鸡大肠埃希氏菌致病性,菌毛表达及血凝特性

观察比较了鸡大肠埃工菌某些分离株腹腔接种,气管接种对１日龄鸡的致病性,研究了在体外不同培养条件下,菌株菌毛的表达情况,菌株的血凝谱及血凝特性。     

大肠埃希氏菌表面菌毛黏附因子多价菌毛疫苗的研制

为了预防仔猪黄痢,选取ETEC野生分离菌株HN2001(K88ab)、HN2002(K88ac)、HN2003(K88ad)、HN2004(K99)、HN2005(987p)、HN2006(F41)培养后用低温磁力搅拌法提取到菌毛,制成5批多价菌毛混合油乳剂灭活苗,实验室试验结果表明,5批多价灭活疫苗对小白鼠的平均保护率达95.0%,为进一步进行田间试验提供了理论依据,并将为生产上防治仔猪黄痢提供一种保护范围更加全面的生物制品.     

江苏境内鸡源大肠埃希氏菌的某些生物学特性

从江苏九个蛋鸡场４７忌疑似大肠杆菌病的病，死鸡的肝，脾，心包液，腹水，输卵管，脑实质，眼球液中分离鉴定出２３株大肠埃希氏菌，分离率为４８．９４％。对其中１７株进行血清型鉴定，共有１１种血清型，其中Ｏ２０，Ｏ７８，及Ｏ８９较为多见，分别占待检菌株的１１．７７％，１７．６５％和１１．７７％，其余为Ｏ９，Ｏ１８，Ｏ２６，Ｏ３０，Ｏ３６，Ｏ８８，Ｏ１３１及Ｏ１４９，其中Ｏ９。Ｏ１９，Ｏ３０，Ｏ３６，Ｏ１３     

鸡源致病性大肠埃希氏菌的耐药性

研究了分离江苏地区若干鸡场的２９株鸡源致病性大肠埃希氏菌的耐药性,结果表明,所有菌株对ＣＦＺ,ＴＯＢ敏感,耐药率为０,对ＮＥＯ,ＫＡＮ,ＧＥＮ,ＰＩＰ耐药率约为６．９％,ＣＴＮ,１３．７９％;ＣＭＰ,３４．４８％,对ＳＴＲ,ＣＯＳ,ＶＡＮ,ＥＲＹ耐药率较高,分别为６５．５２％,７２．４２％,８２．７６％,９３．１０％,待检菌株多药耐药现象严重,有２７株（９３．１０％）有２种或２种以上药物耐药,多药     

内蒙古自治区部分地区鸡胚和雛鸡致病性大肠埃希氏菌的分离及鉴定

为了摸清内蒙古自治区鸡致病性大肠埃希氏菌的血清型及其它生物学特性而进行了本课题的研究。内蒙古自治区七个盟市的九个具有代表性的养鸡场中从死鸡胚和死雏鸡中分离到203株大肠埃希氏菌。死胚的分离率平均为20％,雏鸡为35％。经血清型鉴定发现所分离的大肠埃希氏菌分别属于O_8、O_(78)、O_(15)、O_(113)、O_(26)、O_(149)、O_2、O_(20)、O_(91)、O_(111)、O_(29)血清型,其中以O_8和O_(78)分布最广,上述血清型中除O_(149)无致病性外,均属于鸡致病性大肠埃希氏菌血清型     

蓝狐脑型大肠埃希氏菌的分离鉴定

从有神经症状的病死蓝狐脑组织中分离出两株大肠埃希氏菌，两株菌对小白鼠致病性强，对痢特灵、氨苄青霉素等敏感。     

大肠埃希氏菌耐药性水平传递研究

以实验室分离大肠埃希氏菌菌株E11-83(耐链霉素)和E6-203(耐萘啶酮酸)为供体及受体菌,研究供体及受体菌的含量比、接合培养介质、氧气量、抗生素诱导、接合时间、温度等因素对接合率的影响。结果发现,供体与受体菌比例为1∶8时,接合率最高,为2.4×10-4;有氧条件下膜接合率最高,为2.5×10-4;添加低质量浓度阿莫西林对于大肠埃希氏菌的接合率影响较小;培养16 h接合率达到最高,为3.5×10-4;接合温度27℃时接合率最高,为3.1×10-4。     

鸡源性大肠埃希氏菌产β-内酰胺酶的检测与耐药性分析

用GYZ-15E和API—ID32E对菌株进行鉴定;用纸片扩散法和头孢硝基噻吩法检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLa）和AmpC酶;耐药情况采用纸片扩散法。大肠埃希氏菌的产酶率为53．85％,其中AmpC酶为28．57％。超广谱β-内酰胺酶（ESBLa）为71．43％;产AmpC酶阳性株多为多重耐药菌;氨苄西林、阿莫西林、环丙沙星、三代头孢敏感性低,庆大霉素、氨曲南敏感率高。需要加强对大肠埃希氏菌产卢一内酰胺酶的检测。庆大霉素、氨曲南是产β-内酰胺酶大肠埃希氏菌感染的首选药物。     

鸡大肠杆菌1型菌毛疫苗的免疫原性

将由DNA-Star软件分析得到的具有1型菌毛抗原差异性的鸡大肠杆菌M10(O11)、GX7(O78)及YR10(O18)株,分别经营养肉汤37℃、48 h大容量培养后,提取O18菌毛制成单价1型菌毛油乳剂亚单位疫苗,制备O18全菌灭活疫苗及O11、O78、O18多价灭活疫苗。将4周龄SPF鸡分别免疫接种O18菌毛油乳剂疫苗(每雏菌毛免疫量200μg)和O18菌毛菌体灭活疫苗,均隔离饲养至7周龄,进行后胸气囊攻毒。结果表明,未免疫鸡的死亡率为66.67%~88.88%;免疫鸡用同源菌株攻毒死亡率为0;用异源菌株YR17(O2)攻击后死亡率为6.25%~41.17%。另有SPF鸡免疫O11-O78-O18多价菌毛菌体灭活油乳剂疫苗,隔离饲养至7周龄同法攻击,结果显示,免疫鸡用同源混合菌株攻击的死亡率为13.33%,未免疫攻击的死亡率为70.00%;免疫鸡用异源菌株O2攻击的死亡率为3.33%,未免疫鸡为61.53%。表明多价菌毛1型灭活疫苗不仅具有良好的免疫原性,而且具有一定的交叉保护作用。     

鸡大肠杆菌(O50)菌毛抗原气雾免疫和菌毛油乳苗皮下免疫效果比较研究

比较了鸡大肠杆菌（Ｏ５０）菌毛抗原液气雾免疫与菌毛油乳苗皮下免疫的效果。油乳剂疫苗皮下免疫与菌毛液气雾免疫攻毒后的发病率分别是１３．３３％和２０％,病变差异不显著（Ｐ〉０．０５）,而阳性对照组攻麦发病率为８０％,病变差异显著。结果,鸡大肠杆菌菌毛液气雾免疫与菌毛油乳剂疫苗皮下注射免疫效果接近。     

3个血清型鸡源大肠杆菌1型菌毛蛋白抗原位点变异分析

采用Goldkey及DNA Star分析软件对发表的3个不同血清型的鸡大肠杆菌1型菌毛结构基因(pilA)进行同源性及抗原位点分析。结果显示,3种鸡大肠杆菌(O_1、O_(78)及O_(88))l型菌毛pilA基因相似性为91.36％～98.38％,所编码的氨基酸同源性为93.50％～97.84％;3种血清型鸡大肠杆菌(O_1、O_(78)及O_(88))1型菌毛蛋白二级结构在1～73位及150～185位氨基酸的二级结构基本相似,而111～150位氨基酸的α螺旋与β折叠的数量有所不同。菌毛蛋白亲水性、抗原性及抗原决定簇预测表明,来源于3种血清型大肠杆菌的1型菌毛蛋白在l～110位及150～184位氨基酸存在相似的二级结构及抗原位点,且不同血清型之间存在一定的共同抗原。     

鸡源大肠杆菌1型菌毛菌株粘附鸡呼吸道上皮的电镜观察

用电子显微镜观察了鸡大肠杆菌 (O78) 1型菌毛在不同温度中的表达情况。细菌在营养肉汤中 37℃培养 4 8h可表达大量的菌毛 ,而 18℃培养 4 8h则缺乏菌毛。扫描电镜观察结果 ,37℃培养的鸡大肠杆菌可大量粘附鸡呼吸道上皮粘膜 ,而 18℃培养的同种菌则不能粘附 ,表明鸡大肠杆菌粘附鸡呼吸道上皮的过程由 1型菌毛介导     

鸡源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的分子检测

对豫北地区临床分离的102株鸡源大肠杆菌进行生化鉴定、MICS值测定及氟苯尼考耐药基因floR的检测.最敏感的是头孢喹肟,敏感率为93.1%;其次为阿米卡星和氟苯尼考,敏感率分别为59.8%和54.9%;而对复方新诺明的耐药率达到100%;此外,对四环素,多西环素,氨苄西林,恩诺沙星和沙拉沙星的耐药率为78.4%~94.1%.氟苯尼考耐药基因的分子检测显示,有45.1%的菌株显示floR基因阳性.对其中4株大肠杆菌的氟苯尼考耐药基因floR进行了克隆和测序.结果表明,克隆的floR基因所推导的氨基酸序列与其它12-跨膜外输泵家族在共同的基序上是保守的,在克隆的floR序列与报道的floR序列间仅存在1~3个氨基酸替代.     

鸡大肠杆菌1型菌毛fimH蛋白结构基因克隆及序列测定

根据已发表的大肠杆菌1型菌毛fimH基因序列,以产1型菌毛菌株MG2(O11)、YR5(O78)、MG12(O18)基因组DNA为模板,对大肠杆菌1型菌毛fimH基因进行扩增并与国外同源菌株基因序列进行比对。结果表明:核酸同源性分别为97.8%、99.7%、97.8%,氨基酸序列的相似性分别达到98.7%、99.3%、98.0%。运用DNA-STAR软件对fimH蛋白抗原决定簇进行预测分析,发现它们的抗原决定簇基本相似,这说明fimH基因序列及氨基酸序列的变异并未对fimH蛋白的抗原结构产生明显影响。     

大肠杆菌野生株K99菌毛蛋白结构基因的克隆与序列分析

根据产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99菌毛蛋白的全基因序列设计产肠毒素大肠杆菌主要菌毛K99的一对引物。PCR扩增K99菌毛蛋白的全基因序列大小为546bp。将PCR扩增的目的片断克隆于pMD18-T载体、pET-32a载体中,分别转化大肠杆菌,经酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列分析,筛选出阳性克隆。经过序列比对,所克隆的外源基因与报道的K99菌毛蛋白结构基因序列同源性达99.3%。成功克隆分离到的产肠毒素大肠杆菌菌毛的K99基因,为当地产肠毒素性大肠杆菌病疫苗的选择及基因疫苗的研制提供了坚实的理论基础,为产肠毒素性大肠杆菌病检测、预防及基因工程疫苗的研制开辟新的途径。     

河北省禽病原性大肠杆菌的血清型鉴定

从河北省的保定,石家庄等８个市（地）所属的７８个发病鸡群中的１８３只病,死鸡的内脏,器官中分离出１２７株大肠杆菌,并对其进行了生化试验,致病性试验及血清学鉴定,１２７个分离株中,除３２株未能定型外,共鉴定出９５个分离株的Ｏ血清型,占分离菌株的７４．８％,这些定型菌株覆盖了２４个血清型,但以Ｏ７８（２６．３２％）,Ｏ２（１３．６８％）,Ｏ１１１（９．４７％）,Ｏ１（８．４２％）和Ｏ１５（６．３２％     

一株孔雀源大肠杆菌分离鉴定与致病特性初步研究

无菌采取病死孔雀肝脏,进行病原菌的分离、鉴定、生化试验、毒力基因检测、动物毒力试验。结果表明：致病菌为大肠杆菌,至少携带有papC、iucD、tsh、irp2、iss5种毒力基因,具有高致病性,并且该菌对小白鼠和鸡有较强的致死性。     

鸡源大肠杆菌四环素耐药基因检测

用肉汤稀释法测定32株鸡源大肠杆菌对四环素等8种抗菌药物的敏感性,用PCR方法检测5种四环素耐药基因(tet基因),并用ERIC-PCR方法分析试验菌株间的克隆关系。结果显示:32株大肠杆菌对四环素、多西环素的耐药率分别为84%、75%,tetA和tetB阳性率分别为78%和25%。总tet基因阳性率为90.6%,与对四环素、多西环素的耐药率基本一致。携带1种或2种tet基因的临床分离菌,不仅对四环素类药物耐药,还对头孢噻肟、环丙沙星、新霉素和氟苯尼考耐药,呈现多重耐药的特点。试验菌共分为A~O 15个ERIC型,tetA和tetB几乎均匀分布于不同ERIC型菌株中,表明其在试验菌株间水平扩散。