3种肠毒素基因在苏云金芽孢杆菌中的分布

采用PCR方法对引自美国俄亥俄州立大学芽孢杆菌遗传保存中心(BGSC)的45个苏云金芽孢杆菌(B t)进行了hblA、bceT及entS 3种蜡状芽孢杆菌(Bc)肠毒素基因的检测.结果表明,hblA、bceT及entS的检出率分别为60%、66.7%和44.7%.这45个准菌株涉及到44个B t亚种,说明Bc肠毒素的基因在B t中是普遍存在的,B t的安全性问题仍需继续关注.     

苏云金芽孢杆菌两个亚种对几种常见抗菌药物的敏感性试验

以苏云金芽孢杆菌两个亚种为材料,4种抗菌药物进行了敏感性试验.药物的浓度梯度为5.00、3.50、2.00、0.05 mg/ml,4种浓度药物分别涂布于接种了苏云金杆菌的培养皿上,34 ℃的条件下培养24 h.试验结果表明,种抗菌药物对1.959菌株的抑菌率在76%~97%之间;1.897菌株的抑菌率在61%~89%之间.试验证明苏云金芽孢杆菌不同亚种之间对药物的敏感性是不同的.     

苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

[目的]研究来源于苏云金芽孢杆菌的几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的表达情况。[方法]以苏云金芽孢杆菌染色体DNA为模板,PCR扩增获取几丁质酶基因chiA,将其与枯草芽孢杆菌表达载体pHSG连接,构建重组菌,经IPTG诱导后,检测培养液中的几丁质酶活性。[结果]扩增得到几丁质酶基因chiA大小为2.5 kb。构建的重组菌对底物[4-MU-(GlcNAc)3]显示出一定的水解活性,培养液酶活约为2.8 U/ml,而pHSG空质粒转化子在同样条件下其培养液没有明显酶活。该重组酶的最适pH值为6.5,最适反应温度为50℃,与苏云金芽孢杆菌自身产生的几丁质酶性质一致。[结论]几丁质酶基因chiA能在枯草芽孢杆菌中成功表达,表达产物可成功分泌到细胞外。     

蜡状芽孢杆菌TS-02防治草莓白粉病研究

在室外条件下进行了蜡状芽孢杆菌TS-02防治草莓白粉病的药效试验,并在室内条件下探讨了其防病机理.结果表明:蜡状芽孢杆菌TS-02可以防治草莓白粉病,活菌数大于3×107CFU/ml可达到理想的效果.抑制作用是活菌和菌分泌的抑菌物质共同作用的结果.其中活菌的作用更强;蜡状芽孢杆菌可抑制白粉病菌的定殖,从而达到防治草莓白粉病的效果.     

苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bti)发酵液的浓缩工艺研究

通过对苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis,Bti)发酵液浓缩工艺的研究,探索了不同温度对浓缩液有效成分的影响程度,比较了不同浓缩方式、不同干燥方式处理下有效成分的回收率。结果表明,采用真空薄膜浓缩方式最终得到的产物质量是离心浓缩方式得到产物质量的176%,效价回收率提高了36%。     

蜡状芽孢杆菌的分离培养与鉴定

从牛奶中分离到1株蜡状芽孢杆菌CO4-1,经生长特性培养、生化试验、灌服动物试验,证明该菌株具有营养要求低,生长快,合成蛋白能力强,耐高温,耐酸碱等特点;菌体及其产物对动物均安全,无任何不良反应;对肠道病原菌具有一定的抑制作用。     

浓缩苹果汁生产环境中嗜酸耐热菌的分离与初步鉴定

为了解和控制我国浓缩苹果汁中的嗜酸耐热菌,对浓缩苹果汁生产过程主要工段和生产车间的空气及用水,进行了采样和分离鉴定,并与标准菌株A.acidoterrestris和已知分离菌珠进行了比较分析。结果表明,共分离得到了3株污染浓缩苹果汁的嗜酸耐热菌;在耐热、耐酸性检验中,这3株菌均可以较好地生长,符合脂环酸芽孢杆菌属嗜酸耐热的特点。与标准菌株和已知分离菌株细胞、菌落形态观察、生长条件和生理生化反应等方面的比较表明,这3株菌与标准菌株有较大的相似性,与标准菌应为同属不同种。     

苏云金芽孢杆菌发酵培养基的筛选

采用正交试验对BtWB7菌株发酵培养基进行筛选,结果表明,不同原料对发酵液菌数影响相差较大,其中酵母粉和鱼粉影响最大.本试验获得的最佳摇瓶发酵配方为:玉米粉4%、黄豆饼粉1%、酵母粉2%、鱼粉2.5%和蛋白胨0.1%(质量分数).     

芦荟等7种常见药食两用中药对蜡状芽孢杆菌杀伤能力的研究

[目的]为蜡状芽孢杆菌引起的鲫鱼病害药物防治提供实验参考。[方法]采用纸片法和二倍稀释法测定了芦荟等7种常见药食两用中药对鲫鱼蜡状芽孢杆菌的抑制作用。[结果]7种常见药食两用中药均对致病菌蜡状芽孢杆菌有不同程度的抑制作用,其中甘草、鱼腥草、芦荟具有良好的抑菌作用,金银花、蒲公英、槐米、桔皮的抑菌作用较弱。7种供试样品的最小杀菌浓度均远大于最小抑菌浓度,仅甘草、鱼腥草在500μg/ml时表现出弱的杀菌作用,其余样品在其选择的浓度范围内均无明显杀菌作用。[结论]所选择的7种药食两用中药均具有不同程度抑菌作用,但仅具有弱的或不具有杀菌作用。     

一种改良的苏云金芽孢杆菌质粒DNA提取方法

以Sambrook的碱裂解法为基础,通过控制菌体培养时间,适当调整提取过程中3种溶液的比例及作用时间,摸索出一种适合于提取苏云金芽孢杆菌质粒DNA的方法.该法与常规碱裂解法相比具有重复性好、质粒DNA质量高等优点.     

苏云金芽孢杆菌分子生物学的研究与应用

本文简要描述了苏云金芽孢杆菌的形态特征与培养特性,对近年来有关其分子生物学研究的进展情况作了简要回顾,分析了目前转基因植物与基因工程菌存在的问题,并对其应用前景进行了展望.     

常见几种芽孢杆菌产淀粉酶的比较

探索地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌产生淀粉酶的能力,以筛选和研制动物微生态制剂和饲料添加剂的使用菌种。将各菌种接于淀粉酶试验培养基,培养后滴加稀碘溶液,观察透明圈,判定产酶能力。结果:地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌都能产生淀粉酶,以蜡样芽孢杆菌产生的淀粉酶较多,认为4种常见芽孢杆菌产淀粉酶能力依次为:蜡样芽孢杆菌>纳豆芽孢杆菌>枯草芽孢杆菌>地衣芽孢杆菌。     

苏云金芽孢杆菌研究回顾与展望

回顾了苏云金芽孢杆菌发展的历史,综述了资源、鉴定与分类、分子生物学包括cry基因、vip基因chi基因、aliA基因,生物信息学、生态学、安全性及产品化等问题,并对今后的发展提出一些意见。     

河北省不同生态区的苏云金芽孢杆菌cry基因多样性研究

为了明确苏云金芽孢杆菌在河北省不同生态区的分布特点和cry基因的多样性,研究从河北省不同生态地区(阜平天生桥、涞源白石山、安新白洋淀、保定郊区大田和安国中草药田)采集土样806份,采用温度-抗生素法分离获得Bt菌株46株,利用PCR-RFLP技术对46株Bt进行了基因型研究,结果表明从这些菌株中发现7种不同的基因型cry1、cry2、cry3、cry4、cry8、cry30和cry32,11株未鉴定出基因型;通过SDS-PAGE分析发现这些菌株主要表达130-150kDa、70-80kDa、60kDa和30kDa蛋白,实验结果说明了苏云金芽孢杆菌在河北省不同生态区均有分布,并且其cry基因类型是复杂多样的。     

巨大芽孢杆菌解磷能力的研究

实验采用以Ca3 (PO4) 2 和卵磷脂为唯一磷源的培养基接种ACCC10 0 11磷细菌 ,2 9℃ ,180r/min振荡培养 7d后将培养液离心 ,测其上清液中的水溶性磷含量及沉淀菌体中磷含量。在无机磷培养物中测得的水溶性磷总量 89.4 3μg/mL ,比对照提高了 13.6倍 ;在有机磷培养物中测得的水溶性磷总量为 11.96 μg/mL ,比对照提高了 4 .16倍。定期取样测定磷细菌培养液中磷含量 ,发现以Ca3 (PO4) 2 和卵磷脂为底物的培养基中磷含量分别在第 5d和第 3d达到最大值 ,其中磷浓度的对数y与培养时间x呈线性相关。其线性方程分别为 :y =0 .4 38 0 .2 6 2x(r =0 .889) ;y =- 0 .6 0 8 0 .4 98x(r =0 .95 1)。     

1株蜡状芽孢杆菌产脱毛蛋白酶的酶性质研究

从盐腌皮上分离、筛选得到1株蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus SZ-4),该菌株经发酵后得到的粗酶液可在12 h内、无硫化物的条件下,将猪皮、牛皮、羊皮等完全脱毛.对该菌株发酵所产脱毛蛋白酶的酶性质进行研究,结果表明:脱毛蛋白酶的分子量约40 kDa,最适作用温度为60℃,最适作用pH为10.0,在40℃以上时热稳定性较差,K+、NH+4、Mg2+、Zn2+和Ca2+对脱毛蛋白酶有不同程度的激活作用,其中NH+4、Mg2+、Zn2+在一定浓度内具有明显的激活作用,Cu2+和Ba2+对脱毛蛋白酶有抑制作用,Na+在不同浓度范围对脱毛蛋白酶有不同的作用.     

1株巨大芽孢杆菌BM05发酵条件的优化

[目的]优化巨大芽孢杆菌BM05的发酵条件,提高其发酵活菌数。[方法]通过单因素试验筛选最佳碳、氮源,通过正交试验筛选最佳C/N比,并研究p H、发酵温度、接种量和转速对发酵的影响。[结果]碳源选用玉米淀粉和葡萄糖,氮源选择牛肉粉,初始p H 7.0,发酵温度35℃,接种量为4%,转速220 r/min为最佳发酵条件。通过发酵条件优化,发酵菌数达4.73×109cfu/m L,比原始配方提高了1.56倍。[结论]优化后的发酵条件大大提高了巨大芽孢杆菌BM05的发酵活菌数。