水产品中弧菌的PCR技术检测研究进展

水产品中副溶血性弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌均是食源性致病菌,对这些菌种灵敏、快速的检测方法对水产品安全以及保护人类健康极为重要.主要综述了水产品中副溶血性弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌的分子生物学检测研究进展.     

科玛嘉弧菌显色培养基对创伤弧菌检测效果的研究

[目的]探讨科玛嘉弧菌显色培养基(CHROMagarTMVibrio)对创伤弧菌的检测效果。[方法]通过CHROMagarTMVibrio、梅里埃弧菌显色培养基(ChromID Vibro)与硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖(TCBS)琼脂培养基之间进行比对,采用阳性菌株直接平板计数和人工污染样品的方法,对CHROMagarTMVibrio的灵敏度、特异性和检测效果进行评价。[结果]CHROMagarTMVibrio平板上创伤弧菌为绿色圆形直径约2～3 mm的光滑菌落(培养24 h后)。CHROMagarTMVibrio平板在特异性上优于另2种平板,在灵敏度上跟ChromIDVibro相近,但大大优于TCBS平板。当样品中大约有3.0 cfu/ml浓度的目标菌时,经过选择性增菌培养,3种平板均可以检出。[结论]CHROMagarTMVibrio具有良好的灵敏度、特异性,能提高创伤弧菌的检出率。     

一株海洋弧菌噬菌体--NP13的生物学特性研究

１９９６年夏季,从大连星海湾海滨浴场采集的海水样品中,以河流弧菌Ⅱ（Ｖｉｂｒｉｏ ｆｌｕｖｉａｌｉｓ－Ⅱ）为批示菌,从中分离出一株噬菌体－ＮＰ１３。对ＮＰ１３的形态进行了电子显微镜观察分析。并对其生物学特性进行了初步的研究。结果表明：ＮＰ１３在５０℃、３０ｍｉｎ和６０℃、３０ｍｉｎ下的存活率各约为９５％和４５％,并在ｐＨ５～１１之间均具有很高的稳定性。     

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌

为建立创伤弧菌的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测方法,根据编码创伤弧菌DNA促旋酶的B亚单位蛋白(Gyrase Beta Subunit,gryB)的基因保守序列,设计RPA特异性引物,建立创伤弧菌gryB基因的RPA检测方法并测试其特异性、灵敏度和应用效果。结果发现,建立的RPA检测方法特异性好,能够从创伤弧菌中检测到234 bp的特异性条带,仅需在37℃下恒温反应40 min,不需要特殊的仪器设备;该方法的灵敏度与PCR相当,可达到0.1 ng/μL,应用检测结果也表明该方法与传统培养方法相当。因此,本研究建立的RPA方法检测gryB特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合实验室快速检测。     

海洋致病性弧菌常见快速检测技术研究进展

综述常见海洋致病性弧菌的免疫、分子生物学等检测技术近几年的发展历程及现状,对检测技术的原理、技术特点、应用范围进行归纳总结,为海洋致病弧菌快速检测、防治的研究提供参考和借鉴。     

创伤弧菌快速检测法的建立

[目的]针对创伤弧菌(Vibrio vulnificus)采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,基于单克隆斑点杂交技术进行改良,建立一种创伤弧菌快速检测方法。[方法]由水产品牡蛎中分离获得一株创伤弧菌FD-1,以其灭活全菌为抗原免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体。在此基础上,对传统斑点杂交技术进行优化改进,以化学发光试剂ECL替代传统TMB底物,进一步提高其灵敏度、缩短检测时间和简化操作步骤。[结果]与传统斑点杂交法相比,改良斑点杂交法的检测时间可缩短至2 h,检测限可达1×10~5CFU/m L。[结论]改良斑点杂交法比传统TMB底物斑点杂交法(1×10~7CFU/m L)灵敏度提高了100倍,操作过程简单,在水产品检验和医疗诊断方面具有良好的开发应用前景。     

黄檀的生物学特性和造林技术

黄檀属豆科黄檀属树种,落叶乔木,阳性喜光树种,对土壤适应强,在酸性、中性及石灰性土壤均能生长,能耐干燥瘠薄。深根性,有根瘤茵,是荒山荒地造林的先锋树种。笔者根据多年的工作经验,总结出了黄檀的育苗造林技术,供大家参与     

用美人鱼弧菌与创伤弧菌人工感染卵形鲳鲹的组织病理学研究

用美人鱼弧菌Vibrio damsela与创伤弧菌V.vulnificus人工感染卵形鲳鲹Trachinotus ovatus后,对病鱼的组织病理变化进行了观察和分析。结果显示:美人鱼弧菌与创伤弧菌均能引起鱼的鳃、肝、脾、肠、胃、肾等多种组织器官发生较为严重的病理变化,且这两种弧菌导致的病鱼组织病理变化存在较多的相似性。病鱼鳃严重病变,鳃小片上皮细胞增生,相互融合在一起呈棍棒状,鳃小片基部的泌氯细胞肥大,有的泌氯细胞与鳃小片上皮细胞层连在一起;肝严重出血或发生脂肪变性,肝组织结构疏松,肝细胞变性坏死;胃、肠黏膜变性坏死,脾、肾出血;肾小球、肾小管与肾间质变性坏死等。     

用美人鱼弧菌与创伤弧菌人工感染卵形鲳鲹的组织病理学研究

用美人鱼弧菌Vibrio damsela与创伤弧菌V.vulnificus人工感染卵形鲳鲹Trachinotus ovatus后,对病鱼的组织病理变化进行了观察和分析。结果显示:美人鱼弧菌与创伤弧菌均能引起鱼的鳃、肝、脾、肠、胃、肾等多种组织器官发生较为严重的病理变化,且这两种弧菌导致的病鱼组织病理变化存在较多的相似性。病鱼鳃严重病变,鳃小片上皮细胞增生,相互融合在一起呈棍棒状,鳃小片基部的泌氯细胞肥大,有的泌氯细胞与鳃小片上皮细胞层连在一起;肝严重出血或发生脂肪变性,肝组织结构疏松,肝细胞变性坏死;胃、肠黏膜变性坏死,脾、肾出血;肾小球、肾小管与肾间质变性坏死等。     

伯乐树的生物学特性与繁育技术研究进展

伯乐树为柏乐树科伯乐树属、落叶乔木,是中国特有的单种科属树种,属于国家一级重点保护植物、国家一级珍贵树种,有“植物中的龙凤”之美誉,在研究被子植物的系统发育和古地理、古气候等方面都有重要科学价值。本文介绍了伯乐树的植物学特征、自然分布及生长特征,总结了伯乐树播种、扦插、组织培养繁育技术、幼苗生长特征、迁地保护技术等方面的最新研究进展,同时对伯乐树的研究前景进行了展望,针对存在的问题提出未来的研究方向,可为伯乐树的保护和可利用提供参考。     

樟疫霉生物学特性及防治技术研究进展

樟疫霉是世界上广泛分布的危害花卉、林木的土传病原菌之一。综述了樟疫霉的分布与危害、分离与鉴定、流行规律与生物习性、预防与防治等方面的研究进展,为樟疫霉的进一步研究与防治提供参考。     

多重PCR检测四种食源性病原弧菌

【目的】建立在扩增内标存在下同时快速检测溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌4种食源性致病菌的五重PCR方法。【方法】以细菌16S rRNA基因为扩增内标靶序列,针对溶藻弧菌gyrB基因、副溶血弧菌collagenase基因、创伤弧菌vvhA基因、霍乱弧菌ompW基因,分别设计特异性引物,建立多重PCR体系,对其灵敏度和特异性进行评价,并将建立的五重PCR应用于弧菌的筛选。【结果】建立的多重PCR检测体系对混合模板中副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌的灵敏度达10 CFU/mL,霍乱弧菌的灵敏度达105 CFU/mL,经特异性评价证实其特异性好,并能有效指示PCR反应的假阴性,将建立的多重PCR应用于69株疑似弧菌菌株的鉴定,其结果与生理生化鉴定结果一致。【结论】该方法能够快速、灵敏、准确地检测溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌和霍乱弧菌4种食源性致病菌,灵敏度高,并能有效指示PCR反应的假阴性,适用于食品中常见致病性弧菌的快速筛检。     

黄曲霉毒素检测及其生物防治方法的研究进展

介绍了黄曲霉毒素的危害、检测方法,并利用微生物之间的竞争作用筛选出能抑制产毒黄曲霉生长的菌株,由此来降低黄曲霉毒素的污染,从根源上解决黄曲霉毒素污染问题。     

副溶血性弧菌分子检测与分型研究进展

副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐菌,常通过食用被该菌污染的食品导致食物中毒。该文综述了副溶血性弧菌的分子检测技术如PCR、环介导等温扩增、免疫捕获等,及分型技术如RAPD-PCR、ERIC-PCR、PFGE、核糖体分型、RFLP等,这些方法将为副溶血性弧菌食物中毒提供重要的检测与分型手段,对预防与控制副溶血性弧菌食物中毒具有重要意义。     

创伤弧菌中药药敏试验及药浴组方效果（英文）

创伤弧菌可造成海水养殖鱼类的腐皮病,导致大量死亡,其暴发性很强,会造成严重的经济损失。采用琼脂扩散法(药敏纸片)的方法,测定石菖蒲、大黄等18种中草药对创伤弧菌的作用。结果显示:五倍子、乌梅、沙棘、桉树叶具有抑菌和杀菌的作用,苏木、大黄、石榴皮、薄荷、公丁香有强的抑菌作用。用其中草药做成的药液,对海水鱼进行药浴试验,效果极好。     

多重富集定量PCR(ME-qPCR)同时检测4种食源性病原弧菌

【目的】溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌是4种重要的食源性病原弧菌,能够造成人类多种疾病,建立同时检测这4种食源性病原弧菌的检测方法是保障食品安全的基础。本研究旨在建立同时检测溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌的多重富集定量PCR(multiplex enrichment quantitative PCR,ME-q PCR)方法,并含扩增内标用于指示PCR反应的假阴性,创新一种高通量、高灵敏度、具备定量能力的检测方法,为这4种食源性病原弧菌的检测提供新方法。【方法】以细菌16S r RNA为扩增内标靶序列设计引物,并针对副溶血弧菌的collagenase、溶藻弧菌的gyr B、霍乱弧菌的omp W、创伤弧菌的vvh A,分别设计内、外2对特异性引物,首先将所有内、外引物混合,进行一个循环数较少(10—20 cycles)的高通量多重富集PCR将靶基因富集出来,由于循环数较少,各个基因得到均匀的扩增,每个基因均有4种可能的产物,每1种产物均能作为第二轮巢氏荧光定量PCR的模板,这增加了靶基因从模板中被富集出来的概率,然后将产物稀释后作为模板,利用内引物分别进行巢式荧光定量PCR检测各个基因,最后根据扩增曲线和熔融曲线分析结果。通过设置不同的第一轮多重富集PCR循环数(10、15和20个循环),优化ME-q PCR第一轮循环数。采用14株标准菌株的基因组DNA作为模板,评价ME-q PCR的特异性。并以4种弧菌基因组DNA混合物梯度稀释的样品(100、10、1、0.1、0.01和0.001 ng·μL-1)作为模板,对建立的ME-q PCR进行灵敏度和定量能力的评价。并将该方法应用于已分离到的69株疑似弧菌菌落的鉴定中,与传统生理生化鉴定结果进行对比。【结果】优化后,ME-q PCR的第一轮循环数确定为15,特异性评价结果显示该方法特异性强,灵敏度达0.001 ng,高于普通荧光定量PCR约1个数量级,并能有效指示PCR反应的假阴性,且拥有与普通荧光定量PCR相同的定量能力,扩增效率和R2符合定量的要求;将建立的ME-q PCR方法应用于69株疑似弧菌菌株的鉴定,24个绿色菌落为副溶血弧菌,22个黄色菌落为溶藻弧菌,1个黄色菌落为创伤弧菌,没有检出霍乱弧菌,其结果与生理生化鉴定结果一致。【结论】该方法能够定量、快速准确地检测副溶血弧菌、溶藻弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌这4种食源性病原弧菌,灵敏度高,并能有效指示PCR反应的假阴性,结果无需凝胶电泳,适用于食品中4种常见病原弧菌的快速筛检。     

除草剂残留生物检测研究进展

土壤中除草剂残留对环境有负面影响,相较于复杂的化学检测方法,生物检测法可以直观快速地监测除草剂残留,预警潜在的风险。综述了除草剂残留生物检测技术的研究进展,分析存在的问题,展望今后的发展方向,为除草剂残留快速检测研究提供思路。     

硫甙的生物学特性与多样性研究进展

综述了植物硫甙的结构特点、代谢特征,以及生理学活性和影响硫甙水平的因素,为作物育种和硫甙活性成分的利用提供参考。