应用RT-POR对胶东规模鸡场三种病毒感染情况的调查

为了解2009下半年山东胶东地区规模化鸡场主要疫病的感染情况,应用RT.PCR技术对山东青岛、潍坊和烟台三地区送检的774份具有呼吸道症状的病料进行了新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV)三种主要病毒的感染情况调查.调查结果显示三个地区三种病毒的感染率为25.58%,NDV、IBV和AIV(H9)的阳性率分别为8.14%、11.37%和6.07%.青岛地区NDV、IBV的阳性率均最高,分别为12.47%、14.55%.二种病毒混合感染的阳性率可达2.84%,以IBV+NDV二重混合感染临床最为常见.调查结果表明山东省胶东地区NDV、IBV和AIV(H9)的感染情况比较普遍,且存在一定程度的混合感染,这为有效预防和控制山东省规模鸡场该三种主要疾病提供了科学依据.     

应用RT-PCR对胶东规模鸡场三种病毒感染情况的调查

为了解2009下半年山东胶东地区规模化鸡场主要疫病的感染情况,应用RT-PCR技术对山东青岛、潍坊和烟台三地区送检的774份具有呼吸道症状的病料进行了新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV)三种主要病毒的感染情况调查。调查结果显示三个地区三种病毒的感染率为25.58%,NDV、IBV和AIV(H9)的阳性率分别为8.14%、11.37%和6.07%。青岛地区NDV、IBV的阳性率均最高,分别为12.47%、14.55%。二种病毒混合感染的阳性率可达2.84%,以IBV+NDV二重混合感染临床最为常见。调查结果表明山东省胶东地区NDV、IBV和AIV(H9)的感染情况比较普遍,且存在一定程度的混合感染,这为有效预防和控制山东省规模鸡场该三种主要疾病提供了科学依据。     

山东胶东地区规模鸡场三种主要病毒感染情况的调查

为了解2009下半年山东胶东地区规模化鸡场主要疫病的感染情况,应用RT-PCR技术对山东青岛、潍坊和烟台三地区送检的774份具有呼吸道症状的病鸡病料进行了新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV)3种主要病毒的感染情况调查。调查结果显示,三个地区3种病毒的感染率为25.58%,NDV、IBV和AIV(H9)的阳性率分别为8.14%、11.37%和6.07%。青岛地区NDV、IBV的阳性率均最高,分别为12.47%、14.55%。2种病毒混合感染的阳性率达2.84%,以IBV+NDV二重混合感染临床最为常见。调查结果表明,山东省胶东地区NDV、IBV和AIV(H9)的感染情况比较普遍,且存在一定程度的混合感染,为有效预防和控制山东省规模鸡场该3种主要疫病提供了科学依据。     

胶东地区规模鸡场3种主要病毒感染情况的调查

应用RT-PCR对山东青岛、潍坊和烟台3个地区2008年1月至2009年6月送检的1837份具有呼吸道症状鸡的病料进行新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV)3种主要病毒感染情况的调查。调查显示,3个地区3种病毒的感染率可达65.76%,其中NDV、IBV和AIV(H9)的平均阳性率分别为12.36%、12.30%和41.10%。青岛地区NDV、AIV(H9)和IBV的阳性率最高,分别为13.45%、17.37%和44.08%。2008年下半年较2008年上半年3种病毒的检出率均有所升高,以AIV(H9)升高最为显著;2009年上半年较2008年上半年AIV(H9)阳性率上升最为明显。3种病毒混合感染的阳性率可达11.00%,以IBV+AIV(H9)和NDV+AIV(H9)二重混合感染临床最为常见。表明山东省胶东地区NDV、IBV和AIV(H9)的感染情况比较普遍,且存在一定程度的混合感染。本调查结果为山东省制定规模鸡场3种疫病的防控措施提供了科学资料。     

2008年～2012年山东胶东鸡场NDV IBV AIV(H9)感染情况调查

为了解2008年1月～2012年6月山东胶东青岛、潍坊和烟台三地区新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV(H9))的感染情况,采用RT-PCR对送检的5 001份患有呼吸道症状的病料进行了检测.结果显示,3地区3种病毒的总阳性率为48.49％,其中AIV(H9)感染率最高,为26.15％.青岛地区NDV和IBV的阳性率均最高,分别为15.94％和11.63％,潍坊地区AIV(H9)阳性率最高(29.23％).4年半间AIV(H9)感染下降明显,但NDV近3年感染明显抬头.寒冷月份3种病毒感染较高,3月份NDV和AIV(H9)阳性率均最高,分别为21.07％和38.17％;10月份IBV阳性率最高为15.40％.3种病毒混合感染阳性率为6.66％,以NDV+ AIV(H9)二重感染最常见(2.98％),NDV+IBV+AIV(H9)三重感染为0.40％.结果表明,山东胶东地区NDV、IBV和AIV(H9)的感染情况较普遍,存在一定程度的混合感染,为有效防控山东省规模鸡场该3种主要疾病提供了依据.     

鸡J亚群禽白血病病毒与七种常见病毒混合感染的调查

应用PCR方法对2009年6月到2009年9月来自不同地区、不同品种、不同日龄的45个疑似感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的病鸡病料进行检测,同时对ALV-J与新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)、包涵体肝炎病毒(IB-HV)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)和呼肠病毒(REOV)等病毒的混合感染情况进行了调查。结果表明,采用ALV-J的特异性引物H5/H7,在45份送检病料中,有3份检出ALV-J,阳性率为6.67%。绝大多数病例检测出内源性禽白血病病毒,部分病例检测有其他7种病毒中的一种或几种。混合感染病例中以IBHV和IBV混合感染的比率较高,其中ALV-J与H9N2亚型AIV混合感染多见。     

引起鸡支气管阻塞的病毒类病原调查研究

为探寻可能引发鸡支气管阻塞的病毒类病原,试验采用RT-PCR方法检测了自河北及周边地区收集的43份有支气管阻塞病料样品中H5亚型禽流感病毒(AIV)、H7亚型AIV、H9亚型AIV、传染性支气管炎病毒(IBV)和新城疫病毒(NDV)等病毒类病原感染情况。结果显示,阳性样品共24份,总阳性率为55.8%(24/43),其中H9亚型AIV、IBV、H5亚型AIV、H7亚型AIV、NDV的阳性率分别为34.9%(15/43)、20.9%(9/43)、0(0/43)、0(0/43)、0(0/43),不存在H9亚型AIV和IBV的混合感染;自检测阳性样品中分离、鉴定了5株H9N2 AIV,HA蛋白裂解位点模式均为PSRSSR↓GLF,属于低致病性毒株,位于h9.4.2.5分支,3株分离毒株HA蛋白关键氨基酸位点模式与疫苗毒株WJ57完全一致,但5株分离毒株NA蛋白关键氨基酸位点模式与疫苗毒株WJ57不完全一致;自检测阳性样品分离、鉴定了4株IBV,S1蛋白裂解位点模式包括HRHRR和HRRRR,属于LX4型,均与疫苗毒株YX10 D90亲缘关系较近,与疫苗毒株Connecticut和H120亲缘...     

规模化肉鸡场H9N2亚型禽流感与传染性支气管炎流行病学调查

2010~2013年对山东、辽宁、吉林、黑龙江等地区的规模化肉鸡场采集临床样品进行调查研究。结果显示,在111份H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)阳性样品中有74份为传染性支气管炎病毒(IBV)阳性,且混合感染鸡群死亡率均高达10%以上,所有IBV毒株经序列分析和毒力测定均为类QX型,未发现疫苗毒株与H9 AIV的混合感染。调查表明,H9 AIV和IBV混合感染的协同作用是导致当前H9亚型禽流感流行严重的最主要原因。     

检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒双重RT-PCR的建立与初步应用

为了快速检测临床样品中新城疫病毒(NDV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的混合感染,根据NDV的F基因和IBV的N基因保守序列分别设计了2对特异性引物,优化双重RT-PCR反应条件,建立了可同时检测NDV和IBV的快速双重反转录PCR(RT-PCR)诊断方法。敏感性试验表明,此方法对NDV和IBV的RNA最小检出量分别为0.014 3和0.013 6ng;NDV的扩增片段大小为459bp,IBV的扩增片段为282bp。对其他病毒如IBDV、AIV和EDSV的检测结果均为阴性,表明此方法具有较好的特异性。对58份临床疑似样品进行检测,NDV和IBV的阳性率分别为44.82%和31.03%,NDV和IBV混合感染率为20.68%,表明本研究建立的NDV与IBV双重RT-PCR检测方法,可用于临床发病病料中NDV和IBV混合感染的快速鉴别诊断。     

鸡白色念珠菌、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒三重PCR检测方法的建立与应用

根椐Gen Bank中已发表的白色念珠菌(CA)、传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)基因序列设计并合成三种病原的特异性检测引物,通过三重PCR反应条件的优化,建立了检测三种病原的PCR检测方法。该方法对同一样品中的CA、IBV和NDV核酸模板可同时扩增出231 bp、417 bp和747 bp的特异性片段,检测光滑念珠菌(CG)、克柔念珠菌(CK)、热带念珠菌(CT)、H9亚型禽流感病毒(AIV H9)、鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、减蛋综合症病毒(EDSV)等7种禽病病原均为阴性,该方法对CA DNA、IBV c DNA、NDV c DNA的检测最低限度分别为25.0,33.5,36.5 pg,临床样品检测结果表明三重PCR检测方法可以用于这三种病原单独和混合感染的检测和鉴别诊断。说明所建立的三重PCR检测方法具有很好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,为三种病原单独或混合感染的检测和鉴别诊断提供了一种操作简单、检测快速的分子生物学诊断方法。     

广西玉林市规模化禽场禽流感病毒检测

为了解广西玉林市2020年规模禽场禽流感病毒感染状况,采用荧光RT-PCR方法,对广西玉林市7个县(市、区)42个规模化禽场采集的1260份禽喉/泄殖腔棉拭子样品进行了通用型禽流感病毒核酸检测(荧光PCR),并对检测为阳性的样本进行H5、H7亚型(双重荧光PCR)和H9亚型(荧光PCR)分型鉴定.结果显示:在42个规模...     

重组鸡α-干扰素的表达及其生物活性的初步研究

为获得重组鸡α-干扰素并对其进行生物活性研究,本试验对重组大肠杆菌进行诱导表达,收集重组鸡α-干扰素包涵体后进行复性纯化及免疫印迹试验,并通过测定病毒EID₅₀,在接种H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的鸡胚中进行干扰素抗病毒活性试验,运用微变量细胞病变抑制法进行重组鸡α-干扰素抗病毒效价的测定。结果显示复性后重组鸡α-干扰素的免疫印迹试验成功获得了预期条带,在鸡胚中重组鸡α-干扰素具有显著的抗H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等活性作用。在CEF/VSV细胞系上测定重组鸡α-干扰素的抗病毒效价为1.5×2¹⁰ U/mg左右,高浓度重组鸡α-干扰素具有一定的细胞毒性。结果表明重组鸡α-干扰素蛋白具有免疫原性和抗原性,在鸡胚内具有较好的抑制或杀灭H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果,呈广谱性,抗病毒效价较高,为下一步抗病毒制品的创制奠定基础。     

朗德鹅禽流感病毒的分离与鉴定

用禽流感病毒ELISA试剂盒对某朗德鹅养殖场的病鹅气管粘液进行了检测，发现5份粘液样本均呈禽流感阳性；随后取相应气管组织材料接种于9～11日龄鸡胚分离病毒．发现尿囊液能使鸡红细胞发生凝集，用禽流感病毒H5、H7、H9标准阳性血清和新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒抗血清作HI试验，结果禽流感病毒H5亚型抗血清的血凝抑制滴度达到2^7，而禽流感病毒H7、H9亚型及其他病毒抗血清无血凝抑制滴度，说明从朗德鹅分离到的病毒为H5亚型禽流感病毒。     

禽偏肺病毒地高辛核酸探针的制备与应用

根据GenBank中已经发表的B亚型禽偏肺病毒F基因的保守序列设计并合成1对引物,利用RT—PCR扩增出1条与目的片段大小一致的725bp基因片段,回收、纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的aMPV核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与aMPV核酸发生特异性杂交,而与H9N2亚型AIV、NDV、IBV、ORT和E．coil的核酸杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对aMPV的最低检出量为5Pg。应用制备的探针对山东省不同地区的605份商品肉鸡和122份商品肉鸭进行了核酸探针检测,阳性检出率分别为36．59％和34．51％。本试验制备的aMPV地高辛探针特异性强、敏感性好,对样品的检测结果表明山东省部分地区的商品肉鸡、肉鸭中普遍存在aMPV感染。     

鸡新支流三联灭活疫苗免疫AA+肉种鸡的子代母源抗体测定及攻毒试验

用新支流三联苗（批号200701）免疫AA+父母代肉种鸡,子代雏鸡1日龄母源抗体的变化情况与其种鸡血清抗体的消长情况相似,呈强正相关。1日龄雏鸡母源抗体平均滴度越高,其15～17日龄后下降越迅速,至28日龄时已接近为0。结果表明,种鸡免疫后1～3个月,其子代在14日龄内的母源抗体可对ND的攻击获得全保护,传染性支气管炎母源抗体≥6log2。种鸡免疫后4～4.5个月,其子代对ND、IB的攻击在7日龄内能全保护。证明三联疫苗免疫种鸡后1～3个月可保护子代抵抗病毒攻击至14日龄;免疫后4～4.5个月,其子代可保护至7日龄;而免疫后5～6个月可保护子代至1日龄。     

Immuno-PCR for one step detection of H5N1 avian influenza virus and Newcastle disease virus using magnetic gold particles as carriers

Detecting avian influenza virus (AIV) and Newcastle disease virus (NDV) at low concentrations from tracheal and cloacal swabs of avian influenza- and Newcastle disease-infected poultry was carried out using a highly sensitive immunological-polymerase chain reaction (immuno-PCR) method. Magnetic gold particles were pre-coated with a capture antibody, either a monoclonal anti-AIV/H5 or monoclonal anti-NDV/F and viruses serially diluted ten-fold from 10(2) to 10(-5)EID(50)/ml. A biotinylated detection antibody bound to the viral antigen was then linked via a streptavidin bridge to biotinylated reporter DNA. After extensive washing, reporter DNA was released by denaturation, transferred to PCR tubes, amplified, electrophoresed and visualized. An optimized immuno-PCR method was able to detect as little as 10(-4)EID(50)/ml AIV and NDV. To further evaluate the specificity and the clinical application of this IPCR assay for AIV H5N1 and NDV, the tracheal swab specimens, taken from chickens which were infected with H5N1/AIV, H9N2/AIV, H7N2/AIV, NDV, IBDV, IBV/H(120), were detected by IPCR. Our data demonstrated that this monoclonal antibody-based immuno-PCR method provides a platform capable of rapid screening of clinical samples for trace levels of AIV H5 and NDV in one step.     

上海地区活禽批发市场H9亚型禽流感病毒调查

为弄清上海地区活禽批发市场中H9禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）的流行情况及鸡群的免疫情况,2009年对上海三大活禽批发市场进行了采样监测。采用HI试验检测H9 AIV抗体、荧光RT-PCR试验和鸡胚接种分离鉴定病毒。共采集110批次1 646份血样和喉头泄殖腔棉拭样品,平均抗体合格率为60.27%,分离到H9病毒134株,其中4-6月和9-11月为全年中病毒分离的2个高峰期（样品带毒率均超过了10.00%）,明显比其它月份要高（其他月份均低于5.00%）,样品带毒率平均为8.14%。不同市场、不同地区采集的样品其抗体合格率和样品的带毒率也存在一定的差异。在30批分离到病毒的样品中,13批次已免疫H9N2油乳剂灭活苗且抗体合格率均大于70.00%的样品中分离到45株病毒（45/195）,其中6批次抗体合格率达到100%的样品中也分离到了病毒（8/90）,但带毒率明显比未经疫苗免疫的样品（79/255）低。调查结果表明养殖户对肉鸡群H9N2油乳剂灭活苗免疫重视程度不够,鸡群中带毒现象较普遍。疫苗免疫后能产生较高的免疫抗体,且抗体能减轻临床症状,降低带毒率,但不能完全阻止病毒复制,存在高抗体下带毒现象。