松材线虫携带的一株细菌分离及其致病性

从患松材线虫病致死的黑松和马尾松病树组织及松褐天牛虫体中分离的松材线虫虫体上均分离到同一细菌菌株 .经致病性、革兰氏染色、菌体形态、培养性状和生理生化反应等测定 ,将致病菌株鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌 .ATBExpression自动鉴定仪的鉴定结果与上述结果相同 .在分离过程中该菌出现频率较高 ,说明是松材线虫携带的主要细菌 .人工接种试验结果显示 ,用无菌线虫或洋葱伯克霍尔德氏菌菌株分别接种的黑松无菌苗不发病 ,而用二者混合接种则使无菌苗迅速发生褐变和萎蔫 .林间利用 6年生黑松进行的接种试验结果证明 ,用无菌松材线虫和洋葱伯克霍尔德氏菌菌株混合接种的黑松与使用野生松材线虫接种的黑松都 10 0 %的患病 .单独用无菌松材线虫接种有 4株发病 ,6株没有发病 .其中发病黑松中不仅分离到了松材线虫 ,也分离到了细菌 ,而没有患病的 6株黑松中仅分离到少量松材线虫 .这说明在野外条件下接种的松材线虫可以通过某种途径重新获得细菌 ,导致了接种的黑松患病 .而接种后无菌松材线虫没能获得细菌的那些黑松就没有患病 ,说明单独无菌松材线虫不能使黑松患病 .这些结果说明松材线虫携带的细菌与松材线虫的致病性有关 .因此 ,可以把松材线虫病看作是线虫和细菌共同侵染引起的一种植物复合侵染病害 .在这     

松材线虫研究进展

松材线虫是我国森林的重要有害生物,也是许多国家重要的林木检疫对象.本文就松材线虫的发生发展规律、致病性及不同树种对松材线虫的抗性问题作一些讨论,同时介绍一些研究松材线虫的新手段、新技术.     

Kt对柽柳继代培养的影响

以诱导培养基培养的柽柳瓶苗为继代培养材料,研究了不同水平的Kt(0.5、1、2 和3 mg/L)对柽柳继代培养的影响.结果表明,较低浓度的Kt能较快得到完整的植株,即0.5 mg/L Kt最为理想;讨论了诱导培养基中的激素对继代培养的影响、茎叶与根系生长的相关性和内源激素的作用,为柽柳的工厂化育苗和其它植物的组织培养提供重要参考.     

松材线虫产生的分泌物对松树的致病作用

用多毛孢(Pestalotia sp.)培养松材线虫,经过表面消毒后,在Tris-HCl缓冲液中振荡培养,培养液经硫酸铵沉淀、透析、冷冻真空干燥,制成的干样,用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。松材线虫能向体外分泌多种可溶性蛋白,发现有纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、淀粉酶。用松材线虫产生的分泌物、纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、淀粉酶接种3年生黑松(Pinus thunbergii),发现松材线虫产生的分泌物和纤维素酶能够导致松针枯死。这暗示松材线虫的分泌物可能是松材线虫病因之一。     

不同松材线虫群体对黑松的致病性测定

测定了中国、日本、加拿大的松材线虫（Bursaphelenchus xylophius)群体3－4年生黑松的致病性，发现它们的致病力有明显分化。松材线虫不同群体致黑松的死亡率为0－87．5％，RHS系数为0－110不等。中国松材线虫群体致病力高于日本和加拿大群体，其中以中国的BxCN1,BxCN3,BxCSC和BxCZD4个群体致病力最强，致枯率均为87．5％，RHS系数均大于90。在致枯率为87．5％的6个群体中，南京的群体BxCN3平均死亡天数量短（38d)。在全部测试群体中，Bx-CZD的死亡历期最短（14d)。试验发现接种松材线虫的松苗有带虫不表现症状的现象，这对于病害的传播非常重要。     

松材线虫和拟松材线虫种间及种下群体的RAPD指纹分析

利用ＲＡＰＤ技术对松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）和拟松材线虫（Ｂ．ｍｕｃｒｏｎａ－ｔｕｓ）的分离物基因组ＤＮＡ进行了ＤＮＡ片段的随机扩增,以确定种间及种内群体的亲缘关系和筛选具有种鉴定特征的分子标记．通过对４０个１０聚体随机引物的筛选,应用８个引物对两种线虫种间及种内分离物扩增片段的遗传分析显示：两种间群体ＲＡＰＤ扩增片段的共享度为４０％～５６％,而在松材线虫的不同分离物之间的共享度为６０％～８４％;其中有一个引物（Ｐ２５３）可在松材线虫和拟松材线虫种间产生具有种鉴定特征的特异性ＲＡＰＤ片段,在松材线虫的不同分离物中均可产生一约７００ｂｐ的特异性片段,而在拟松材线虫中产生了两个分别约为１３００ｂｐ和１９００ｂｐ的特异性片段．     

松材线虫和拟松材线虫的PCR快速检测

利用PCR技术对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus与拟松材线虫B．mucronatus的rDNA的ITS1区和5．8S区核甘酸序列扩增．根据松材线虫与拟松材线虫的ITS1序列区别,分别设计出松材线虫和拟松材线虫的特异性引物,实现了单条活的或FG(φ为4％的甲醛)固定的松材线虫和拟松材线虫的快速检测．     

四川松材线虫与拟松材线虫的PCR-RFLP鉴别

应用PCR-RFLP技术对来自四川省8个地方的枯死松树样品中的伞滑刃属线虫(Bursaphelenchus)群体进行了分子鉴定。结果显示来自邻水、雅安的枯死松树样本中含有松材线虫(B.xylophilus),而来自大竹和遂宁的枯死松树样本中含有拟松材线虫(B.mucronatus)。其他伞滑刃属线虫包括莱鲁尔夫伞滑刃线虫(B.rainulf)、霍夫曼伞滑刃线虫(B.hofumanni)、泰国伞滑刃线虫(B.thailandae)、变异伞滑刃线虫(B.aberrans)。本研究中选用的4种限制性内切酶(DraⅠ、SalⅠ、HhaⅠ、AluⅠ)除SalⅠ外均可对所鉴定的这6种伞滑刃属线虫产生特异性的酶切位点,从而可均有效地鉴别出松材线虫、拟松材线虫和其他4种伞滑刃属线虫,其结果可为今后这几种伞滑刃属线虫的分子鉴定提供一定的参照。     

松材线虫的人工培养研究

本研究用松木屑和真菌培养松材线虫，结果表明：无菌的松木屑不能生长和繁殖线虫，有菌的才能繁殖线虫，其效果随松木屑来源（松树品种）的不同而异，不同的真菌培养线虫的效果有较大差异．长喙壳菌（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓｓｐ．）、毛壳菌（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍｓｐ．）和镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．）的效果明显优于常用的灰葡萄孢菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）和盘多毛孢菌（Ｐｅｓｔａｌｏｔｉａｓｐ．），可选用于培养松材线虫，在真菌菌落上，不同的接种虫量以及不同的温度对松材线虫的培养均有一定的影响．     

检疫性害虫松材线虫研究进展

松材线虫病是一种在松树中常见的病害,对松属植物具有致命性破坏,被称为"松树癌症"。其发病速度快、危害大,且难以防护与控制。研究松材线虫病的危害与防治,可以保护森林资源,推动林业可持续发展,对于保持自然生态平衡具有重大意义。松材线虫病由松材线虫寄生引发,文中概述了松材线虫的生活史、形态学特征、分布范围、传播方式、致病机理、松材线虫病的主要症状以及国内外生物防治的研究进展等,以期为相关研究及防控提供参考。     

松材线虫的快速检测

从形态学检测、化学生化检测、分子生物学检测3个方面,对现行的松材线虫的快速检测技术进行了综述。     

黄山松松材线虫病抗性候补木的选拔及评价研究

[目的]选拔黄山松松材线虫病抗性候补木并进行评价。[方法]于2003年11月在潜山县天柱山林场、青阳县九华山景区、黄山区汤口镇的4片黄山松林分中选择黄山松抗性候选母树63株;2004年春季播种育苗,2005年7月和2006年7月中旬分别进行了1次及2次接种测定。[结果]对抗性候补木选拔母群体培育的63个家系、约13 505株苗木的1次接种检定表明,平均生存率为39.02%;对1次接种测定合格的57个家系、5 250株苗木所作的2次接种测定表明,平均生存率为8.46%。应用2次接种测定合格的家系生存率来评价黄山松松材线虫病抗性强弱,区别出8个抗性强的家系。[结论]在抗性苗木生产之前,可以早期利用该8个家系的原母树;今后还需要通过无性系接种测定,选择出具有较强抗性的家系和单株,营建黄山松无性系抗性种子园。     

α和β-蒎烯胁迫下松材线虫转录组特征

为研究松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)对寄主蒎烯胁迫反应的分子机制,按m(α-蒎烯)∶m(β-蒎烯)=1.0∶0.4配制α和β-蒎烯混合液,并以该混合液处理下的松材线虫为研究对象,通过高通量测序技术平台Illumina HiSeq 2000对其转录组进行测序。结果表明:α和β-蒎烯混合液对松材线虫繁殖率存在显著影响,低质量浓度时抑制松材线虫的繁殖,高质量浓度时促进松材线虫的繁殖。α和β-蒎烯混合液质量浓度为17.16 g L-1时对松材线虫的繁殖抑制效果最明显,从该质量浓度处理下松材线虫的转录组中筛选出差异表达基因146条,其中上调表达116条,下调表达30条,主要包括细胞色素酶P450基因家族、葡萄糖醛酸脱氢酶家族。GO富集生物学过程主要包括氧化还原作用、单体生物代谢过程以及血红素结合等功能分类,KEGG富集的代谢通路主要包括外源物质的P450代谢通路和药物代谢通路。松材线虫在蒎烯胁迫过程中细胞色素酶P450基因家族和葡萄糖醛酸脱氢酶家族可能发挥了关键作用。     

营林卫生伐措施防治松墨天牛对松材线虫病控制作用研究

通过采用营林卫生伐措施,清理遭受病虫危害的松树病枯死树、衰弱木、被压木、枯枝等,分析比较常年清理、集中清理和不清理等不同处理方式对松墨天牛成虫种群数量动态和松病枯死树数量变化情况的影响。结果表明:经3a的处理,3种处理方式对松墨天牛成虫种群数量动态和松病枯死树数量变化差异明显。其中,松墨天牛成虫虫口减退率和防治效果分别为:常年清理为94.09%和94.62%、集中清理为52.82%和57.03%,不清理天牛成虫虫口数量增加9.91%;松病枯死树减退率和防治效果分别为:常年清理为100%和100%、集中清理为69.28%和86.53%,不清理松病枯死树数量增加128.02%。     

脉冲磁场对松材线虫的影响

研究了脉冲磁场对松材线虫的影响。结果表明:脉冲前沿宽度越大、处理时间越长、脉冲周期的缩短,对松材线虫的影响越大;脉冲前沿宽度在5ms和10ms的情况下,随处理时间的延长,松材线虫的活动性受抑越明显,虫体复原所需时间也越长;脉冲磁场处理后,3、4龄幼虫和雌虫的抗性较强,仍具有较好的迁移能力,但2龄幼虫和雄虫受抑制显著、少有迁出;在脉冲前沿宽度1ms以下、处理时间短于20min时,对松材线虫的繁殖影响很小。     

松材线虫病致病机理的研究进展

从病理生理学和与病害相关的微生物2个方面论述了松材线虫病致病机理的研究进展；从6个方面对病理生理学进行了阐述，包括水分代谢、活性氧代谢、苯丙烷类代谢、酶、毒素和激素，并指出了该领域今后的研究方向。     

松材线虫病防治对策浅析

松材线虫病是松树的"癌症",对松树资源造成极大的损害,严重影响国民经济的发展。本文简述了松材线虫病的发病机理及危害,并对松材线虫病防控对策作了浅析,对实际工作具指导作用。     

松树抗病育种研究进展

综述了国内外在松树抗病育种的材料选拔与方法、抗性标准评估、抗性机理以及运用基因工程技术开展抗病育种的研究进展,尤其总结了松材线虫病抗病育种研究的状况。     

休眠松材线虫幼虫快速检疫方法

较系统地介绍了采用物理与化学相结合的方法,快速破除木包装中松材线虫幼虫休眠期,加速休眠幼虫转变为成虫,促进休眠幼虫的分离数量,缩短检疫时间,提高松材线虫的检出率。     

松材线虫对湿地松叶片质膜和可溶性糖的影响

松材线虫病由松材线虫引起，是一种毁灭性的森林病害。到目前为止还没有找到有效的途径来防治此病．以接种松材线虫的湿地松来作为实验材料。对感病湿地松叶片内可溶性糖含量与叶片质膜透性变化的关系进行研究．结果表明，湿地松叶片的质膜透性与可溶性糖含量呈正相关，可溶性糖含量的多少在湿地松抗病过程中有重要作用，可溶性糖含量的增加是湿地松产生抗性的一种积极表现，可溶性糖含量的增加可以作为湿地松产生抗性的一个理化指标．