两种染色法测定禽源性大肠杆菌分离株的外膜蛋白型

对江苏地区２５个禽源性大肠杆菌Ｏ＿１、Ｏ＿２和Ｏ＿（７８）分离株的外膜蛋白型（ＯＭＰ型）进行测定。用Ｎ－十二烷酰肌氨酸（Ｓａｒｋｏｓｙｌ）提取其外膜蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳后，分别以考马斯亮蓝染色法和银染法测定其外膜蛋白型。８个Ｏ＿１分离株、９个Ｏ＿２分离株分属２个ＯＭＰ型，其中的１个为二者所共有，而８个Ｏ＿（７８）分离株的ＯＭＰ型亦与该型用同；两种染色法对ＯＭＰ型的测定结果一致。与银染法相比，考马斯亮蓝染色法具有简便和背景清晰的优点，因此，考马斯亮蓝染色法是禽源性大肠杆菌分离株ＯＭＰ型测定的更为理想的染色方法     

禽病原性大肠杆菌O2和O78外膜蛋白型的初步研究

从１１个禽败血症Ｏ２和Ｏ７８大肠杆菌分离株提取的主要外膜蛋白（ＯＭＰ），出现了３个ＯＭＰ型。其中６个Ｏ２分离株、５个Ｏ７８分离株可分别归为２个ＯＭＰ型，但有１个ＯＭＰ型为两者所共有，结果表明，从江苏地区所分离到的禽病原性大肠杆菌具有多样性的ＯＭＰ型，而且这２个血清型菌株中存在着共同的ＯＭＰ型。     

16省市区禽源性大肠杆菌O_(18)和O_(78)的外膜蛋白型

经对我国 １６ 个省、市、自治区分离到的 １１０ 个禽病原性大肠杆菌 Ｏ１ ８ 和 Ｏ７ ８ 分离株的外膜蛋白型（ Ｏ Ｍ Ｐ型）的测定，结果表明，这些分离株共产生了 ４ 个 Ｏ Ｍ Ｐ 型，５６ 个 Ｏ１ ８ 分离株可分为 ３ 个 Ｏ Ｍ Ｐ型，５４ 个 Ｏ７８ 分离株出现了 ４ 个 Ｏ Ｍ Ｐ型，其 Ｏ Ｍ Ｐ１～３ 型为二者所共有。     

16省市区禽源性大肠杆菌O18和O78的外膜蛋白型

经对我国１６个省,市,自治区分离到的１１０个禽病原性大肠杆菌Ｏ１８和Ｏ７８分离 外膜蛋白型（ＯＭＰ型）的测定,结果表明,这些分离株共产生了４个ＯＭＰ型,５６个Ｏ１８分离株可分为３个ＯＭＰ型,５４个Ｏ７８分离株出现４个ＯＭＰ型,其中ＯＭＰ１￣３型为二者所共有。     

两种染色法测定禽源性大肠杆菌分离株的外膜蛋白型

对江苏地区２５个禽源性大肠杆菌Ｏ１，Ｏ２和Ｏ７８分离株的外膜蛋白型进行测定。用Ｎ－十二烷酰肌氨酸提取其外膜蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳后，分别以考马斯亮蓝染色法和银染法测定其外膜蛋白型。８个Ｏ１分离株，９个Ｏ２分离株分属２个ＯＭＰ型，其中的１个为二者所共有，而８个Ｏ７８分离株的ＯＭＰ型亦有该型相同；两种染色法对ＯＭＰ型的测定结果一致。     

雏鸡大肠杆菌病及其免疫防制初报

甘肃省兰州市及其近郊６个鸡场时有疑似大肠杆菌病病例发生，Ｌ鸡场的一批雏鸡１月龄时死亡率高达３６％。近年来分离的２７９株肠道杆菌，其中２／３为大肠埃希氏菌。Ｌ鸡场分离的５３株大肠埃希氏菌中，Ｏ＿１型占１５．０９％，Ｏ＿２型占３７．７４％，Ｏ＿（７８）型占２２．６４％；５只雏鸡分离到两种血清型。一些菌株对小鼠和小公鸡有较强的致病力。制备的铝胶灭活苗对控制本病有较好的效果。     

抗禽大肠杆菌O_1和O_2抗原特异性单克隆抗体的研制

抗禽大肠杆菌Ｏ＿１和Ｏ＿２抗原特异性单克隆抗体的研制吴长新，张如宽，朱建国，刘秀梵（江苏农学院畜牧兽医系，扬州２２５００９）禽大肠杆菌病常给养禽业造成严重的经济损失。控制和预防该病，确诊和病原鉴定是前提。常规临床和实验室诊断繁杂费时，而Ｏ抗原单因子血...     

禽大肠杆菌耐药标记弱毒菌株O_2(Nor~r,Chl~s)和O_(78)(Chl~r,Nor~s)的培育

选择最常见的禽致病性大肠杆菌Ｏ２和Ｏ７８菌株，分别以常用的抗菌药物氟哌酸和氯霉素诱导，培育成遗传性稳定的耐药标记弱毒菌株Ｏ２（Ｎｏｒｒ，Ｃｈｌｓ）和Ｏ７８（Ｃｈｌｒ，Ｎｏｒｓ），为进一步运用原生质体融合技术培育Ｏ２和Ｏ７８融合双价耐药弱毒菌株打下了基础     

河北省禽病原性大肠杆菌的血清型鉴定

从河北省的保定,石家庄等８个市（地）所属的７８个发病鸡群中的１８３只病,死鸡的内脏,器官中分离出１２７株大肠杆菌,并对其进行了生化试验,致病性试验及血清学鉴定,１２７个分离株中,除３２株未能定型外,共鉴定出９５个分离株的Ｏ血清型,占分离菌株的７４．８％,这些定型菌株覆盖了２４个血清型,但以Ｏ７８（２６．３２％）,Ｏ２（１３．６８％）,Ｏ１１１（９．４７％）,Ｏ１（８．４２％）和Ｏ１５（６．３２％     

禽大肠杆菌耐药标记弱毒菌株O2（Nor^r,Chl^s）和O78（Chl^r,N…

选择最常见的禽致病性大肠杆菌Ｏ２和Ｏ７８菌株，分别以常用的抗菌药物氟哌酸和氯霉素诱导，培育成遗传性稳定的耐药标记弱毒菌株Ｏ２（Ｎｏｒ＾ｒ，Ｃｈｌ＾ｓ）和Ｏ７８（Ｃｈｌ＾ｒ，Ｎｏｒ＾ｓ），为进一步运用原生质体融合技术培育Ｏ２和Ｏ７８融合双价耐药弱菌株打下了基础。     

三株O_(78)、O_(137)混合血清型鸡大肠埃希菌iss基因的序列分析

采用1日龄雏鸡对3株O78、O137混合血清型鸡大肠埃希菌的致病性进行了测定,并扩增了iss基因。结果表明,3株O78、O137混合血清型鸡大肠埃希菌均对1日龄雏鸡具有较强的毒力。iss基因在3株O78、O137混合血清型鸡大肠埃希菌中的序列与已知的禽大肠埃希菌iss基因序列的同源性为100%,与人源大肠埃希菌iss基因序列的同源性为90.9%,显示了此基因的保守性。     

临床分离鸡源性大肠杆菌外膜蛋白型的研究

[目的]了解禽致病性大肠杆菌分离株的遗传相关性。[方法]对分离自保定、秦皇岛和北京3个地区规模化养鸡场的病死鸡体内的38株大肠杆菌,采用超声波裂解和N-十二烷基肌胺酸钠进行外膜蛋白(Omp)提取,利用SDS-PAGE进行Omp分型。[结果]38株大肠杆菌共有3个Omp型,其中Omp-1型为O78、O88、O2、O18、O93、O766个血清型分离株所共有,Omp-Ⅱ型多为O76血清型分离株,Omp-Ⅲ型为O93、O78、O88、O2分离株所共有。这表明同一血清型的菌株可能属于完全不同的Omp型,而血清学上毫不相关的分离株之间却可具有相同的Omp型。[结论]该研究证实了同一血清型的分离株之间可发生遗传分化,而不同血清型的分离株之间也可具有不同程度的遗传相关性。     

禽大肠杆菌O2、O78菌株外膜蛋白A基因扩增及序列分析

根据Genbank中大肠杆菌K-12外膜蛋白A基因的核苷酸序列设计引物,从禽大肠杆菌O为O2、O78及它们的融合株O2．78(Chl^rNor^r)中分别扩增得到外膜蛋白A基因(ompA),进行序列测定及分析发现3个菌株的ompA均由2276nt组成,核苷酸序列完全相同,只有一个大的开放性阅读框(ORF),长1041bp,编码由346个氨基酸组成的前外膜蛋白A(pro-OmpA),前21个氨基酸残基组成信号肽,成熟的OmpA由325个氨基酸残基组成,相对分子质量为37000．其氨基酸序列也完全相同．从基因水平上证明了禽大肠杆菌O2和O78菌株存在相同的外膜蛋白A抗原。     

Comparative Research on Serogroups Distribution and Antimicrobial Resistance of Escherichia coil Isolates from Poultry in Different Areas of China

A total of 241 Escherichia coli(E. coli)isolates from 349 avian samples(292 from cloacae,29 from feed and water,28 from dust and padding)were collected from Northeast,South,North,and Central China in recent years.The percentage of isolation was 69.1%.There are 67 serogroups each with 1-2 isolates distributed in different regions.and some of these regions had the preponderant serogroups.Antimicrobial-resistance(AR)of E. coli was so severe that the majority were multi-AR.Fifty percent strains were resistant to 10-19 antimicrobial drugs.Overall,the isolates represented resistance to nalidixic acid(88.1%),tetracycline(85.7%),sulfamethoxazole(81.0%),trimethoprim-sulfamethpxazole(77.1%),ampicillin (76.2%),amoxilline(74.3%),streplomycin(66.2%),fluoroquinolones(57.1-66.7%),chloramphenicol(52.9%),gentamicin (39.0%),and kanamycin(36.2%).The isolates were sensitive to cefalexin,amoxilline-clavulanic acid,amikacin,and florfenicol with all AR rate of 0-19.5%only.The results showed that the AR was more severe in chicken farms in which the antibiotics were used broadly and repeatedly.This study indicated the AR characterization of E. coli in different areas of China.It will be a foundation for studying AR mechanism and regulating the usage of antimicrobial in the poultry industry.     

Distribution of Virulence-Associated Genes of Avian Pathogenic Escherichia coli Isolates in China

216 avian pathogenic Escherichia coli (APEC) isolates were obtained from poultry with colibacillosis in different areas of China. Among them, 195 were serotyped as O78, O88, and O93. Thirteen virulence-associated genes, including fimC, iucD, iss, tsh, fyuA, irp2, eaeA, hlyE, colV, papC, stx2f, vat, and astA, were submitted to PCR amplification. The fimC gene was the most prevalent with a detection rate of 93.6%, followed by iucD (70.8%), iss (58.8%), and tsh (51.4%) in APEC isolates. The detection rate of high pathogenicity islands (HPI)-associatedfyuA and irp2 genes were both 44.9%, with no LEE (the locus of enterocyte effacement) island-associated gene eaeA detected. In terms of distribution patterns of the 13 virulence-associated genes, 5 isolates harborbed 10 genes, 19 isolates contained only fimC gene, and only 4 isolates had no virulence-associated gene detected. Different correlations of the virulence-associated genes with O serotypes were also investigated and 50% O78 isolates had a gene distribution patterns of fimC+iucD+irp2+fyuA+iss+colV+tsh+.     

抗沙门氏菌O_4、O_(12)抗原特异单克隆抗体的产生及其特性鉴定

用鼠伤寒沙门氏菌的热灭活全菌和热酚—水抽提脂多糖抗原免疫BALB/c小鼠,取脾脏淋巴细胞与SP_2/O细胞融合,获得稳定分泌抗沙门氏菌O_4和O_(12)抗原的特异单克隆抗体的杂交瘤细胞系7个,分别命名为AG24-1、AG90-5、BG1-8、BG17-12、BG66-10、BG78-15、EG19-11。小鼠腹水中的单抗直接凝集滴度为10~2-10~4,间接免疫荧光滴度为10~3-10~6。与沙门氏菌和肠杆菌科中其他细菌的反应性试验表明,BG78-15是O_(12)因子特异单抗,其他6种为对O_4因子的特异单抗。