引起牛的多种呼吸道疾病,给养殖业带来巨大的经济损失。接种疫苗是预防牛支原体感染的最有效的手段。[目的]通过人工感染牛体试验,了解牛支原体NM2012株的致病性,为后续疫苗研究提供生产用菌种。[方法]将牛支原体NM2012株第6代、第12代、第20代菌株分别经人工气管注射感染2周龄犊牛,攻毒后连续观察27 d,记录攻毒后犊牛的临床症状,在感染后第14天,从各攻毒组分别选取3头犊牛、空白对照组选取2头犊牛进行扑杀,第27天将剩余实验犊牛处死,观察肉眼病理变化和组织学病理变化。[结果]3个代次的NM2012菌株均对犊牛具有致病性,可引起比较典型的牛支原体肺炎症状和病理变化。[结论]NM2012株6-20代仍然具有对牛的致病性,可以作为今后疫苗研究的潜在菌种。     

牛传染性鼻气管炎病毒LN01/08株灭活疫苗的研制

为研制牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)灭活疫苗,本研究以国内分离鉴定的IBRV LN01/08株为种毒,优化病毒增殖条件,获得病毒滴度达108.0TCID50/mL,将其灭活制备疫苗.为比较不同免疫佐剂的效果,分别以矿物质白油和Montanide ISA206佐剂配制灭活疫苗,进行牛体免疫试验.临床观察和血清中和抗体检测结果表明,Montanide ISA206佐剂乳化的疫苗在降低副反应和增强免疫效果方面优于矿物质白油佐剂.应用Montanide ISA206佐剂制备3批灭活疫苗,并对其安全性和免疫保护效果进行测定.结果表明该疫苗安全可靠,对强毒攻击可产生较好的抵抗力,攻毒保护率达80%.疫苗在2℃～8℃保存12个月后仍能保持良好的免疫效果.     

牛支原体灭活疫苗免疫程序及母源抗体消长规律研究

为评价不同剂量的自主研发牛支原体灭活氢氧化铝佐剂疫苗对怀孕母牛免疫后抗体消长规律和免疫效果,本试验选择产前30～15d围产母牛70头,随机分为7组,每组10头牛,间隔15d,采用不同剂量免疫,定期采集初乳和犊牛血清,采用已建立的牛支原体间接ELISA检测方法检测初乳乳清和犊牛血清中的抗体滴度,统计分析其抗体消长规律。结果表明,使用自主研发牛支原体灭活氢氧化铝佐剂疫苗免疫怀孕母牛无红肿、发热等症状,是安全可靠的;用不同剂量疫苗免疫怀孕母牛,初乳乳清抗体中牛支原体Ig G抗体水平在奶牛分娩后3h达到一个峰值,随着奶牛产后时间的延长抗体水平呈逐步下降,在奶牛产后96h,抗体值均在0.3以下;A组的抗体最低,B组、C组、D组抗体均低于E组和F组;E组和F组抗体滴度较高,两者无差异。不同剂量疫苗免疫母牛所产犊牛哺食初乳后,犊牛血清中牛支原体Ig G抗体在犊牛出生后24h达到最高,随着犊牛日龄的增加,抗体滴度呈现逐步下降趋势;在A组、B组和C组抗体呈现层次不齐的状况,D组抗体水平高于A组、B组、C组,低于E组和F组;E组和F组抗体水平较高,且维持时间较长。研究结果为牛支原体疫苗的免疫程序制定提供了...     

山羊痘灭活疫苗免疫保护试验

将山羊痘GT4-STV42-56种毒在犊牛睾丸细胞上繁殖,收获毒液,用0.1%甲醛溶液灭活,加适量206佐剂,制成山羊痘油佐剂灭活疫苗.将疫苗以不同剂量皮下免疫接种不同种群的山羊.免疫后21 d,用AV40株强毒进行攻毒保护试验.结果显示,免疫剂量达0.5 mL时,疫苗对内蒙绒山羊的保护率为100%,对广西黑山羊的保护率为80%.实验表明,山羊痘灭活疫苗对山羊的免疫效果确实可靠.     

重组H5N3亚型禽流感细胞毒灭活疫苗免疫佐剂效果的评价

为评价佐剂对疫苗免疫效果的影响,本试验以反向遗传学技术拯救的重组H5N3亚型禽流感病毒为种毒,对国产矿物油以及赛比克公司提供的MontanideTM ISA 70M VG(简称7OM)和MontanideTM ISA 206 VG(简称206)3种佐剂制备的灭活疫苗进行了SPF鸡免疫攻毒试验.结果表明国产矿物油佐剂组与70M佐剂组都能对SPF鸡100%保护,206佐剂组仅能保护40%,攻毒的SPF鸡发病,但不死亡;从抗体水平上比较发现70M佐剂组稍好于国产矿物油佐剂组,但两组之间差异不显著,而这两组与206佐剂组差异极显著.这3种佐剂组免疫鸭均能够诱导产生较高的抗体水平,70M佐剂组优于国产矿物油佐剂组和206佐剂组,但3者差异不显著.用70M系的8种佐剂MontanideTM ISA 70 essai Mi(i-1-8)(简称70Mi)佐剂乳化的疫苗免疫SPF鸡,结果表明70M佐剂组效果最好.攻毒后免疫鸡不排毒,而且无临床症状;统计学分析显示70M佐剂组与所有70Mi佐剂组差异均显著.这些结果表明70M佐剂可以作为新型疫苗佐剂用于禽流感疫苗的制备.     

牦牛ETEC灭活疫苗的研制及免疫效力试验

制备了耗牛ETEC铝胶灭活苗、油佐剂苗和蜂胶灭活苗。分别使用3种佐剂灭活苗进行对比试验。经抗体监测表明在免疫后7天，蜂胶苗产生的抗体效价最高（2^7），随着时间的推移，油苗抗体儿价最高（2^9-10)，于免疫后29日，使用ETEC进行攻毒，免疫兔全部保护，对照兔全部死亡。证明牦牛ETEC3种佐剂灭活疫苗均能有效保护家兔免受ETEC攻击。     

自然感染牛分支杆菌(M.bovis)牛的扁桃体病变

对 32头结核菌素阳性牛的上呼吸道表面、腭和咽扁桃腺及相关淋巴结进行病理学和细菌学检查 ,发现 5头牛腭扁桃体组织存在结核病变。第 6头牛的腭和咽扁桃体也见有相似病变。从 4头牛的扁桃体和 8头未发现病变牛的腭或咽扁桃体培养出了 M.bovis,有 10头牛之上呼吸道表面 M.bovis培养为阳性。自然感染牛分支杆菌(M.bovis)牛的扁桃体病变@刘伯淳     

牛冠状病毒灭活疫苗的免疫效力试验

为了评价制备的牛冠状病毒灭活疫苗的免疫效力,试验选用分离鉴定出来的牛冠状病毒(BCV-YC分离株)为制苗种毒,接种HRT-18细胞进行增殖,收集上清液进行超速离心浓缩,最后加入甲醛灭活制成油乳剂灭活疫苗,分别接种小鼠和妊娠母牛。结果表明,疫苗不仅使小鼠具有一定的保护力,而且使妊娠母牛也能产生较高的抗体水平,犊牛攻毒试验证明,产生的母源抗体能使初生犊牛抵抗牛冠状病毒的攻击。说明制备的牛冠状病毒灭活疫苗对抵抗牛冠状病毒感染具有良好的保护性。     

绵羊肺炎支原体灭活疫苗的研制

绵羊肺炎支原体引起绵羊及山羊非典型肺炎,分布广泛,危害严重。本试验旨在研制绵羊肺炎支原体灭活疫苗。采用改良Thiaucourt's培养基对绵羊肺炎支原体临床分离株SC02进行培养,收集生长滴度达10⁹ CCU/mL的培养物,浓缩20倍后灭活,制备油佐剂疫苗。选择绵羊肺炎支原体抗体阴性的6月龄健康山羊经颈部皮下接种该疫苗5.0 mL/只(2×10¹⁰ CCU/mL),免疫后21 d,试验组与对照组山羊经气管接种绵羊肺炎支原体强毒Y98株5.0 mL/只(≥2×10¹⁰ CCU/mL),测量体温、观察临床症状,并于攻毒后30 d剖检,观察肺脏病理变化。结果表明,试验组5只山羊均获得免疫保护,全部精神状况良好,临诊和剖检均未见异常;对照组5只山羊出现咳嗽、发热、流鼻涕等症状,剖杀后见肺脏组织有典型的肺炎病理变化。本研究结果表明,该疫苗对山羊有良好的免疫保护作用。     

牛支原体疫苗的研究进展

牛支原体（Mycoplasma bovis,M.bovis）是一种造成全世界范围内育肥牛和奶牛多种疾病综合征的重要病原体。临床症状主要包括长期性肺炎及多发性关节炎（CPPS）、呼吸道疾病综合征（BRD）、乳腺炎及生殖器官疾病。牛支原体能感染多种组织和器官,也能从健康的牛体内分离,是威胁畜牧业生产的主要病原体。由于临床上抗生素治疗效果不佳,预防或控制牛支原体感染最好的选择是研发有效的商业可用的疫苗。牛支原体疫苗的研究已历经多年,虽然存在很多问题,但也取得了一定进展。文章对牛支原体弱毒疫苗、灭活疫苗及亚单位疫苗的研究进展进行了总结,并讨论了疫苗设计的优化方案,为合理设计和研发有效的牛支原体防控技术提供参考。     

牛支原体疫苗的研究进展

牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)是一种造成全世界范围内育肥牛和奶牛多种疾病综合征的重要病原体。临床症状主要包括长期性肺炎及多发性关节炎(CPPS)、呼吸道疾病综合征(BRD)、乳腺炎及生殖器官疾病。牛支原体能感染多种组织和器官,也能从健康的牛体内分离,是威胁畜牧业生产的主要病原体。由于临床上抗生素治疗效果不佳,预防或控制牛支原体感染最好的选择是研发有效的商业可用的疫苗。牛支原体疫苗的研究已历经多年,虽然存在很多问题,但也取得了一定进展。文章对牛支原体弱毒疫苗、灭活疫苗及亚单位疫苗的研究进展进行了总结,并讨论了疫苗设计的优化方案,为合理设计和研发有效的牛支原体防控技术提供参考。