辣椒染色体倍性水平的快速检测

为了寻求简便、快速的辣椒染色体倍性鉴定方法,以辣椒纯系B19、B23花药培养产生的单倍体植株(n=x=12)及用其种子长成的二倍体植株为试材,对用气孔保卫细胞叶绿体计数法鉴定其倍数性进行了研究。结果表明,单倍体和二倍体辣椒植株气孔保卫细胞叶绿体数平均值的差异极显著,单倍体的叶绿体数在13以下,二倍体的叶绿体数等于或大于13;气孔叶绿体数目随染色体倍数性的增加而增加,用气孔保卫细胞叶绿体数目预测植株倍性的准确率可达92.68%。表明采用气孔保卫细胞叶绿体计数法可以在苗期快速、准确地确定植株的染色体倍性。     

西葫芦胚囊再生植株快速繁殖及倍性鉴定

以西葫芦胚囊再生植株的茎尖为外植体,系统研究了植物生长调节剂对植株茎尖增殖和增殖腋芽生根的影响,比较了茎尖、根尖及卷须利用染色体计数法进行倍性鉴定的差异,并对气孔密度、保卫细胞叶绿体数与倍性的关系进行探索。结果表明,诱导腋芽最佳培养基是MS+0.50 mg/L6-BA,增殖腋芽生根最适培养基为MS+0.10 mg/L NAA;单倍体和二倍体植株间的气孔密度、保卫细胞叶绿体数的差异均显著,相同面积(100倍显微镜视野面积1.77 mm~2)内气孔数随倍性的增加而减少,气孔保卫细胞叶绿体数随倍性的增加而增加,以7个作为判定倍性的分界指标,叶绿体数小于7个的为单倍体,大于或等于7个的为二倍体,判定单倍体和二倍体的准确率分别达95.73%和94.51%。另外,卷须作为染色体倍性鉴定材料效果好,是根尖鉴定的有效替代材料。     

烟草花粉植株染色体倍性苗期快速鉴定

为了提高烟草单倍体育种中花粉苗的利用效率,采用气孔保卫细胞叶绿体计数法对花粉植株染色体倍数性鉴定进行了研究.结果表明:单倍体、二倍体、多倍体的叶绿体数平均值分别为11.559,20.458,35.056个,差异极显著;通过对叶片进行失水处理,解决了幼嫩叶片不易制片的问题,结合第3,5,8,13,17叶的叶绿体数分布,将鉴定时期提到了移栽前的第5叶,得出了每株只计数1个气孔叶绿体数的一种快速、准确的计数方法--叶绿体数倍性分界法.该方法准确率高达98.5%.     

不同十字花科作物气孔保卫细胞周长和叶绿体数目与其倍性的相关性研究

以油菜、青梗菜、春菜为试验材料,对其叶片气孔保卫细胞周长及叶绿体数目与其倍性关系进行了研究,结果表明:不同作物间气孔保卫细胞周长及叶绿体数目差异显著;相同作物二倍体与单倍体植株气孔保卫细胞周长及叶绿体数目差异显著;气孔保卫细胞叶绿体计数鉴定与植株形态观察鉴定植株倍性相结合,鉴定结果一致。利用植株气孔保卫细胞周长及叶绿体数目鉴定植株倍性,可作为早期快速鉴定植株倍性的一种方法。     

不同十字花科作物气孔保卫细胞周长和叶绿体数目与其倍性的相关性研究

以油菜、青梗菜、春菜为试验材料,对其叶片气孔保卫细胞周长及叶绿体数目与其倍性关系进行了研究,结果表明:不同作物间气孔保卫细胞周长及叶绿体数目差异显著;相同作物二倍体与单倍体植株气孔保卫细胞周长及叶绿体数目差异显著;气孔保卫细胞叶绿体计数鉴定与植株形态观察鉴定植株倍性相结合,鉴定结果一致。利用植株气孔保卫细胞周长及叶绿体数目鉴定植株倍性,可作为早期快速鉴定植株倍性的一种方法。     

烟草植株染色体倍数性与叶绿体数的相关性研究

为了提高气孔保卫细胞叶绿体计数法鉴定烟草花粉植株染色体倍性的效率,对烟草植株染色体数与气孔保卫细胞叶绿体数的相关性进行了研究．结果表明,各倍性烟草植株气孔保卫细胞叶绿体数平均值之比符合相应倍性间的染色体数的比值：叶绿体数的分布服从正态分布．     

甘蓝游离小孢子培养及再生植株倍性鉴定研究

对108个甘蓝品种进行游离小孢子培养,计算出胚率,分析表型与出胚难易的关系。经流式细胞仪对其再生植株进行倍性鉴定,计算自然加倍率。以流式细胞仪的结果为基准对再生植株叶片气孔保卫细胞周围叶绿体数目,保卫细胞长、宽以及周长规律进行研究。结果表明:具有圆球、早熟、春甘蓝3个特性的甘蓝品种易出胚,而扁球、中熟、晚熟以及越冬甘蓝不易出胚;再生植株的自然加倍率会因基因型的不同而有较大差异;不同倍性的再生植株叶片保卫细胞周围叶绿体平均个数所得规律为:单倍体6~9个,二倍体9~12个,四倍体12~23个,且随着倍性的增加,叶绿体个数分布范围更加广泛。保卫细胞长度变化范围为:单倍体18~23μm,二倍体25~35μm,四倍体35~45μm。保卫细胞周长变化范围为:单倍体60~75μm,二倍体75~95μm,四倍体100~115μm。保卫细胞宽度随气孔大小变化而差异较大,规律不明显。在保卫细胞长度和周长均能说明倍性的情况下,显然通过测量保卫细胞的长度来判定倍性的方法更为简便。     

茄子花药培养再生植株倍性鉴定

采用细胞中染色体计数、叶绿体计数和叶片下表皮气孔大小观测等方法,以植株来源的原始二倍体为对照,对茄子花药培养获得的7个植株进行倍性鉴定。结果表明:7个再生植株中,5株为单倍体,1株为二倍体,1株为四倍体。根尖细胞染色体计数法是鉴定单倍体的最佳方法;多倍体可以采用减数分裂过程进行倍性鉴定;表皮气孔大小、保卫细胞中叶绿体数目、成株期叶形指数均可以作为倍性鉴定的间接方法;3种间接鉴定方法结合植株结实和结籽性,可以准确鉴定植株倍性。     

甘蓝类蔬菜小孢子再生植株染色体倍性与气孔保卫细胞叶绿体数的相关性

 【目的】研究甘蓝类蔬菜游离小孢子再生植株的染色体倍性与气孔保卫细胞叶绿体数的相关性,为甘蓝类蔬菜提供一种快速、简易、经济、实用而又可靠的倍性鉴定方法。【方法】采用分布型分析和t测验,对结球甘蓝、青花菜和芥蓝不同倍性的小孢子再生植株的气孔保卫细胞叶绿体数进行统计分析。以根尖染色体计数法和田间形态学观察法的倍性鉴定结果,对叶绿体数分界法的可靠性进行验证。【结果】同一倍性植株上的不同叶片间及同一叶片的不同部位间,气孔保卫细胞叶绿体数平均值及变异幅度非常接近。同一小孢子再生植株群体内的不同倍性植株的叶绿体数平均值差异极显著。不同倍性植株间的气孔保卫细胞叶绿体数均呈正态分布。本研究提出了一种根据甘蓝类蔬菜气孔保卫细胞叶绿体数进行染色体倍性鉴定的方法,即气孔保卫细胞叶绿体数≤10的为单倍体,10＜叶绿体数≤15的为二倍体,＞15的为多倍体。该方法经花期形态学观察和根尖染色体计数法验证,其吻合率达93.93%,且此倍性鉴定方法稳定,不受植株生长环境等外界因素影响。【结论】甘蓝类蔬菜游离小孢子再生植株的染色体倍性,可于幼苗期根据气孔叶绿体数目的多少进行鉴定,而且此倍性鉴定方法简单、快捷、经济而又可靠。     

俺队是怎样开展烟草单倍体育种的

俺大队的烟草单倍体育种工作是在烟草所、植物所的同志具体帮助指导下进行的。1972年开始种植烟草花粉植株的后代,1973年8月自己育成了第一批单倍体烟苗,逐步开展了田间试验、示范,1974年大田试验、示范面积达到11亩。 1972年5月,县、社党委派我们到烟草所学习烟草单倍体育种,烟草所和植物所的同志手把手地教了我们半个月,临走时送给了我们两个用金星提纯复壮的单倍体烟果,回队后我们将烟果育了苗,栽到温室里培育。这年冬天,烟草所的同志又帮助我们在温     

谷类作物花药诱导单倍体的产生和利用

在特定的化学培养基上,培养未成熟花药,产生大量单倍体植株的工作,目前在许多植物中已经可能了。本文引用的资料,说明了培养基的配方,产生花药的植株的生长环境,花药培养的环境,小孢子的发育时期,以及各个培育的物种的基因型等因素,都能影响单倍体植株的产生。也说明了在其他物种中,试图获得用花药培养的单倍体植株,应予考虑的问题。单倍体植株染色体加倍的一些方法,目前正在成功地利用。单倍体植株,及其诱导得来的纯合二倍体,也正被用于实际的和基础的研究。在烟草中,通过单倍体途径,培育化学品质和农艺性状都有改进的优良选系的工作,已经得到发展。单倍体植株,在诱发突变研究方面,已特别有用。在普通烟草中,花药培养的单倍体,也是发展单体、缺体、三体和四体等非整倍体材料的工具。     

辣椒染色体倍性与气孔性状的相关性

以辣椒GT3、GT10和GT16的花药培养再生单倍体植株和其种子植株为试验材料,对叶片的气孔密度、保卫细胞叶绿体数、保卫细胞横纵径等气孔性状进行显微镜观察与统计分析.结果显示:随辣椒染色体倍性的提高,叶片气孔密度呈明显下降趋势;保卫细胞叶绿体数与保卫细胞横径呈明显上升趋势;保卫细胞纵径升高变化不明显.表明叶片气孔密度、保卫细胞叶绿体数、保卫细胞横径可作为鉴定辣椒染色体倍性的有效依据.     

南瓜胚囊再生植株倍性鉴定方法的比较

以南瓜胚囊再生植株为材料,采用形态学鉴定法、根尖染色体计数法和气孔保卫细胞叶绿体计数法3种方法对46株南瓜胚囊再生植株的倍性进行鉴定。结果表明:在46株再生植株中,有12株再生植株生长势弱、叶片较薄、叶脉不明显、分枝少、根系不发达,与其他倍性植株在形态上有明显差异;进一步进行染色体计数后,发现仅有7株再生植株的染色体数n=x=22,7株单倍体植株的保卫细胞叶绿体数的平均值为4.28个,正常二倍体组培苗的平均叶绿体数目为8.37个。说明形态学鉴定法只能作为倍性鉴定的一种辅助方法,而染色体计数法虽直接、准确,但效率低,气孔保卫细胞叶绿体计数法高效、简便。     

非洲菊大孢子再生植株倍性的快速鉴定方法

以非洲菊大孢子再生植株群体为材料进行倍性鉴定,并以染色体计数法的鉴定结果为依据,研究利用DNA流式细胞仪测定法、气孔保卫细胞叶绿体计数法和形态学特征鉴定非洲菊大孢子再生植株倍性的可靠性。结果表明,非洲菊大孢子再生植株是倍性水平不同的混合群体,倍性分布为单倍体、二倍体和混倍体,但不同基因型各倍性植株所占比例不同;根尖染色体计数法直观、准确,但因非洲菊染色体小且数目较多而导致计数困难;DNA流式细胞仪鉴定法的准确率达95%以上,可用于再生植株群体倍性的快速鉴定;气孔保卫细胞叶绿体计数法的准确性还有待进一步探讨;植株形态鉴定法受培养条件及评定标准的影响较大,准确率偏低。     

双价抗虫基因共转化烟草叶绿体的研究

 分别构建苏云金芽孢杆菌晶体毒蛋白基因 [BtCryIA(C) ]和水稻巯基蛋白酶基因 (Oryzacystatin ,OC)叶绿体转化载体 ,其中Bt基因叶绿体转化载体以烟草叶绿体基因trnH psbA trnK为同源片段 ,以水稻 (OryzasativaL .)叶绿体 psbA基因启动子和终止子为调控基因 ;OC基因叶绿体表达载体以烟草叶绿体基因片段 psbA ORF5 12为同源片段 ,以烟草叶绿体 16S启动子和终止子为调控基因 ;两载体均以壮观霉素抗性基因 (aadA)为筛选基因。利用基因枪方法 ,共转化烟草叶片 ,获得壮观霉素抗性植株。经Southern、Western检测、表达蛋白活性测定证明 ,双价抗虫基因己整合到烟草叶绿体中并得到表达。转基因植株抗棉铃虫试验表明 ,转基因植株具有显著杀虫活性     

在试管中筛选烟草抗黑胫病突变体

用烟草体细胞愈伤组织与烟草黑胫病菌共同培养,在209块G_(140)烟草体细胞愈伤组织中有1块长出抗菌突变系,离开选择压力后经3次140天继代培养仍能表达抗性。用烟草黑胫病菌接种在单倍体试管苗上,从546株八大香单倍体试管苗中筛选到1株(代号RB_1)、从2431株小黄金1025单倍体试管苗中筛选到2株(代号RS_(1.3))抗病突变系。初步鉴定RB_1、RS_(1.3)、的抗病性均超过其亲本和高抗品种G_(140);取RB_1、RS_(1.3)叶片培养,其体细胞无性系植株群体仍具抗病性。     

豌豆凝集素基因转化单倍体烟草

豆科植物凝集素在对根瘤菌的识别中起重要作用。通过农杆菌介导，采用叶盘法将豌豆凝集素基因转化单倍体烟草，获得了转基因再生植株。对转基因植株进行了GUS检测。该转基因单倍体烟草可用于非豆科植物进凝集素对根瘤菌的识别作用研究。     

组织培养技术在油菜育种中的应用

一、小孢子培养在细胞遗传学和育种中的应用Ｅｂｅｒ等（法国）培养了甘蓝型油菜单倍体植株产生的小孢子 ,并获得了苗子。培养单倍体植株的小孢子的目的是想从中分离Ａ和Ｃ基因组 ,即分离出白菜型油菜或甘蓝 ,或者创造非整倍体油菜。作者观察了单倍体植株的花粉母细胞染色体的减数分裂行为和单倍体自交、单倍体与单倍体杂交、单倍体与二倍体杂交的结实率和子代的染色体数。用流细胞仪（ＦｆｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ）和同工酶分析了培养的单倍体植株小孢子形成的植株的染色体数和谱带特征。结果是 ,从培养单倍体植株小孢子产生的苗中没出现…     

培育烟草花粉植株的试验初报

从花药诱导单倍体植株,自1964年印度新德里大学的Guha等人用毛叶蔓陀罗(Datura innoxia)成熟花药培养获得成功之后,许多国家都相继开展了这项工作,并先后在烟草、水稻、茶树等几十种植物上培养花粉获得了单倍体,从而开创了一条快速育种的新途径。我国在小麦单倍体上首先获得成功(1),并已在烟草、水稻、辣椒等作物上作出了很多富有成效的工作(2、3)。这生动地说明了我国科学工作者在毛主席的“自力更生、艰苦奋斗”的方针指导下,在多快好省、建设社会主义的大道上,已在短期内迈出了可喜的步伐。我院在国内外农业科学技术大好形势的推动下,于1972年夏组织了“三结合”科研小组,逐步开展了烟草、水稻、油菜等作物的单倍体诱导工作。兹将烟草上的初步试验结果,报告如     

Bt基因转入烟草叶绿体获得转化植株的研究

构建了苏云金杆菌晶体毒蛋白基因Cry1Ab的烟草叶绿体表达载体pCTBt,该载体以烟草叶绿体基因组trnI-trnA为同源重组片段,含有壮观霉素抗性筛选标记基因aadA、质体特异性启动子Prrn和终止子TpsbA.利用基因枪转化法,将pCTBt导入栽培烟草红花大金元叶绿体,经过4次继代筛选,获得9个抗壮观霉素的转化株系,转化频率为0.3～0.6株/枪,其中有5个株系PCR检测结果为阳性,初步确定Cry1Ab基因已整合到烟草叶绿体中.转基因烟草抗斜纹夜蛾试验表明,幼虫死亡率为10%～75%,转基因烟草植株具有较好的杀虫活性.