不同保存方法对蜡梅总DNA提取效果的影响及ISSR-PCR验证

本文以蜡梅新鲜成熟叶片为对照,比较了真空冷冻干燥、硅胶干燥、压标本干燥、45℃烘干、75℃烘干5种叶片干燥方法和4℃保鲜、-20℃冻存、-70℃冻存法对蜡梅总DNA提取效果的影响.结果表明硅胶干燥的样品提取的DNA完整无降解,纯度高,DNA得率为鲜叶的1/3多,压标本干燥的样品可以提到完整的DNA,DNA得率与硅胶干燥的样品相近,提取的DNA含多酚,纯度低.真空冷冻干燥样品的DNA在冷冻干燥过程中小部分受到损伤,DNA得率较鲜叶稍有下降.45℃烘干的样品可以提取到完整的DNA,纯度高,DNA得率约为鲜叶的1/2,75℃烘干的样品的DNA全部降解.ISSR扩增结果表明75℃烘干的样品提取的DNA没有获得扩增产物,其他4种干燥方法提取的DNA的扩增结果与鲜叶相同.鲜叶可在4℃冰箱保鲜存放6 d,在-20℃冰箱中冷藏半月,可在-70℃超低温冰箱中长期放置而不影响总DNA的提取质量和ISSR扩增结果.     

转耐盐基因水稻的PCR检测方法及其分子辅助育种

研究采用改良CTAB法和磁珠自动提取法提取水稻种子基因组DNA,通过对水稻内源SPS基因、ThST3和Ubiquit-in启动子间构建特异序列进行PCR扩增,扩增产物结合排枪凝胶电泳实现快速检测。其中PCR扩增内源SPS基因的结果表明,采用改良CTAB法和磁珠自动提取法可用于市售水稻种子和转基因种子的DNA提取。实验合成的构建特异引物以及建立的PCR扩增反应体系能特异性地检测转耐盐基因水稻Theli。该方法检测灵敏度高,绝对检测低限达17.3×10-2ng,相对检测低限为0.41%,能有效地对转基因水稻ThST 3进行鉴定;稳定性好,可完全满足转基因水稻的定性检测、监督和标识管理需要。同时可用于对转基因水稻的辅助选择(MAS)育种。     

一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法

以杂交水稻两优988及其亲本为材料,对96个单株幼苗采取96孔PCR板快提法与CTAB法分别提取DNA,进行纯度鉴定。结果表明,2种方法提取的DNA均能正常进行PCR扩增检测,且用引物RM 583扩增的条带清晰可辨,2种方法提取的DNA扩增出来的带型完全一致。     

水稻SSR分析快速提取总DNA法

为满足水稻SSR分析需要大规模DNA样品的要求,以水稻幼苗叶片为材料,采用改良的CTAB法提取水稻基因组DNA.经质量和纯度检测结果显示：改进的方法程序简单,药品用量少,省时省力,且提取DNA的OD260/OD280均在1.8～1.9之间,琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增条带清晰、无污染、无降解.表明该方法适用于SSR分析的水稻基因组DNA的提取,所得DNA的质量和纯度完全满足试验要求.     

一种应用PCR缓冲液快速制备水稻DNA模板的方法

本研究介绍一种应用PCR缓冲液快速制备水稻DNA模板的方法。操作方法如下:取少量水稻叶片,用剪刀剪碎后移至200μL离心管或96孔PCR板中,在每个样品中加入50μL 0.5倍的PCR扩增缓冲液,置于PCR基因扩增仪上在95℃条件下煮12 min,取出,无需离心,所得提取液直接作为DNA模板用于PCR扩增。结果表明,该方法所制备的水稻DNA模板在PCR扩增中稳定、准确,其效果与用常规SDS法提取的相当,且这种DNA模板可在短期内保存而不影响扩增效率。该方法具有成本低、操作快速简便等优点,适合推广应用。     

应用水稻叶片直接PCR扩增的方法

本研究以新鲜和冷冻的水稻幼苗叶片为材料,探索水稻叶片直接作为模板进行PCR扩增的方法。结果表明,与对照SDS法提取的DNA相比,应用新鲜或冷冻的1~2 mm2水稻叶片直接作为模板在缓冲液为10 mmol/L KCl,2.5 mmol/L Mg Cl2,25 mmol/L(NH4)2SO4,40 mmol/L Tris-HCl(p H 9.0),0.8%PCR增强剂的反应体系中扩增,PCR扩增效果无明显差异;研究结果表明,该方法省去DNA体外提取过程,节约成本,操作简便,可以直接利用水稻叶片作为DNA模板进行PCR扩增。     

水稻单粒种子DNA提取及SSR-PCR反应体系的正交设计优化

本文以水稻单粒干种子为材料进行DNA提取方法和SSR-PCR反应体系的优化研究,结果表明:用CTAB法提取的水稻干种子DNA较为完整,降解量少,可获得理想的扩增效果。在试验设计范围内,确定的最佳反应体系为20μL,其中含模板DNA 45ng,dNTPs浓度为0.15 mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L,Mg2+浓度为1.5 mmol/L,Taq酶为1.6 U。     

海南龙血树基因组DNA提取方法比较

摘 要：为选择一种简单、快速、有效的海南龙血树总DNA的提取方法,分别采用CTAB法、SDS法、SDS-CTAB法和改良CTAB法提取海南龙血树嫩叶片的总DNA,用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和ISSR对所提取的总DNA进行检测。结果表明,改良CTAB法提取的DNA A260/A280在1.7-1.9之间,纯度高、杂质少、DNA完整性好。以该方法提取的总DNA为模板进行ISSR扩增,谱带清晰,多态性、稳定性、重复性好。该法提取的总DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究是有效提取海南龙血树基因组的方法。     

三种水稻基因组DNA快速提取方法的比较

用分子标记辅助选择进行精细定位和遗传改良时,首先就需要大批量提取植物DNA,作为PCR反应的模板。水稻基因组DNA常用的简易提取方法有碱处理法和高温水煮法等,本文改进了常规的CTAB方法,提出另一种简便的高质量DNA提取方法,称“简化法”,并比较了这三种方法提取的DNA在数量、质量上的差异,以及作为PCR模板时扩增效果,确定了在精细定位和遗传改良时“简化法”是一种较优的方法。     

水稻不同组织总DNA对叶绿体标记分析的影响

叶绿体DNA标记是水稻分子生物学分析中的常用方法之一。但是水稻叶绿体DNA的提取过程复杂且耗时,为了简化分析步骤,本试验使用CTAB与SDS方法分别提取栽培水稻籼93-11和粳沈农265的叶、根、种子3种组织总DNA,选择3对叶绿体基因间隔区标记(psbA-trnH、petG-trnP和infA-rpl36)以及2对水稻叶绿体籼粳分类标记(ORF100和ORF29-TrnCGCA)进行PCR扩增。结果显示以它们种子、根为模板的扩增效果与叶片模板的扩增效果相一致,并与预期的结果相符合。最后对60份杂草稻种子总DNA进行叶绿体籼粳分类标记扩增分析,结果表明,杂草稻种子总DNA中扩增出目的片段同样能够进行有效的籼粳分类。这在一定程度上简化了水稻叶绿体标记的分析过程,加快分析速度。     

光照强度对水稻HS叶片失绿的影响

通过遮去不同光照强度和高温处理对水稻HS叶片叶绿素含量影响效应的试验,拟验证是强光而非高温是产生叶片失绿的原因,并探明可以消除叶片失绿（黄化）的遮光比例。结果表明,在自然光强条件下,水稻HS的叶片叶绿素含量在分蘖期急剧降低而发生叶片失绿,而遮去自然光强3/4和2/4（相同气温条件下）处理的叶绿素含量变化很小,无明显的叶片失绿现象。处理1个月后再恢复自然光强,原来由于遮光而没有明显失绿的叶片曝露在自然强光下后也出现明显的失绿,再次证实叶片失绿是由于强光引起。遮去自然光强的2/4以上,可基本消除HS的叶片失绿和光氧化现象。高温（中等和较弱光强下）并不会导致HS叶绿素含量和叶色发生明显变化。     

稻谷自然干燥特性与品质的研究

研究了不同自然干燥条件下的稻谷干燥特性及其对稻谷干燥品质，特别是对稻谷爆腰发生的影响。结果表明：采用控制干燥速率和避免过度干燥的室外阴干的方法，可以有效地降低稻谷爆腰率，提高稻谷干燥品质。     

稻瘟病苗瘟叶瘟和穗颈瘟的相关性分析

采用温室人工接菌法探讨水稻稻瘟病苗瘟、叶瘟和穗颈瘟的相关性,研究结果表明,稻瘟病苗瘟、叶瘟和穗颈瘟三者之间存在着一定的正相关性,相关程度因水稻品种、稻瘟病菌生理小种的不同而有所差异。此外,对水稻品种温室苗瘟抗性率与田间叶瘟抗性率、穗颈瘟抗性率之间的相关性进行研究,结果表明温室苗瘟抗性率与自然病圃叶瘟抗性率表现正相关关系(r=0.5435),温室苗瘟抗性率与自然病圃穗颈瘟抗性率表现极显著正相关关系(r=0.7583**,p<0.01),自然病圃叶瘟抗性率与穗颈瘟抗性率呈显著正相关关系(r=0.6322*,p<0.05)。因此,认为利用可控温室代替田间进行水稻品种稻瘟病抗性鉴定是可行的,而且根据苗瘟、叶瘟的抗性鉴定结果推测穗颈瘟的抗性基本上也是可行的。     

栽培稻叶结构、水分生理与抗旱性关系研究

摘 要：增强栽培稻品种的抗旱性是稻作节水生产的重要途径。稻作种质资源抗旱相关指标的研究是改良稻作品种抗旱性的重要依据。选择抗旱性差异明显的四种类型稻作种质,采用三种干旱胁迫方式,对孕穗期植株叶片的叶肉厚、中脉粗、叶片相对含水量及叶片保水率进行了考察,分析稻作种质在三种处理下各性状相互之间的内在关联及其与品种抗旱性的关系;结果表明叶肉厚、中脉粗、叶片相对含水量及叶片保水率在干旱胁迫下均表现为旱稻类型高于水稻类型。轻度干旱下的叶肉厚与成熟期生物量抗旱指数DRIm2-B极显著相关,与孕穗期生物量抗旱指数DRIm2-H显著性相关。重度干旱下的中脉粗与DRIm2-B极显著相关,重度干旱下的叶片保水率与重度干旱产量抗旱指数DRIm2-Y显著相关,中脉粗和叶片相对含水量在四种种质类型中差异不明显;孕穗期叶肉厚和叶片保水率可分别作为稻作种质抗旱性研究和评价的两个指标。     

利用PCR仪快速提取甜菜基因组DNA

为了寻找一种快速提取甜菜基因组DNA的方法,以甜菜干种子、幼苗、种仁以及甜菜叶片干粉为原料,利用PCR仪结合碱裂解法快速提取甜菜基因组DNA,利用微量分光光度计检测取DNA的浓度,并用甜菜SSR引物对提取的DNA进行扩增。结果表明,在4 种材料中均检测到了DNA,干种子、幼苗、种仁以及叶片干粉中提取的DNA平均浓度分别为432、197、158、448 ng/μL,无论是DNA原液还是稀释到20 ng/μL的工作液,均能在SSR-PCR反应中扩增出清晰的条带。该方法提取甜菜基因组DNA简单、快速,仅需要NaOH和HCl两种药品,提取的DNA完全可以用于SSR-PCR反应,为快速鉴定甜菜品种纯度和真实性提供了技术支持。     

低浓度海盐苦卤处理对番茄种子萌发及幼苗生长的影响

以番茄种子及其幼苗为试验材料,以蒸馏水和0.40%氯化钠溶液为对照,研究番茄种子在海盐苦卤浓度为0.05%、0.10%、0.20%和0.40%处理下发芽率和发芽势。试验以Hoagland’s营养液及含0.40%和0.60%氯化钠的Hoagland’s营养液为对照,研究番茄幼苗在海盐苦卤浓度为0.05%、0.10%、0.20%和0.40%的Hoagland’s营养液处理下的株高、干重、鲜重、电导率、丙二醛含量及脯氨酸含量。结果表明：浓度为0.05%和0.10%海盐苦卤处理对番茄种子及幼苗无负面影响,且在一定程度上提高了番茄种子的发芽势,增加了番茄幼苗的株高、干重和鲜重,有效降低了番茄叶片的电导率,并且对番茄叶片丙二醛（MDA）含量及脯氨酸（PRO）含量影响很小;浓度为0.20%和0.40%海盐苦卤处理对番茄种子萌发无明显影响,对番茄幼苗的生长具有负面影响,且其负面影响低于同浓度氯化钠对番茄幼苗造成的影响。     

Carotene and tocopherol in agro-industrial by-products and wastes of the tropics

Of the samples studied to date, only dried carrot wastes and tomato pomace have been found to contain an appreciable amount of carotene and these could be included as natural, rich sources of carotene in a balanced compounded feed.Overall, rice bran contained the maximum concentration of tocopherol and this might be used as a cheap supplement in vitamin E deficient rations compounded for farm animals.     

Improving the Drought Tolerance in Rice (Oryza sativa L.) by Exogenous Application of Salicylic Acid

Drought stress encumbers the rice growth predominantly by oxidative damage to biological membranes and disturbed tissue water status. In this study, the role of salicylic acid (SA) to induce drought tolerance in aromatic fine grain rice cultivar Basmati 2000 was evaluated. SA was applied as seed and foliar treatments. For seed treatment, rice seeds were soaked in 50, 100 and 150 mg l⁻¹ aerated solution of SA for 48 h and then dried back. Treated and untreated seeds were sown in plastic pots in a phytotron. At four leaf stage, one set of plants was subjected to drought stress, while the other remained well watered. Drought was maintained at 50 % of field capacity by watering every alternate day. For exogenous application, SA was applied 50, 100 and 150 mg l⁻¹ at five leaf stage. In the control, SA was neither applied exogenously nor as seed treatment. Drought stress severely affected the seedling fresh and dry weight, photosynthesis, stomatal conductance, plant water relations and starch metabolism; however, SA application improved the performance of rice under both normal and stress conditions. Drought tolerance in rice was well associated with the accumulation of compatible solutes, maintenance of tissue water potential and enhanced potency of antioxidant system, which improved the integrity of cellular membranes and facilitated the rice plant to sustain photosynthesis and general metabolism. Foliar treatments were more effective than the seed treatments. Foliar application with 100 mg l⁻¹ (FA 100) was the best treatment to induce the drought tolerance and improve the performance under normal and stress conditions compared with the control or other treatments used in this study.     

不同干燥工艺对稻谷导热系数影响的研究

采用自然干燥(15℃)、热风干燥(45℃、55℃、65℃)、流化床干燥(45℃、55℃、65℃)对初始湿基含水率21.2%的稻谷进行降水处理,选取适当水分间隔测量稻谷导热系数和爆腰率,得到不同干燥工艺条件下的导热系数与含水率的拟合曲线、导热系数与爆腰率的拟合曲线,并对降水速率与爆腰增率、导热系数与爆腰率做相关分析。结果表明,降水速率与爆腰增率,导热系数与爆腰率都存在极显著相关性。干燥工艺影响稻谷降水速率,产生不同爆腰率,改变内部结构进而影响导热系数测量值。随爆腰率增大,导热系数呈非线性递增。流化床干燥对稻谷导热系数测量造成的影响大于薄层热风干燥。低温薄层热风干燥稻谷的导热系数最接近自然干燥处理值。     

机插水稻不同种子处理方式对稻纵卷叶螟的控制效果

为筛选适宜江苏丘陵稻区旱育机插条件下长效控制稻纵卷叶螟的种子处理方式,以机插为前提条件,采用20%氯虫苯甲酰胺（CAP）悬浮剂浸种、清水浸种后药剂拌种（湿拌）及干籽拌种（干拌）3种方式处理种子,比较其对水稻的保叶效果和对稻纵卷叶螟的杀虫效果,并结合赶蛾数据分析当年稻纵卷叶螟发生情况。结果表明,3种处理方式对稻纵卷叶螟均具有一定的防治效果,在相同用量条件下,对水稻的保叶效果和对稻纵卷叶螟的杀虫效果均为干拌≥湿拌>浸种处理。在江苏丘陵地区稻纵卷叶螟第3代偏轻至中等发生、第4代中等偏重发生条件下,利用CAP有效用量2.0g/kg浸种处理种子、1.0g/kg湿拌和干拌处理种子均可达到90%以上的保叶和杀虫效果,有效控制时长达111d以上。结合农药利用率及成本因素,在江苏丘陵地区可利用CAP有效用量1.0g/kg拌种,湿拌或干拌种子可预防水稻生长前期偏轻发生、后期中等偏重发生的稻纵卷叶螟,有效减少田间白叶率、活虫数及田间稻纵卷叶螟防治次数。