复合酶提取牡蛎抗氧化肽的工艺研究

以牡蛎为原料,首先从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中筛选出胰蛋白酶为内切酶,以水解度为指标,得到最佳的酶解工艺条件:时间4h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％(7 500 U/g),水解度为49.50％;同时以水解度为指标,得到外切酶风味蛋白酶的最佳酶解工艺:时间5h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％ (450 U/g),实际水解度50.95％.最后,以清除羟自由基能力和水解度为指标,探讨内切酶(胰蛋白酶)和外切酶(风味蛋白酶)不同复合酶解方式的抗氧化能力.最终确定,复合酶解制备牡蛎抗氧化肽效果最好,其酶解条件为胰蛋白酶为3％(7 500 U/g)、风味蛋白酶加酶量为3％ (450 U/g),pH8.0,时间5h,料水比1∶2,温度50℃时,水解度高达53.94％,体外清除·OH的EC50为0.56 mg/mL.     

海洋细菌来源低温褐藻胶裂解酶的分泌表达和酶学性质研究

为了筛选稳定性较好的低温褐藻胶裂解酶,本研究进行了海洋细菌分离鉴定、酶的编码基因克隆与分析、酶分泌表达与纯化、不同因素对酶活力和稳定性的影响以及酶解产物分析实验。结果显示,用以褐藻胶为唯一碳源的平板,筛选出一株能分泌低温褐藻胶裂解酶的海洋细菌SJ-H-12,基于16S rDNA序列构建进化树,该菌株鉴定为Yangia sp. SJ-H-12。进而克隆酶的编码基因Alyya,ALYYA属于PL5家族褐藻胶裂解酶。将基因在食品级宿主解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)中进行分泌表达,重组ALYYA的活力达到34.2 U/mL,分子量约为39.0 kDa,具有较强的PolyM偏好性。ALYYA在25℃~35℃时表现出80%以上的活力,且在30℃时表现出最高活力;在pH为5.0~10.0的范围内稳定性较好,孵育后剩余超过60%的活力;0~2.0 mol/L的NaCl能明显激活ALYYA的活力。ALYYA降解褐藻胶的产物主要是二糖,另有少部分单糖和三糖,该酶是一种内切褐藻胶裂解酶。综上所述,本研究筛选到一株产低温褐藻胶裂解酶细菌,所产ALYYA是典型的低温褐藻胶裂解酶,具有优良的酶活力和稳定性。本研究为低温褐藻胶裂解酶的筛选和开发利用提供了参考数据。     

不同水解工艺对鱼溶浆蛋白水解效果的影响

本研究采用单酶水解、复合酶水解、酸水解及酶酸耦合水解4种水解工艺对鱼溶浆进行水解,以水解度为标准确定最佳水解工艺.结果表明:单酶水解工艺中,在最优条件下(酶解温度50℃,初始pH 5,加酶量2000 U/g,固液比1:15)以中性蛋白酶酶解鱼溶浆,其水解度最高值为40.37％;复合酶水解工艺中,中性蛋白酶和碱性蛋白酶复...     

褐藻胶裂解酶产生菌的发酵优化研究

以筛选的羊栖菜腐败菌系不动杆菌属X8菌株为研究对象,对其产褐藻胶裂解酶的发酵培养条件进行优化研究.结果表明,该菌株最适液体培养基组成为(m/V):0.6%褐藻酸钠,0.7%蛋白胨,0.2% KH_2PO_4,0.2 % NaCl,初始pH 7.0.该菌株于25 ℃,150 r/min 振荡培养16 h后,褐藻胶裂解酶酶活可达157.32 U/ml,较优化前提高了1.59倍.Mg~(2+)、Ca~(2+)和Fe~(2+)对菌株产酶有一定的抑制作用.     

锈凹螺褐藻胶裂解酶的分离纯化及性质研究

采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE-Sephadex A25、Sephadex G-100和Sephacryl S-300 HR 柱层析等方法从海洋食藻性锈凹螺(Chlorostoma rustica)消化腺中分离纯化出一种褐藻胶裂解酶(Alginate lyase),得到电泳纯酶制品,并对此酶的酶学性质进行了研究.结果表明:此褐藻胶裂解酶的分子量为28 kD,反应的最适温度为40 ℃,具有热不稳定性,最适pH为7.0;酶的反应受多种离子的影响,Mn2 、Co2 和Cd2 对此褐藻胶裂解酶活性具有明显的抑制作用,而Mg2 、Zn2 、Na 和K 则具有促进作用;采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和聚古洛糖醛酸的特异性,实验表明,此酶对聚古罗糖醛酸(Polyguluronate,PG)有特异性.     

酶解法提取鱿鱼肝油的生产工艺研究

以鱿鱼肝脏为原料,采用AS.1398中性蛋白酶水解提取肝油,选用提取率为指标,通过单因素试验和响应面试验法确定最佳的酶解工艺;并从其肝油的提取率、品质、脂肪酸组成方面与传统水提法进行比较.试验结果表明,最佳酶解工艺参数为:料液比1∶1,酶解pH值6,加酶量1 340 U/g,酶解温度55℃,酶解时间4h;酶提法提取率高于水提法,且过氧化值较低,鱼油品质较好.     

北极参多肽酶解工艺优化

北极参(Cucumaria frondosa)营养价值高,体壁质厚,有极高的开发成多肽产品的潜能。本文以北极参为原料,研究最优酶解工艺。基本成分测定结果显示,北极参蛋白质含量95.03%,脂肪1.76%,灰分2.47%。以酶解液中多肽得率为检测标准,通过枯草杆菌中性蛋白酶与风味蛋白酶组成复合酶进行酶解,通过单因素试验与正交试验,优化加酶量、酶解时间、温度与pH,确定最优酶解工艺;正交试验结果显示北极参的最优酶解工艺为:酶解温度为50℃、pH为8.0、料液比1:5、酶解时间为5h、加酶量为2.09%,多肽得率为15.38%;酶解产物的氨基酸组成结果表明氨基酸总量占干重约85%;通过Sephadex G-50对北极参酶解液的多肽分子量进行分析,结果显示分子量范围在1080~12052 Da。     

海带多糖清除氧自由基的活性及机理

通过比较不同分子量和化学组成的海带硫酸多糖和褐藻胶的清除氧自由基的活性,探讨了海带多糖清除氧自由基活性的构效关系和作用机理。研究发现,分子量为6~15 ku、糖醛酸含量20.4%的低硫组分F-A2清除自由基活性羟基自由基和超氧阴离子自由基活性高于大分子量的组分F-A和F-B,而高硫低分子量组分清除氧自由基的活性非常低。酶降解得到的低分子量褐藻胶组分清除自由基活性随分子量的降低而升高,明显高于其他硫酸多糖,说明硫酸根对低分子量糖与自由基的反应有阻碍,而多糖中糖醛酸含量越高,清除自由基活性越好。大分子量的海带硫酸多糖经铜离子和H₂O₂反应产生的羟基自由基氧化降解以后,直接可以得到两个比较集中的低分子量岩藻聚糖硫酸酯Fa2(分子量为7 ku)和Fa1(分子量为1 ku),其化学组成和清除自由基活性的比较说明自由基首先降解糖醛酸含量高的硫酸糖片断,甘露糖、半乳糖和葡萄糖形成的糖苷键很容易被自由基氧化降解,而高硫高岩藻糖部分不易被自由基水解,研究结果说明,海带多糖的抗氧化活性不仅与分子量和硫酸根含量有关,糖醛酸、岩藻糖含量和糖链上中性糖的组成对多糖的清除自由基活性都有影响。     

非淀粉多糖酶对蛋白酶体外酶解棉籽粕效果的影响研究

采用二步酶解法,先单独使用纤维素酶和果胶酶或二者合用,再用中性蛋白酶(中性蛋白酶500U/g酶解时间5h)酶解棉籽粕,以还原糖生成量、蛋白质水解度(degreeofhydrolysis,DH)和三氯乙酸氮溶指数(trichloroaceticacid-nitrogen solution index,TCA-NSI)为标识,研究NSP酶水平对还原糖生成量、DH和TCA-NSI的影响。结果为:在先用非淀粉多糖(non-starch polysaccharides,NSP)酶水解,然后用中性蛋白酶500U/g水解5h时,单独使用纤维素酶和果胶酶均可提高还原糖生成量、DH和TCA-NSI,适宜水平分别为:纤维素酶350U/g,果胶酶250U/g;同时使用纤维素酶和果胶酶,对提高还原糖生成量、DH具有协同效应,适宜水平为:纤维素酶350U/g和果胶酶250U/g。     

响应面法优化四角蛤蜊酶解工艺条件

为提高四角蛤蜊的利用率,采用木瓜蛋白酶对其软体部位进行酶解。在单因素试验的基础上,研究温度、pH和酶加量对酶解过程的影响,通过三因素三水平的Box-Behnken响应面分析法优化其酶解工艺条件。试验结果表明,所建立的响应面模型极显著（ P＜0．0001）,可以很好的反映各因素与水解度之间的关系,且由模型得出木瓜蛋白酶酶解四角蛤蜊的最佳工艺参数为温度48℃、p H 7．2、酶加量3000 U/g、料液比3∶100（g/m L ）和时间3 h ,在此条件下水解度为37．05％,从而为四角蛤蜊的精深加工利用,尤其是天然海鲜调味料的开发提供理论依据。     

Simple Technologies for Converting Rest Raw Materials of Atlantic Salmon (Salmo salar) into High-Quality,Valuable, and Tasty Feed Ingredients

Rest raw materials as viscera, heads, and frames from farmed Atlantic salmon (Salmo salar) were hydrolyzed with the use of endogenous enzymes and the commercial enzymes Protamex and a mixture of Papain and Bromelain. Composition of the prehydrolysis mixture clearly influenced the quality of final hydrolysate and process kinetics. An increased proportion of viscera increased the amount of endogenous enzymes, which influenced hydrolysis kinetics, the extent of hydrolysis, and increased bitterness. Commercial enzymes, in addition to endogenous enzymes, are not always more yield efficient or economically beneficial but can be used to improve the taste and to ease the separation of oil from the hydrolysate fraction. Hydrolysis of denatured proteins in rest raw materials was hardly detectable. Optimum temperature should therefore be selected to avoid protein denaturation and simultaneously maintain high enzymatic activity. Hydrolysates preferably contain a low concentration of oil, and this work shows that high-quality oil can be separated before hydrolysis by mild thermal treatment. The previous separation of oil did not influence hydrolysate yield and decreased the concentration of lipids in the final hydrolysate. The initial separation of oil also increased productivity of the hydrolysis reactor, due to the reduction of hydrolysis volume.     

罗非鱼(Tilapia)鱼皮提取明胶的工艺优化

以罗非鱼(Tilapia)鱼皮为原料,分别用碱法、酸法、酶法进行前处理,对3种方法的提取效果进行比较,筛选出最佳水解方法为酶法。优化了酶法处理后的漂白、熬胶工艺,获得鱼皮提取明胶的最佳工艺。结果显示,前处理采用0.2%的混合酶,调p H值至3.5,于40℃水浴中酶水解鱼皮1 h,用6%高锰酸钾溶液进行氧化漂白3 h,再用1.5%草酸溶液进行还原漂白45 min。控制p H值为5?6,分3次熬胶,每次分别将水浴加热升温至60℃、65℃、70℃,各加热2 h,过滤后将3次胶液合并,在真空度不低于500 mm Hg,温度不超过60℃的情况下浓缩至20%左右。然后在60℃的鼓风干燥箱干燥至明胶含水量14%以下,经粉碎机粉碎,即可得成品明胶。该工艺产品得率19.93%(湿基)、粘度13.1 m Pa·s、凝胶强度1034.3 g/cm2。     

具有结合胆酸盐作用卵形鲳鲹蛋白酶解物的制备和分子量分布研究

以卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)鱼肉为原材料,以酶解产物与胆酸盐的体外结合率为指标,从5种常用食品用蛋白酶中筛选最优蛋白酶。进而采用正交法优化酶解条件,以提高酶解产物的胆酸盐结合率,并采用GPC法分析产物中蛋白肽的分子量分布情况。结果表明,胰蛋白酶酶解产物(100 mg·m L~(-1))与胆酸钠、甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠等3种胆酸盐的体外结合能力均好于其他4种蛋白酶,结合率分别达到42.1%、33.5%和30.1%,分别相当于降血脂药物考来烯胺散(20 mg·m L~(-1))的78.3%、74.4%和76.8%;经过正交试验优化的制备卵形鲳鲹蛋白肽的工艺条件为酶解时间2 h,加酶量2 000 U·g~(-1),料液比1∶4(g·m L~(-1)、p H 8、37℃)。该条件下酶解产物(20 mg·m L~(-1))对甘氨胆酸钠体外结合率达到同浓度阳性对照物(考来烯胺散)的48.3%,酶解产物中相对分子量3 k D以下的肽类组分占总蛋白水解物的77.30%。     

SPME-GC-MS在虾调味料风味检测中的应用

以南美白对虾虾头为原料,经过酶解和Maillard增香工艺,得到风味良好的虾风味料,采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用分析法(SPME-GC-MS)进行分析、鉴定它们特征的挥发性风味成分,探讨工艺条件对风味的影响,经NIST质谱数据库检索和文献对照,各检出57和63种成分,主要有烃类、醇类、醛类、酮类,和含氮化合物如吡嗪及含硫化合物等,它们的协同作用构成了虾风味料的特殊气味。将虾头酶解产物和Maillard增香型调味料的风味成分进行对照,比较发现吡嗪类化合物对于虾风味料的香气贡献最大,在两种风味料中分别检出了17和21种,归一化含量高达40.58%和47.83%。经Maillard反应处理后的风味料含有更多的醛类、呋喃类、吡嗪类和含硫化合物。结果表明,Maillard反应具有明显的增香作用,所制备的虾调味料具有更好的风味,该产物将既可以作为虾调味料使用,也可以作为复合调味品的基料,进一步扩展其应用范围。     

紫菜活性肽复合酶法制备与清除羟自由基作用

以条斑紫菜为原料,利用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶组成的复合酶水解紫菜蛋白制备生物活性肽并研究清除羟自由基作用。采用单因素试验考察胰蛋白酶与木瓜蛋白酶的比例、底物质量浓度、酶用量、水解温度、水解时间、pH对羟自由基清除率及水解度的影响,响应面法优化酶解条件,SephadexG-15凝胶层析法测定活性肽的分子质量分布。试验结果表明,复合酶最佳酶解工艺条件为胰蛋白酶与木瓜蛋白酶复合酶比例1.67,底物质量浓度20mg/mL,酶用量1.67%,pH 7.0,温度55℃,酶解4h,紫菜活性肽对羟自由基的清除率为80.6%,清除率为50%时的质量浓度为0.744mg/mL,分子质量大多分布于500～1500ku。     

褐藻酸钠可食性膜制备工艺研究

以褐藻酸钠、羟丙基甲基纤维素为原材料,通过混合水平正交试验,使用溶胶、混胶、脱气、倒胶、钙化、干燥工艺制备可食性膜,研究了不同褐藻酸钠/羟丙基甲基纤维素配比、溶胶温度、氯化钙质量浓度、钙化时间、褐藻酸钠质量浓度以及羟丙基甲基纤维素质量浓度对膜性能的影响,结果显示优化工艺参数为:10mg/mL褐藻酸钠和50mg/mL羟丙基甲基纤维素按质量配比1∶1混胶,10mg/mL的氯化钙钙化10min;所得膜的厚度为0.14mm,抗拉强度为2.97 MPa,透光率为64.09%,干燥质量损失率为9.97%,人工胃液崩解时间超过24h,人工肠液崩解为2.07h。本工艺较为简单,成膜性较好,为进一步制备植源性空心硬胶囊壳奠定理论和实践基础。     

两种海洋寡糖对仿刺参免疫活性的影响

研究了褐藻酸钠寡糖(AOS)和壳寡糖(COS)对仿刺参(Apostichopus japonicus)生长及免疫功能的影响。实验分为对照组、COS组和AOS组,对照组投喂企业常规饲料,COS组在对照组饲料基础上添加壳寡糖(1 g·kg~(-1)),AOS组在对照组饲料基础上添加褐藻酸钠寡糖(1 g·kg~(-1))。在第30、60、90天,测定各组仿刺参的质量,并在第90天随机采集50 ind仿刺参的体腔液,测定酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、过氧化氢酶和一氧化氮合酶等免疫酶的活力。结果表明,AOS组和COS组仿刺参体质量分别比对照组增长16.4%和18.2%;AOS组仿刺参的酸性、碱性磷酸酶活性分别提高了75.1%和67.3%;而COS组仿刺参的过氧化氢酶和一氧化氮合酶的活性分别提高了190.3%和55.6%。海洋寡糖COS和AOS作为仿刺参的免疫增强剂,可有效提高幼参的生长性能和免疫力,其中COS的作用效果优于AOS。     

罗非鱼碎肉酶法制备蛋白胨的工艺研究

为探讨罗非鱼碎鱼肉酶法制备蛋白胨的加工工艺,采用正交试验的方法,分别研究了木瓜蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、复合蛋白酶水解罗非鱼碎肉制备蛋白胨的工艺条件。结果表明:木瓜蛋白酶的最佳水解工艺条件为pH6.5,温度65℃,水解时间4h,加酶量1250 U/g,蛋白胨得率达12.63%;AS.1398中性蛋白酶最佳水解工艺条件为pH 7.5,温度55℃,水解时间4 h,加酶量750 U/g,蛋白胨得率达13.25%;复合蛋白酶的最佳水解工艺条件为pH 7.0,温度50℃,水解时间4.5 h,加酶量850 U/g,蛋白胨得率达11.43%。