用酶联免疫吸附试验检测马传染性贫血病毒抗体

用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测马、骡传染性贫血抗体,并与琼脂扩散沉淀试验(AGID)相比较,结果ELISA检出率为84.26％—96.45％,AGID相应为25.67％—47.87％,前者检测效果优于后者。     

三种梅毒螺旋体抗体检测方法在新生儿梅毒诊断中的应用

目的 探讨梅毒螺旋体-酶联免疫吸附试验、甲苯胺红不加热血清学试验和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验在新生儿梅毒诊断中的应用价值。方法 160例疑似新生儿梅毒患儿均行梅毒螺旋体-酶联免疫吸附试验、甲苯胺红不加热血清学试验和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验检查,比较三种检测方法阳性检出率。结果 梅毒螺旋体-酶联免疫吸附试验对新生儿梅毒的诊断敏感性为95.00%,特异性为91.67%,准确性为93.75%,漏诊率为5.00%,误诊率为8.33%;梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验诊断敏感性为97.00%,特异性为90.00%,准确性为94.38%,漏诊率为3.00%,误诊率为10.00%;甲苯胺红不加热血清学试验疾病诊断敏感性、特异性、准确性、漏诊率和误诊率分别为72.00%、70.00%、71.25%、28.00%和30.00%,三种检测方法敏感性、特异性、准确性、漏诊率和误诊率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 与甲苯胺红不加热血清学试验相比,梅毒螺旋体-酶联免疫吸附试验和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验诊断新生儿梅毒准确性高、特异性强,可提高疾病确诊率。     

D-对羟基苯海因的细胞催化水解工艺优化

从菌中的酶含量和酶活力两方面对微生物酶催化水解的最佳条件进行了探究。结果显示,通过对试验菌种生长曲线的测定,发现该菌在22 h之内为对数期,22~36 h为稳定期,36 h后进入衰退期。在此基础上检测前期诱导培养的菌种内的酶含量为3.6%,然后对该菌破胞后的酶粗提物和不破胞的菌体(全细胞)进行了不同温度和p H值梯度下的水解情况对比,得到两者酶活力最高时的最佳温度和p H值,前者最佳温度为40℃,p H值为8,后者则最佳温度为40℃,p H值为6。最后通过对比得出,酶粗提物的水解效果比全细胞的更佳。     

直接ELISA与PCR联合检测人粪便中的沙门氏菌

采用直接酶联免疫吸附试验(ELISA)与PCR相结合的方法,对某市饮食行业健康人群的1 426份人粪便样品进行沙门氏菌检测,并与国家标准方法对比,直接ELISA法的敏感性和特异性分别达100%和97.2%,PCR法的敏感性和特异性均为100%.确定的沙门氏菌快速检测优化程序为对大量样品采用直接ELISA筛检,去除阴性样品,阳性样品采用PCR法作进一步鉴定;需要定型时则用国家标准方法.此法具有高度的特异性、敏感性和快速简便等优点.     

山羊关节炎-脑炎ELISA方法的建立及其应用

 应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA），检测了山羊关节炎-脑炎病毒（CAEV）试验感染山羊和自然感染山羊的血清抗体，确定了最适宜的反应条件。CAEV感染山羊血清终点滴度结果表明：ELISA比琼脂扩散试验（ID）敏感性高，对自然感染山羊检出率比ID高3%左右。CAE标准阳性血清和自然感染阳性血清预先被特异性抗原中和后的ELISA反应均呈阴性，从而证实了本方法的特异性。因此，本方法适于CAE的流行病学调查和监测工作。     

间接ELISA检测雏鸡烟曲霉菌抗体的研究

以烟曲霉菌丝提取物作为包被抗原 ,建立了检测雏鸡血清中烟曲霉菌抗体的间接 ELISA方法。特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高 ,重复性好 ,其抗原包被浓度为 1 2 4μg/ ml,血清最适稀释度为1∶ 1 6,抗原最佳包被时间为 4℃过夜 ,血清反应时间为 3 7℃作用 1 .5 h。对 1 2 0份人工感染烟曲霉菌的雏鸡血清试验发现 ,间接 ELISA检出时间比琼脂扩散试验早 7d以上 ,检出率高约 40 .8%。表明间接 ELISA试验是一种特异敏感的雏鸡血清烟曲霉菌抗体检测技术     

间接荧光抗体试验和免疫酶染色试验诊断血吸虫病的研究

本文进一步研究了日本血吸虫感染鼠肝组织内虫卵冰冻切片作为血吸虫病诊断抗原的实用价值。用该抗原作间接荧光抗体试验和免疫酶染色试验,采用单盲法检测140例日本血吸虫病人特异性抗体,阳性率分别为96.4％及97.1％;检测100份健康人血清,假阳性率分别为3.0％及2.0％;检测21例丝虫病人及11例华枝睾吸虫病人,交叉反应率为0～9.5％。间接荧光抗体试验和免疫酶染色试验的敏感性均显著地高于环卵沉淀试验.结果表明该抗原是一种较为理想的血吸虫病血清学诊断抗原。     

不同降解工艺对螠蛏肉降解物活性的影响

用正交试验法对螠蛏组织的木瓜蛋白酶酶解工艺进行优选。以酶解液的生物活性为考察指标,研究酶解的温度、时间、pH和酶的用量对酶解产物生物活性的影响。得到用木瓜蛋白酶水解螠蛏组织的最佳条件为:pH 6,酶解温度60℃,酶加入量为底物的0.3%,水解6 h。在此条件下酶解产物的生物活性较高。     

哈茨木霉高产几丁质酶菌株的筛选及产酶条件研究

通过氮离子注入法诱变哈茨木霉(Trichoderma harzianum)野生菌,再以透明圈法对平板培养菌进行筛选,用DNS法测定液体培养菌的酶活,从中筛选出1株产几丁质酶能力高的哈茨木霉菌株H-13,并通过单因素试验和正交试验优化该目标菌株的发酵条件.单因素试验结果表明,添加1.0%蛋白胨时产酶量最高,1.0%胶体几丁质对菌体产几丁质酶的诱导性最强,初始pH 5.5、培养96 h时产酶量较高.正交试验表明,H-13以1.0%蛋白胨为氮源、0.5%胶体几丁质为碳源,在初始pH 5.0的培养基中培养96 h时,发酵液中的几丁质酶活可达到731.69 U?mL-1,比同样条件下的野生菌株酶活力提高1倍.     

口蹄疫液相阻断酶联免疫吸附试验的注意事项

液相阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)主要用于家畜血清口蹄疫A型、O型抗体的检测,具有高灵敏性、特异性,但操作步骤烦琐,耗时较长,操作稍有不慎会造成实验失败。本文根据临床操作经验总结了口蹄疫液相阻断ELISA实验操作中的注意事项,为实验室检测人员提供借鉴。     

双夹心ELISA检测鸡EDS-76病毒抗原的研究

应用鸡抗EDS-76病毒、兔抗EDS-76病毒抗体和羊抗兔抗体,建立了检测EDS-76的双夹心ELISA方法,本试验确定的鸡抗EDS-76病毒抗体、兔抗EDS-76病毒抗体和HRP-羊抗兔抗体的最佳工作浓度分别为1∶160、1∶300和1∶1000。本法对纯化EDS-76病毒的最低检出量约为5 ng/孔。通过对EDS-76病毒试验感染鸡脏器带毒、排毒情况和临床样本的检测,表明双夹心ELISA方法对EDS-76病毒的检测特异性强、敏感度高、适合于成批样本的检测。     

用全血平板凝集抑制试验快速诊断鸡减蛋综合症(EDS_(76))

利用鸡产蛋下降综合症(EDS_(76))病毒具有凝集红细胞的特性,建立了全血平板凝集试验。用各种不同血凝价的病毒制备平板抗原,通过方阵试验,确定了全血平板凝集抑制试验抗原的测试单位。该法具有较高的阳性检出率,而且具有比现有的血凝抑制试验(HI)和琼脂扩散沉淀试验(AGP)更快速、更简便易行的优点,适用于基层单位的推广应用,尤其适于净化种鸡群,淘汰阳性种鸡。     

免疫鸡血清与卵黄中EDS-76抗体水平比较

分别采取接种前和接种后的36只处于产蛋期的试验鸡血液分离血清及收集鸡蛋提取卵黄。卵黄分别用16%NaCl、8%柠檬酸钠和氯仿处理后,与血清一起检测减蛋综合症(EDS-76)病毒间接血凝抑制(HI)抗体。试验结果表明,血清HI抗体效价和卵黄HI抗体效价具有较好的一致性。由卵黄代替血清检测减蛋综合症HI抗体效价,作为鸡群诊断,免疫水平评估和疫苗质量评价的手段是可行的,在减蛋综合症防制中具有实际意义。     

PCR方法检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征(Egg drop syndrome 1976 EDS-76)病毒DNA序列,设计合成了1对能扩增300 bp DNA片段的引物,建立了EDS-76病毒的聚合酶链式反应(PCR)诊断方法。该方法对EDS-76病毒标准株AV-127扩增结果为阳性;对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的扩增结果均为阴性。结果表明该方法特异且敏感,检测的最低病毒DNA含量达到2.5×10-2pg,PCR检测表明,从试验感染鸡的心脏中不能检测出病毒,肝脏和肾脏只有在感染后7~15 d检出,在试验感染后4~21 d的子宫、血液和4~17 d的脾中均能检测到病毒。     

禽白血病检测方法的建立和比较

提纯的禽成骨髓细胞增生病病毒(AMV)经用吐温-80和乙醚裂解后免疫兔,能获得抗禽白血病病毒(ALV)群特异性(gs)抗原的高特异性抗体,试验结果表明这种抗体能满意和有效地用于各种检测方法中。葡萄球菌 A 蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA-ELISA),酶联免疫吸附访验(ELISA),免疫酶组化法(IHCA)和琼脂扩散沉淀试验(AGP)四种方法的比较结果为:PPA-ELISA 的检出率最高,ELISA 的检出率为略低,其次为 IHCA 的检出率,AGP 的敏感性为最低。综合评定为ELISA 是一较为理想和经济的检测方法。广东省部分鸡场抽样检查的结果表明,各鸡场的 gs 抗原的阳性率是很高的,蛋清和胚胎中 gs 抗原的阳性率也很高,显然 ALV 的先天性传递在本病的流行病学中是非常重要的。     

酶联免疫吸附试验检测鸭瘟抗体的研究和应用

应用提纯的鸭瘟病毒作为包被抗原，建立了用于检测鸭瘟抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）间接法。试验结果表明，该法特异性高（与鸭病毒性肝炎等１３种病的阳性血清不发生交叉反应），与血清中和试验的符合率为１００％但其敏感性比血清中和试验至少要高１０００倍，且重复性好，结果可靠，用于大批量样品的检测大约经６小时即可获得结果，是一种适合于血清流行病学调查、进出口鸭对鸭瘟的检疫和对鸭群进行免疫抗体水平检测的敏感、快速、准确性高、特异性强、重复性好且简便实用的方法。     

猪乙型脑炎新型协同凝集试验与酶联免疫吸附试验(ELISA)方法的比较

用新型SPA(Staphylococcal Protein A)协同凝集试验对88份猪血清进行了乙型脑炎病毒(JEV)抗体检测,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行了对比,两种方法检测结果为:ELISA检测阳性率为62.5%(55/88),SPA阳性率为68.18%(60/88),二者阳性符合率为90.0%(54/60),总符合率为86.3%(76/88).对8份SPF猪血清进行检测,两种方法检测结果均为阴性.结果表明,SPA与ELISA检测乙型脑炎结果符合,前者更为简便和实用.     

ND-EDS-76异源二联油苗的研制

将鸭源鸡新城疫 (ND)病毒 D1 0 株和鸡减蛋综合症 (EDS- 76 )病毒 GC2 株同时接种于同一鸭胚内复制 ,增殖 96 h收取尿囊液 ,用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ND- EDS- 76异源二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗生产工艺简单 ,成本低 ,经试用表明可有效地预防 ND和 EDS- 76的发生。     

鸡减蛋综合症病毒（EDS—76）的分离与鉴定

采取新疆五家渠某鸡场发病鸡病料，接种鸭胚，分离病毒，病料在鸭胚中盲传至第５代，鸭胚尿囊液ＨＡ效价达２１７，ＨＡ可被ＥＤＳ－７６标准阳性血清抑制。免疫电镜观察到了病毒颗粒，表明该病是由ＥＤＳ－７６病毒所致     

鸡产蛋下降综合症(EDS—76)灭活油乳剂苗的研究 Ⅱ.不同单位病毒和佐剂的疫苗及和其它同类产品的免疫比较

在本试验中,我们比较了每头份疫苗含不同血凝单位病毒的免疫效果,结果每头份含2000单位和3000单位的病毒疫苗免疫后HI抗体峰值分别为9.2log_2和9.6log_2,而含1000单位病毒的疫苗HI抗体峰值为6.8log_2.油乳剂苗的免疫后抗体效价显著高于氢氧化铝胶为佐剂的灭活苗。