杂色鲍幼苗“急性死亡脱落症”病原菌分析

从“急性死亡脱落症”发病期的杂色鲍幼苗体内和病苗附着的薄膜上，共分离到4株优势菌，即NA0301、NA0302、NA0303和NA0304。经人工浸泡感染实验证明，从病幼苗体内和苗附着的薄膜上分离到的优势菌株NA0301和NA0302是杂色鲍幼苗的致病菌，它们均为革兰氏阴性、短杆状、极生鞭毛，能运动。常规生理生化和Biolog细菌鉴定系统测试结果表明，菌株NA0301与溶珊瑚弧菌（Vibrio coralliilyticus）的亲缘关系最近，而菌株NA0302与溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）的亲缘关系最近。为了进一步确定它们的分类学地位，分别测定了溶珊瑚弧菌和溶藻弧菌的16S rDNA序列，分析相关细菌相应序列的同源性，并构建系统进化树。结果表明，菌株NA0301与溶珊瑚弧菌的亲缘关系最近，菌株NA0302与溶藻弧菌的亲缘关系最近。因此，菌株NA0301和菌株NA0302分别鉴定为：溶珊瑚弧菌和溶藻弧菌。[中国水产科学，2006，13（4）：655—661]     

九孔鲍人工育苗技术探讨

采用阴干加紫外线处理海水催产的方法，进行九孔鲍室内人工育苗研究，使用雌亲鲍1343粒，平均规格5．7cm，雄亲鲍117粒，平均规格5．8cm，共获得受精卵9500万粒，受精率91．5％，以塑料薄膜作为附着基质，共附着匍匐幼体607万粒。经过64～73d的附着期间的管理，剥离0．21～1．0cm稚鲍347万粒，成活率达57．2％，又经过98～102d的培育，获得规格1．0～2．5cm的鲍苗121．5万粒，平均成活率达35．0％。     

Settling and raising postlarval abalone Haliotis diversicolor supertexta (Lischke) on microparticulate diets embedded in a layer of alginate

Two 21 day experiments were conducted to determine whether microparticulate diets could be used to substitute for diatoms for raising (Experiment 1) as well as settling and on‐growing (Experiment 2) Haliotis diversicolor supertexta postlarvae. The experiments were conducted in 10 L flow‐through tanks and each diet had three replicate tanks. In experiment 1, three experimental microparticulate diets supplied by a commercial feed company, labelled SF‐15, SF‐15 (T) and JFY‐13–1, were used, and in experiment 2, SF‐15 and SF‐15 (T). Artificial diets were compared to diatoms in terms of supporting growth and survival. The survival rate for experiment 1 was lowest for JFY‐13–1 (0%) and highest for diatoms (12.9±0.8%). The final size of postlarvae fed SF‐15 and SF‐15 (T) was significantly greater than that of postlarvae fed diatoms, 973±193 μm and 996±220 μm compared to 786±141 μm. In experiment 2, a total number of 501 larvae settled onto plates covered with SF‐15, 254 on SF‐15 (T) and 1085 on diatoms. The highest survival rate was 33.1±6.9% for SF‐15 and the lowest was 17.3±5.0% for diatoms. However, the final length of postlarvae fed diatoms was significantly greater than SF‐15 and SF‐15 (T); 1018±379 μm compared to 728±89 μm and 717±90 μm. The artificial micro diets used in this study were comparable to diatoms in terms of grow and survival of postlarval H. diversicolor supertexta.     

引起南方九孔鲍苗大规模死亡的一株病原菌的分离鉴定及其致病性研究

从汕尾一鲍鱼场的变白掉板九孔鲍苗中分离到一批菌株,对其中的21号菌株进行了深入的研究。回归感染试验证明其为病原菌,API条带分析表明该菌为副溶血弧菌,药敏试验揭示该菌对诺氟沙星、阿米卡星、四环素、新生霉素、新霉素有抗药性,但对头孢唑啉、庆大霉素、氯霉素、多粘霉素敏感。     

不同单胞藻饵料培养九孔鲍早期稚贝的研究

以单种培养的6种底栖硅藻和具有底栖习性的亚心形扁藻(Platymoras sp.)为饵料,培养九孔鲍(Haliotis diversi-color supertexta)受精后12 d的早期稚贝并观察其生长和存活,培养期为28 d,目的是筛选能维持早期稚贝高存活率和生长率的藻种。实验结果表明,培养稚贝成活率最高的3个藻种由大到小依次是爪哇曲壳藻亚缢变种(Achnanthes javanica var.)、流水双眉藻(Amphora fluninensis)和亚历山大菱形藻(Nitzschia alexandrina),使稚贝生长最快的3个藻种由大到小依次是流水双眉藻、爪哇曲壳藻亚缢变种和亚历山大菱形藻。研究结果揭示了适宜的底栖硅藻种类对鲍早期稚贝阶段生长和存活的重要性。个体小或者胞外产物量大的藻类很可能对九孔鲍早期稚贝的培养是有利的。     

九孔鲍幼鲍生长性状的遗传参数估计

采用不平衡巢式设计方法和人工授精技术,1个父本配3个母本,建立九孔鲍(Haliotis diversicolor super-texta)12个半同胞家系和36个全同胞家系.在40日龄、120日龄、180日龄、240日龄时分别对所建36家系个体测量壳长,壳宽与体质量.采用单性状约束最大似然法(Restricted Maximum Likelihood Method, REML)估计九孔鲍(Haliotis diversicolor supertexta)各阶段体质量,壳宽与壳长性状的遗传参数.结果表明,九孔鲍幼鲍在40、120、180、240日龄时壳长遗传力估计值为(0.13±0.09)~(0.56±0.15),壳宽遗传力估计值为(0.13±0.06)~(0.62±0.13),体质量遗传力估计值为(0.18±0.15)~(0.26±0.08),均属于中等遗传力.另外,从性状的表型相关与遗传相关可以得出,九孔鲍稚鲍在不同日龄壳长、壳宽与体质量的表型相关和遗传相关均为正相关(P≤0.05).表型相关系数为0.66~0.94,遗传相关系数为0.85~0.98,研究结果表明,以3个主要生长性状之一作为选育目标,均能达到遗传改良的目的.     

低氧胁迫对九孔鲍免疫防御因子的影响

为了解低氧胁迫条件下九孔鲍免疫防御因子的变化及机体抗病力变化, 将九孔鲍置于不同的溶解氧环境中, 观测相关免疫因子变化。结果显示, 在水温为(22.1?1.3) oC, 盐度为30.72?0.54, pH值为8.20?0.14的海水环境中, 溶解氧含量由(7.49?0.14) mg/L下调至(2.53?0.16) mg/L后120 h内, 平均体质量为(14.25±2.21) g的九孔鲍未见死亡, 而每只鲍注射5.0?10⁵ CFU 副溶血弧菌后120 h内实验鲍的累计死亡率高达91.11%?7.70%, 比对照组(11.11%?3.83%)累计死亡率高出80%, 血淋巴抑菌清除率下降至?(3 340.47%?298.57%), 显而易见, 低氧胁迫使得九孔鲍拮抗副溶血弧菌感染的抵抗力显著下降。低氧(2.53?0.16) mg/L胁迫下, 九孔鲍血淋巴细胞数量(THC)下降30.62%?4.87%、血淋巴细胞吞噬率下降62.77%?5.79%、呼吸爆发产生的超氧阴离子数量下降22.21%?5.89%。低氧胁迫下九孔鲍血淋巴细胞内MPO活性上升(9.63%?7.59%)~(22.90%?13.73%)、CAT活性提高(7.68%?6.83%)~(56.28%?13.96%), 反映出低氧胁迫下九孔鲍体内应激反应产生的物质氧化加剧, 血淋巴细胞内产生大量的活性氧自由基。溶解氧含量由(7.49?0.14) mg/L下调至(4.51?0.12) mg/L后九孔鲍已明显处于低氧胁迫和应激反应状态, 120 h内的累计死亡率达到37.78%?3.85%, 血淋巴抑菌率下降至883.56%?123.22%; THC、血淋巴细胞吞噬率、呼吸爆发产生的超氧阴离子O₂^- 数量等最大降幅分别达到12.51%?6.59%、21.90%?15.84%、12.93%?5.74%; MPO活性在原有水平的?(10.61%?4.20%)~(7.13%?6.45%)之间波动, CAT活性在?(5.17%?18.08%)~(16.26%?10.85%)之间变化。     

九孔鲍育苗池附着基上底栖微藻群落及其多样性

2006年9月14至10月26日对福建省漳浦县下蔡九孔鲍(Haliotis diversicolor supertexta)育苗池进行定点采样。检测结果共鉴定底栖微藻24属62种,其中硅藻21属59种,绿藻、蓝藻和褐藻各1种。附着基上底栖微藻的优势种有12种,全部为硅藻,如盾卵形藻微小变种(Cocconeis scutellum var.parva)、小形舟形藻(Navicula parva)、咖啡双眉藻(Amphora coffeaeformis)、琴式菱形藻(Nitzschia panduriformis)等。优势种的优势度突出。常见种有25种,少见种有27种。优势种和常见种多是能够适应底栖环境的种类。附着基上底栖微藻种类及多样性指数育苗早期波动大,后期逐渐稳定,底栖微藻多样性指数平均为0.980～1.959,结果表明,底栖微藻群落结构的演变与鲍幼体摄食活动有很大的相关性。     

杂色鲍健康苗种与患病苗种异养细菌致病毒力因子的比较研究

2002年以来,南方杂色鲍苗出现大规模死亡的问题,严重影响到南方鲍产业的发展。为寻找病因,于2004年自广东深圳下沙鲍鱼场培苗过程中变白掉板的杂色鲍苗以及官湖养殖场健康鲍苗各分离到19株和15株异养细菌,在此基础上研究了它们蛋白酶、淀粉酶、明胶酶、磷脂酶的产酶能力及溶血现象,并对它们的产酶能力及溶血能力进行了比较分析。结果表明,虽然来自下沙病鲍苗的菌株比来自官湖的健康鲍苗的溶血能力差;但它们大多数具有较强的分泌蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、磷脂酶的能力。考虑到胞外酶是细菌的毒力因子之一,据此推测,下沙鲍鱼场鲍苗发生脱板死亡的原因可能与这些菌株能分泌胞外酶有关。     

鲍破腹病的防治技术研究

破腹病是鲍养殖生产中的常见病，每年的3-6月和8-10月为其高发期，外套膜破裂是其最主要症状，病鲍的死亡率可达50-90％。通过研究确认了副溶血弧菌（Vibrio parahaemo-lyticus）为鲍破腹病的致病菌。该菌对鲍具有较强的致病性，注射、创伤、浸泡等多种感染方式皆可引起鲍出现破腹和死亡现象，其对21种常用抗菌药物的敏感性都不太强，中度敏感药物只有庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、新霉素、红霉素、复方新诺明等。通过药敏性、经济性、便捷性比较，确定复方新诺明为鲍养殖生产中破腹病的主要防治药物，有效率达80％以上。     

水源水处理技术在九孔鲍苗种生产中的应用研究

本研究将海水水源水处理技术应用于九孔鲍苗种培育生产中,连续三年每个年度育苗均获成功,累计培育出商品鲍苗116.18万粒。而仅使用常规砂滤海水培育鲍苗的对照组,相同的季节在不同场所用相同的管理办法,采苗后15~40天,鲍幼体全部死亡。因此,认为水源水处理的海水培育鲍苗是稳定生产的关键。     

湛江东海岛鲍鱼养殖场水质分析

为了监测湛江东海岛鲍鱼养殖场的水质状况,2011年春季对湛江东海岛九孔鲍养殖场的水质进行采样分析,并应用单项指标评价和富营养化评价等方法,对水质状况进行了评价。结果表明,该养殖场水体采样点的水温为16.0～17.5℃,盐度是22,pH值在7.83～7.90之间,均符合我国第二类海水水质标准。各采样点的溶解氧(DO)和生化需氧量(BOD5)也符合第二类海水水质标准,但化学需氧量(COD)值在14.88～15.36 mg/L之间,与第二类海水水质标准相比严重超标;各采样点的无机氮(DIN)均以NO 3--N为主,DIN值在1.053～1.569 mg/L之间,DIN含量严重超过我国第二类海水水质标准。该养殖场水体属于氮富营养化。     

盐度和胁迫时间对九孔鲍α-淀粉酶基因表达量的联合效应分析

采用中心复合设计和响应曲面法研究了盐度和胁迫时间对九孔鲍(Haliotis diversicolor supertexta)?-淀粉酶基因表达量影响的联合效应,旨在为九孔鲍盐度驯化及海区推广提供指导。实验设定盐度范围为22~40,时间范围为0~72 h,建立了盐度、胁迫时间与?-淀粉酶基因表达量之间关系的定量模型,并通过分析明确了盐度和胁迫时间的最优组合。结果表明,盐度对九孔鲍?-淀粉酶基因表达量影响的一次效应不显著(P0.05),而二次效应极显著(P0.01),说明盐度与九孔鲍?-淀粉酶基因表达量之间为非线性关系。随盐度升高,淀粉酶基因表达量呈先上升后下降的变化趋势,当盐度为31时淀粉酶基因表达量最大,此时九孔鲍消化能力最强。胁迫时间对淀粉酶基因表达量影响的一次效应显著(P0.05),二次效应不显著(P0.05),表明胁迫时间与九孔鲍?-淀粉酶基因表达量之间呈线性关系,即随着胁迫时间的延长,淀粉酶基因从开始低水平表达逐渐升高并恢复至正常表达水平。盐度和胁迫时间之间不存在交互作用。对实验结果建立模型可知,?-淀粉酶基因表达回归模型达极显著水平(P0.05),且失拟项不显著(P0.05),表明实验拟合出的方程有效。回归方程的决定系数为80.05%,校正系数65.80%,预测系数50.18%,表明方程拟合度较好,模型选择较为恰当,可以为不同盐度和胁迫时间诱导下的淀粉酶基因表达量变化提供参考依据。     

不同类群九孔鲍免疫防御机能的比较

对不同类群的九孔鲍细胞与体液免疫机能进行比较,结果表明,不同类群的九孔鲍免疫机能具有显著的差异性,复壮鲍(养殖10个月,个体大小为51.8～59.2mm)细胞与体液免疫机能都明显高于退化鲍(养殖20个月,个体大小为37.4～43.1mm)(P<0.01),与野生九孔鲍(个体大小为67.7～76.7mm)相比,复壮鲍细胞免疫机能略高于野生鲍,体液免疫机能则明显低于野生鲍。九孔鲍血细胞在吞噬活动中具有呼吸爆发产生活性氧的功能与特点,活性氧的产生与九孔鲍自身生理、环境温度以及异物数量等因素有显著的相关性(P<0.01)。环境温度由25℃下降至18℃,九孔鲍的细胞与体液免疫机能都有明显的下降。退化鲍在25℃和18℃条件下血淋巴液的抗菌活力水平差异性不明显。酚氧化酶存在于九孔鲍血淋巴液中,但其活性水平不高,在各类九孔鲍之间的差异性也不明显,不能确认为九孔鲍的主要体液免疫因子。     

弧菌和大肠杆菌感染对杂色鲍无细胞血淋巴中几种酶活力的影响

将杂色鲍(Haliotis diversicolor)注射感染大肠杆菌(E.coli)和副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus),在感染后第4、8、12、24、48、96、192小时分别采集无细胞血淋巴,测定碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)和超氧化物岐化酶(SOD)的活力.结果表明,弧菌组ACP的活力在第24小时比对照组显著增高;弧菌组的ALP与对照组相比,在第8小时显著增高,第48小时极显著升高,第96小时显著下降.弧菌组的SOD活力在24小时与对照组相比显著降低.而大肠杆菌组ALP、ACP和SOD的活力跟对照组相比,各个时相均无显著差异.由此可见,杂色鲍对致病菌和非致病菌可能有着不同的免疫机制.     

高锰酸钾及甲醛对九孔鲍受精卵及面盘幼虫的毒性试验

用不同浓度高锰酸钾溶液及甲醛对九孔鲍受精卵和面盘幼虫进行毒性试验。结果表明:高锰酸钾对九孔鲍受精卵的6hLC50、12hLC50分别为:2.66×10-6,2.03×10-6,;对九孔鲍面盘幼虫的24hLC50、48hLC50和安全浓度分别为:4.34×10-6,2.82×10-6,0.357×10-6,甲醛对九孔鲍面盘幼虫的24hLC50、48hLC50和安全浓度分别为:38.5×10-6,31.05×10-6,6.05×10-6。     

盐度对九孔鲍摄食_生长及存活的影响

九孔鲍摄食人工饲料的盐度范围为２０￣３８,其中较适宜的盐度范围为２５￣３５,在此盐度范围内,小规格鲍（平均壳长１．３０ｃｍ,平均体重０．３７ｇ）的壳长日增长为９１．５￣１０２．３μｍ,日增重为８．６０￣１２．５５ｍｇ;大规格鲍（平均壳长２．７ｃｍ,平均体重２．３ｇ）的壳长日增长为５６．３０￣８１．８０μｍ,日增重为１２．６８￣２２．４８ｍｇ,其最适生长的盐度为３０￣３５,存活率为９７％￣１００％。     

理化因子对杂色鲍血蓝蛋白酚氧化酶活性影响的研究

以邻苯二酚为底物研究部分理化因子对杂色鲍（Haliotis diversicolor）血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响。结果表明,血蓝蛋白酚氧化酶活性最适温度34℃、最适pH6．4;铜离子（Cu^2＋）能极其显著增强血蓝蛋白的酚氧化酶活性,增强率为264％,而乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、镁离子（Mg^2＋）和锌离子（Zn^2＋）则能极其显著地抑制其活性,EDTA的抑制效率最高,抑制率为52．8％,Mg^2＋和Zn^2＋的抑制率分别为27．8％和25％。钙离子（Ca^2＋）对血蓝蛋白酚氧化酶活性影响不显著。     

三倍体九孔鲍的育种和养成技术研究

当 5 0 %九孔鲍受精卵出现第一极体后 ,以 6 -DMAP为诱导剂 ,用不同的浓度和不同的持续时间抑制第二极体的释放诱导三倍体 ;并进行了生产性苗种培育和养成试验。结果表明 ,6 -DMAP的诱导浓度为30 0μmol·dm-3 、诱导持续时间为 10min时 ,其胚胎的三倍体率为 90 %以上 ,并且胚胎的孵化率高达 85 % ,幼体的畸形率较低 ,为 5 0 %～ 5 5 % ;经过 7个月培育 ,试验组养成鲍的三倍体率为 6 5 %以上 ;试验组养成鲍的平均壳长比对照组增长 10 % ,平均体重比对照组增重 30 %。与二倍体鲍相比较 ,三倍体鲍在壳长增长和体重增重等方面 ,显示了显著的优势 [t>t0 .0 1( 58) ]。