法氏囊在鸡淋巴细胞性白血病发生发展中的作用

用鸡淋巴细胞性白血病病毒ＲＡＶ－１株接种３５只１日龄伊莎鸡雏,于接毒后不同批次扑杀,采取法氏囊做组织学、免疫细胞化学、透射电镜观察。结果：接毒后１个月,法氏囊滤泡髓质淋巴细胞开始转化,接毒后２～５个月更明显,在法氏囊滤泡髓质区形成成淋巴细胞克隆增殖灶。接毒后６个月,法氏囊萎缩。生物素－亲和素（ＢＡ）法染色表明法氏囊一直存有病毒和群特异性抗原,以接毒后３～４个月含量最高。电镜观察,在接毒后１～４个月的实验鸡法氏囊滤泡髓质淋巴细胞、巨噬细胞和网状细胞中观察到淋巴细胞性白血病（ＬＬ）病毒粒子。组织学、免疫细胞化学和电镜观察都表明法氏囊是该病的主要靶器官之一,法氏囊在鸡淋巴细胞性白血病的发生发展中起一定的作用     

囊素的研究进展

为更好地研究和利用囊素的免疫调理活性，从囊素的产生、存在部位、生物活性及其作用机理等方面论述了囊素的研究现状，指出了有关囊素的亟待解决的问题和应用前景。     

早期鸡胚发育过程中增殖细胞核抗原在法氏囊的表达

法氏囊是鸟类特有的器官,是B淋巴细胞成熟的场所.本研究分析了鸡胚早期发育过程的中法氏囊形态变化及增殖细胞核抗原PCNA表达变化.结果表明鸡胚6.5 d(E6.5)时,法氏囊开始出现在鸡胚泄殖腔的最深处,从最开始E6.5的一些小的囊泡发育成E8的一个大腔,E8～E10,法氏囊继续发育.从E11开始,法氏囊开始出现一些小的皱褶,E11～E18,这些小的皱褶逐渐变得清晰,并贯穿整个法氏囊.在E9时,法氏囊轮廓形成,可以发现在表皮层和基膜层PCNA有着广泛的表达.统计分析表明表皮层的PCNA阳性率在100％左右,在整个发育早期几乎没有变化;而基层的阳性率随着胚胎的发育逐渐下降,在E9、E10、E11、E12、E14和E18表达率分别是97％、93％、71％、55％、56％和20％.     

禽法氏囊三肽囊素免疫生物学及其同功能单链抗体研究进展

法氏囊（BF）是禽类特有的免疫器官,为B细胞发育、成熟提供微环境,是免疫球蛋白基因转变场所;其免疫活性物质为三肽囊素（Bursin);它不仅分布于BF,还存在于胸腺Hassall小体、哈德氏腺、脾脏、BF T细胞区及骨髓;它能诱导家禽和哺乳动物B细胞前体分化;其靶器官是BF,能够拮抗IBD疫苗对BF的损伤,提高ND弱毒疫苗及油苗产生抗体水平;人工合成Bursin作用的靶器官也是BF,可促进BF发育、抗体的产生、维持母源抗体作用。     

马齿苋多糖对雏鸡免疫功能的影响

采用马齿苋多糖口腔灌注雏鸡,观察对雏难法氏囊免疫功能的影响。试验选取80只1日龄雏鸡随机分为4组,1个空白对照组及3个POP试验组,POP剂量分别为25,50和100mg/kg,每天口腔灌注1次,连续20d。结果显示,POP能显著提升外周血CD4+T淋巴细胞数量及CD4+/CD8+比值(P0.05),显著提高法氏囊指数(P0.05)及法氏囊淋巴细胞增殖指数(P0.05)。试验表明,马齿苋多糖可通过改变法氏囊免疫系统的动态变化,促进免疫器官发育,直接作用于免疫细胞,提高雏鸡的免疫能力。     

雌激素受体α在雌性大鼠脑中的表达

本试验利用免疫组织化学SP法,研究了雌激素受体α在大鼠脑中的表达.结果表明,ER_α免疫反应产物主要定位于神经元细胞核,部分区域出现阳性神经元和阳性突起,在海马CA1、CA2辐射层、齿状回、下托的分子层等出现阳性星形胶质细胞;ER_α在脑中表达广泛,免疫反应产物在端脑的隔外侧核、海马锥体细胞层、大脑皮质等,间脑的缰内侧核、下丘脑室旁核、弓状核、视上核等,中脑的动眼神经核,脑桥的脑桥核外侧部等为高密度;在端脑的尾壳核、杏仁中央核、海马CA4区,间脑的下丘脑室周核、缰外侧核等,中脑的黑质致密带,脑桥的脑桥被盖核等为较高密度;在问脑的视前室周核、丘脑后核、中脑的红核、脑桥的脑桥被盖网状核等为中等密度;在端脑的苍白球,间脑的无名质,无免疫反应产物出现.结果显示,雌激素在调节脑的认知和生殖内分泌过程中,ER_α可能起主要作用;雌激素可通过ER_α调节星形胶质细胞功能.     

Developmental changes in cell proliferation and apoptosis in the normal duck bursa of Fabricius

The aim of this work was to investigate developmental changes in cell proliferation and apoptosis in normal duck bursa of Fabricius using flow cytometry and immunohistochemistry. Studies were carried out on Tianfu ducks on days 24 and 27 of embryogenesis (E24 and E27) along with days 20, 70, and 200 of postnatal development (P20, P70, and P200). Results showed that the percentage of G₀/G₁ bursa cells significantly increased between E24 and P200 while the percentage of cells in the S phase or G₂ + M phase as well as the proliferating index obviously decreased during the same period. Proliferation cell nuclear antigen was detected in lymphocyte and interfollicular epithelium. The proliferative lymphocyte density tended to decrease from E24 to P200. Apoptotic bodies in macrophages, free apoptotic bodies, or nuclei with condensed chromatin in lymphocytes in follicles were identified by transferase-mediated dUTP nick-end labeling. Both flow cytometry and microscopic analysis reveal that the proportion of apoptotic cells and apoptotic lymphocyte density increased from E24 to P20, fell on P70, then rose again on P200. Our foundings demonstrate that cell proliferation decreases and apoptosis increases with age. These changes may account for duck bursa development and involution.     

铝的免疫毒性研究进展

铝是地球上蕴藏量最多的金属元素之一;由于其优良特性被广泛应用于生产和生活。环境中铝蓄积逐渐增加;铝污染已经成为人类社会面临的重大问题之一。长期慢性的铝摄入所致的体内铝蓄积可损伤心、肝、脾、肾、脑等多个器官。其中免疫毒性是铝暴露最敏感的健康效应之一;已引起广泛关注。本文综述了铝暴露引起脾脏、法氏囊、骨髓、肠黏膜、淋巴和胸腺毒性作用;并总结了铝引起免疫毒性的机制。蓄积在动物体内的铝可损伤免疫器官;引起免疫细胞凋亡;诱发氧化应激;诱导炎性因子的表达;扰乱微量元素代谢;抑制免疫功能。铝暴露引起的病理损伤和氧化应激是铝诱导免疫抑制的重要病理机制;但其免疫毒性的分子机制仍不系统;需进一步探索。     

高钼对艾维因肉鸡血清免疫球蛋白的影响

300只1日龄艾维因肉鸡健雏随机分为4组,分别饲以对照日粮(Mo 13mg/kg)和高钼日粮(Mo 500mg/kg,高钼Ⅰ组;Mo 1 000mg/kg,高钼Ⅱ组;Mo 1 500mg/kg,高钼Ⅲ组)6周。病理形态学观察,高钼Ⅱ、Ⅲ组雏鸡法氏囊与对照组比较淋巴细胞减少,网状细胞增生。免疫比浊法测定,高钼Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清IgG和IgM含量显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),IgA含量与对照组差异不显著(P>0.05)。结果显示,日粮钼水平为1 000mg/kg及其以上时,雏鸡法氏囊结构受损,日粮钼水平为500mg/kg及其以上时血清IgG和IgM含量降低,雏鸡体液免疫功能受损。     

鸡免疫器官中血管活性肠肽的分布特点

应用免疫组化超敏SP法对鸡不同生长阶段免疫器官中血管活性肠肽(VIP)的表达特点进行了研究,结果显示,胸腺中VIP阳性反应主要分布于被膜及髓质,而皮质内反应较弱;随日龄增加,VIP在被膜和髓质内一直维持较强的表达;实质中VIP强阳性淋巴细胞数量随日龄逐渐增多,至42 d开始减少.脾脏中VIP阳性反应主要出现于被膜及红髓,并在整个生长阶段维持较强的表达,红髓的脾索和脾窦间还有较多的巨噬细胞呈VIP强阳性反应;白髓中仅见动脉周围淋巴鞘中央动脉有VIP的表达,并随日龄的增加逐渐减弱.法氏囊中VIP的表达范围广泛,涉及黏膜、黏膜下层和肌层,尤以黏膜上皮细胞和法氏囊小结髓质的表达为典型;随着日龄增加,黏膜上皮细胞VIP表达逐渐减弱,囊小结髓质一直保持较强的VIP阳性着色,囊小结皮髓质交界处上皮细胞层内VIP强阳性细胞有逐渐增多的趋势.鸡免疫器官中VIP阳性反应物质的广泛分布,提示这3种器官是神经系统以外产生VIP的重要部位,法氏囊中的VIP可参与鸡免疫器官的功能调节,它可作为一种信号分子介导神经内分泌系统和免疫系统之间的相互作用.     

神经肽Y及其Y1受体阳性细胞在鸭腔上囊中的分布及发育变化(英文)

神经肽Y及其Y1受体在神经-免疫-网路中发挥着重要作用。二者在许多脊椎动物胸腺和脾脏中的表达已有研究,但它们在腔上囊中的表达及发育变化特征还未见报道。本试验应用免疫组化技术研究神经肽Y及其Y1受体阳性细胞在鸭腔上囊胚胎及胚后发育中的分布及变化特征。结果显示,在鸭腔上囊中神经肽Y及其Y1受体分别最早表达于26和22d胚龄。神经肽Y阳性细胞分布于黏膜上皮、滤泡、肌层和小动脉平滑肌。Y1受体阳性细胞分布于黏膜上皮、滤泡淋巴细胞。各部位神经肽Y及其Y1受体阳性细胞数量表现出明显增龄变化特征。结果说明鸭腔上囊中存在神经肽Y及其Y1受体,二者可能存在的相互作用主要表现在胚后发育阶段,这与B淋巴细胞的发育与分化以及腔上囊的退化密切相关。     

胚胎及胚后发育期鸭腔上囊淋巴细胞增殖与凋亡的研究

采用PCNA免疫组化法和TUNEL染色法,并结合光、电镜技术研究天府肉鸭胚胎及胚后发育期腔上囊淋巴细胞增殖与凋亡的动态变化规律。结果显示胚胎期腔上囊淋巴细胞增殖明显,其滤泡淋巴细胞增殖指数（PIF）随胚龄增加而逐渐增高,26d胚龄达峰值。胚后期各组滤泡皮质淋巴细胞增殖指数（PIC）和髓质淋巴细胞增殖指数（PIM）均呈下降趋势;各组PIM均明显高于PIC。胚胎期腔上囊滤泡淋巴细胞凋亡指数（AIF）随胚龄增大而逐渐增高。胚后期O～3周龄滤泡髓质淋巴细胞凋亡指数（AIM）继续增高,滤泡皮质淋巴细胞凋亡指数（AIC）则无明显变化;AIC和AIM在5周龄下降,17周龄明显升高,29周龄达峰值。胚后0～14周龄,各组AIM均明显高、于AIC,而17～29周龄AIM则明显低于AIC。凋亡淋巴细胞核呈现多种形态,线粒体肿胀,嵴断裂。结果提示淋巴细胞增殖与凋亡在鸭腔上囊胚胎及胚后发育的整个过程中普遍存在,具有明显增龄变化特性,二者协同参与腔上囊发育和退化过程。     

B cell differentiation in the bursa of Fabricius and spleen of embryos and chicks immediately after hatching

Flow cytometric analysis and immunohistochemical observation were used to qualitatively and quantitatively clarify the nature of B cell differentiation in the bursa of Fabricius of chick embryos and to determine the timing of antibody class switching in chicken spleens based on positivity of IgM and IgG on and in the cells. In the bursa, the sIgM‐positive cell population formed from the 12^th to 15^th day of embryogenesis. The proportion of sIgM‐high expressing (sIgM^high) cells was lower among bursacytes than splenocytes of hatched chicks, suggesting that the sIgM^high bursacytes are to be released to peripheral sites. The proportion of sIgM^high cells was higher at 0 days old than at any other examined stage of development. Colonization of the spleen by B cells occurred between the 18^th day of embryogenesis and 0 days old. Antibody class switching was thought to start in the spleen between 1 and 2 weeks of age, because IgG‐positive cells were present in the spleen of 2‐week‐old chicks, but not 0‐day‐old or 1‐week‐old chicks.     

GC02球虫病疫苗对鸡腔上囊发育的影响

将80只1日龄健康雏鸡随机分为GC02球虫病疫苗组（试验组）和对照组（n=40）。试验组鸡于7日龄和14日龄分别口服含8000个孢子化卵囊的GC02球虫病疫苗,对照组鸡口服生理盐水。于21、28、35和42日龄每组随机选取10只鸡,空腹称量体重,颈动、静脉放血致死,立即解剖取腔上囊称重并制作石蜡切片,光学显微镜下观察与拍照,研究了GC02球虫病疫苗对鸡腔上囊发育的影响。结果,试验组鸡腔上囊器官指数低于同日龄对照组,其中28-42日龄鸡的腔上囊器官指数显著或极显著低于对照组（P〈0．05或P〈0．01）。与对照组同日龄鸡相比,试验组鸡免疫GC02球虫病疫苗后,各日龄鸡腔上囊均表现出不同程度的病理组织学变化。试验组雏鸡腔上囊组织结构出现轻微损伤,GC02球虫病疫苗刺激了机体的免疫系统,增加了免疫效果。试验结果提示,GC02球虫病疫苗对雏鸡腔上囊发育有一定的抑制作用,对其组织结构有轻微损伤作用。     

鸭胚腔上囊的组织结构发育动态研究

对孵化15-25日龄的鸭胚腔上囊进行连续动态研究,结果表明,从腔上囊形成开始到出壳的鸭胚尚法治形成较完整的具体体液免疫功能的组织结构;非炎性状态下腔上囊淋巴滤泡内出现的嗜异形细胞在腔上囊的分化发育中起着重要的组织改建作用。     

禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc基因表达及凋亡的影响

【目的】 探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染禽类后导致免疫器官发生细胞凋亡的机理。【方法】 以1日龄SPF雏鸡为试验对象,将100只SPF雏鸡随机均分为REV感染组和未感染病毒的对照组,REV感染组雏鸡经腹腔感染500 μL REV稀释液,对照组雏鸡经相同途径注射等量灭菌生理盐水,于病毒感染后第1、7、14、21、28和42天,2组雏鸡随机各抽取5只,心脏采血处死雏鸡后快速摘取法氏囊。分别应用HE染色和病理切片成像系统测定分析法氏囊细胞核浆比,TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒测定凋亡细胞数,免疫组化法测定Bcl-2和C-myc阳性细胞数量,实时荧光定量PCR和ELISA法分别检测法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达和蛋白含量。【结果】 ①REV感染1日龄SPF雏鸡后21~42 d,其法氏囊淋巴细胞凋亡百分比显著或极显著高于对照组雏鸡(P<0.05;P<0.01);②SPF雏鸡感染REV后21和28 d,其法氏囊细胞核浆比显著低于对照组雏鸡(P<0.05);③REV感染SPF雏鸡法氏囊中Bcl-2和C-myc阳性细胞数在病毒感染后21和28 d显著高于对照组雏鸡(P<0.05);④REV感染SPF雏鸡后21 d,其法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达极显著高于对照组雏鸡(P<0.01)。⑤SPF雏鸡感染REV后,其法氏囊中Bcl-2蛋白含量较对照组雏鸡有不同程度的增加,其中21和28 d分别差异极显著(P<0.01)和显著(P<0.05),病毒感染组雏鸡的C-myc蛋白含量也始终高于对照组雏鸡,且21和28 d极显著增高(P<0.01)。【结论】 REV感染所致SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc的mRNA表达以及蛋白含量异常均与病毒感染导致的法氏囊细胞凋亡密切相关,而法氏囊细胞凋亡数量增加与REV感染引发的机体免疫机能抑制密切相关。     

5种弥散神经内分泌细胞在鸭腔上囊中的表达特征

应用免疫组化技术并结合图像分析软件研究了胃泌素、β-内啡肽、胰高血糖素、5-羟色胺、生长押素在鸭腔上囊中的表达特征.结果显示鸭腔上囊小结相关上皮细胞呈胃泌素强阳性反应;滤泡间粘膜上皮呈β-内啡肽中强度阳性反应;淋巴滤泡皮质部有少量的β-内啡肽、胃泌素、5-羟色胺阳性细胞,呈中、强度免疫反应;淋巴滤泡髓质有胃泌素强阳性细胞;生长抑素和胰高血糖素均呈阴性反应.结果说明,鸭腔上囊中存在β-内啡肤、胃泌素、5-羟色胺弥散神经内分泌细胞,它们在淋巴滤泡皮质部的表达特征有利于其通过内分泌和旁分泌方式调节B细胞的发育.     

法氏囊活性五肽BP5特异性结合肽的筛选及鉴定

为鉴定与具有免疫调节功能和抗肿瘤潜能的法氏囊活性五肽(BP5)特异性结合的多肽,本研究利用噬菌体展示技术,以BP5-BSA为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行4轮亲和筛选,结合ELISA鉴定和竞争抑制试验,筛选出3个能够特异性与BP5结合的噬菌体阳性克隆.测序结果显示,其编码的12肽序列分别为:PINMQTLNCMAA(P2-12)、GCTLNPMSDLLG(P6-12)和MSSTLNGMLNSL(P7-12),其核心基序为TLNXM.通过人工合成P2-12、P6-12、P7-12多肽,并采用MTT法检测其对BP5抗肿瘤细胞增殖能力的影响,结果显示,P2-12和P7-12肽在0.2 μg/mL～20 μg/mL浓度下,P6-12肽在2μg/mL～20 μg/mL浓度下均能够抑制BP5抗小鼠WEHI-231 B淋巴瘤细胞增殖作用,其中P2-12在20 μg/mL浓度下抑制作用最为显著(p＜0.01).此外,p53荧光素酶活性检测结果显示,这3种BP5结合肽在实验浓度下均能够下调BP5促p53基因转录的活性.以上结果表明,这3种BP5特异性结合肽具有下调BP5抗肿瘤活性.本研究为进一步研究BP5抗肿瘤细胞增殖作用的机制提供了相关的实验依据.