中草药提取物与酶复合物对牛乳房炎病原菌的抑菌效果

对广西壮族自治区某奶牛场的临床型乳房炎病牛奶样中分离鉴定的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和无乳链球菌进行12种常用抗生素的药敏试验和中草药提取物与酶复合物体外抑菌研究.结果表明,引起奶牛乳房炎的3种病原菌对青霉素类药物有耐药性,而对庆大霉素、头孢类、环丙沙星等药物敏感.通过正交试验筛选出的中草药提取物与酶的最佳复配物(复配物I)对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和无乳链球菌有明显的抑菌效果,抑制作用较强,其最低杀菌质量浓度(MBC)分别为7.82、31.25和62.50 g/L,抑菌环直径分别为(23.4±0.2)、(14.2±0.1)和(14.5±0.1)mm.     

中草药对奶牛乳房炎6种致病菌的抑菌效果观察

用8味中草药煎剂及一个中草药复方制剂对奶牛乳房炎的6种致病菌进行抑菌实验,并测定了最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示:金黄色葡萄球菌对连翘、复方、蒲公英中敏;牛棒状杆菌对连翘中敏,嗜热链球菌对瓜蒌极敏,对连翘、白附子、复方、木鳖子、天花粉中敏;产气荚膜梭菌对金银花、瓜蒌高敏,对复方、白附子、紫花地丁、天花粉中敏;乳房链球菌对瓜蒌、复方、金银花中敏;乳杆菌对所用药都低敏;瓜蒌、金银花、连翘对致病菌的MIC和MBC较低。进一步提取瓜蒌、金银花有效成分并与水煎剂对比,瓜蒌、金银花有效成分对6种致病菌均呈现良好的抑菌效果。     

8种中药对猪源大肠杆菌的体外抑菌效果

为筛选出抗猪源大肠杆菌的中药,选取板蓝根、五倍子、鱼腥草、穿心莲、黄连、黄芩、连翘和金银花等8种中药进行煎液(相当于1g/mL生药),采用纸片法和牛津杯法测定中药对猪源大肠杆菌的体外抗菌活性,对具抑菌作用的中药采用试管二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果表明:板蓝根、五倍子、穿心莲、黄连和黄芩等5种中药对猪源大肠杆菌(TXH11-1)具抑制作用,五倍子的作用最强,对3株菌(TXH11-1、TXH5-2和MAZW7-3)的MIC均为31.25 mg/mL,MBC为62.50~125.00mg/mL;其次是黄连,平均MIC、MBC分别为62.50mg/mL和208.33mg/mL;穿心莲平均MIC为104.17mg/mL,MBC为125.00~500.00 mg/mL;黄芩抑菌效果稍弱,平均MIC为208.33 mg/mL,仅对TXH11-1和MAZW7-3有杀菌作用,MBC≥250.00mg/mL;板蓝根的作用最弱,仅对TXH11-1和TXH5-2具抑制作用,MIC≥250.00mg/mL,对TXH11-1有杀菌作用,MBC为500.00mg/mL;金银花、连翘和鱼腥草对3株试验菌均无抑制作用。     

乳房炎康复液的药效学及安全性评定

对中草药复方透皮吸收搽剂乳房炎康复液(简称"乳炎康")的药效学作用进行探讨。采用试管倍比稀释法,检测"乳炎康"对主要致病菌(金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和致病性大肠埃希氏菌)的最低抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC);采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验,检验其抗炎作用;通过"乳炎康"对小鼠的急性毒性效应(LD50)和家兔皮肤刺激试验验证其安全性。体外试验表明,"乳炎康"对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和致病性大肠埃希氏菌MIC分别为31.25、15.63、31.25、62.5、31.25g/L,MBC分别为31.25、15.63、62.5、62.5、62.5g/L,均表现出一定的抑菌效果;抗炎试验表明,阿司匹林组和"乳炎康"高(75mg/kg)、中(50mg/kg)、低(25mg/kg)剂量组的肿胀抑制率分别为40.65%、39.65%、51.75%、39.07%,"乳炎康"中剂量组能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀(P0.05);急性毒性试验表明,"乳炎康"的LD50为44 005mg/kg,属于无毒性药物,而皮肤刺激试验表明其无刺激性,安全性良好。乳炎康体外抑菌效果和抗炎效果明显,属于无毒、无刺激药物,具有良好的安全性。     

牛心朴子生物碱对奶牛乳房炎病原菌的体外抑菌试验

对4例临床型奶牛乳房炎的乳汁进行病原分离及鉴定,分离出了金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌。选择牛心朴子生物碱,采用试管2倍稀释法进行体外抑菌试验,测其最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示：牛心朴子生物碱对3种菌都有不同程度的抑制作用,对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌分离株的MIC及MBC分别是12.5mg/mL、1.561 25mg/mL、6.25mg/mL和6.25mg/mL、1.561 25mg/mL、3.125mg/mL。     

不同剂型中草药抑菌水平的分析

为观察中草药提取物的体外抑菌效果,按常规法制备中草药复方A(黄芩、连翘、大黄、蒲公英)和复方B(白头翁、黄连、黄柏、秦皮)的水提取物、醇提取物,利用管碟法和试管2倍稀释法测定中草药提取物抑菌圈的大小和对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明,2种中草药复方对大肠杆菌均有一定的抑制作用,并且醇提物的抑菌效果均优于其水煮提取物(P<0.05)。其中复方A的醇提取物和水煮提取物的MIC分别是15.625mg/mL和31.25mg/mL;复方B的醇提取物和水煮提取物的MIC分别是31.25mg/mL和62.5mg/mL。     

紫花地丁对奶牛乳房炎主要病原菌体外抑菌试验

采用中药常规的煎煮法提取紫花地丁的有效成份,对筛选出的耐药大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行敏感性试验。结果显示:紫花地丁提取物对奶牛乳房炎大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制和杀灭作用,耐药的大肠杆菌中最大的抑菌圈是18mm,金黄色葡萄球菌中最大的抑菌圈是19mm,这2种病原菌的最小抑菌浓度(MIC)均为31.25mg·mL-1,最小杀菌浓度(MBC)均为62.5mg·mL-1,表明紫花地丁对耐抗生素的乳房炎大肠杆菌和金黄色葡萄球菌能够起到较佳的抑制效果;比较春、秋两季采集的紫花地丁的抑菌效果结果显示春季效果强于秋季。由此,紫花地丁可在临床上应用于奶牛乳房炎的防治。     

32种中草药抑菌活性的比较研究

[目的]研究连翘（FRUCTUS FORSYTHIAE）、黄连（RHIZOMA COPTIDIS）和刺五加（RADIX ET RHIZOMA SEU CAULIS ACAN-THOPANACTS SENTICOSI）等32味中草药提取物的抑菌作用。[方法]利用95%乙醇提取药物的有效成分,以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,采用牛津杯法测定中草药提取物的抑菌作用。[结果]32种中草药中,虎杖等26种中草药提取物对金黄色葡萄球菌具有抑制作用;连翘等23种中草药提取物对大肠杆菌具有抑制作用,且抑菌效果在一定浓度范围内随药液浓度的增大而增强。其中,连翘和黄连对大肠杆菌的最低抑菌浓度分别是4和10 mg/ml,对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别是6和8 mg/ml。[结论]虎杖和连翘分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较好的抑制效果。     

小花棘豆总生物碱抑菌作用的研究

[目的]研究小花棘豆总生物碱的抑菌作用.[方法]通过体外抑菌试验研究小花棘豆总生物碱的抑菌活性、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)和影响小花棘豆总生物碱抑菌效果的因素.[结果]小花棘豆总生物碱对金黄色葡萄球菌、乳房链球菌、化脓链球菌和枯草芽孢杆菌有抑菌作用;其对乳房链球菌和化脓链球菌的MIC为6.3 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC为1.6 mg/mL,对枯草芽孢杆菌的MIC为0.8 mg/mL.生物碱在不同pH值下的抑菌活性发生变化;高温使其抑菌活性消失;紫外照射对其稳定性没有影响.[结论]小花棘豆总生物碱对部分革兰氏阳性菌有较好的抑菌作用.     

奶牛乳房炎病原菌对中药的敏感性试验

测定了黄连、黄芩、黄柏、金银花、连翘、鱼腥草等33种单味中草药对6种奶牛乳房炎病原菌的体外抑菌效果及具有较强抑菌作用的中药最低抑菌浓度。结果表明,黄连、黄芩、诃子、丹参、石榴皮、金银花等12种中草药对奶牛乳房炎病原菌具有较强的抑菌效果,且它们的最低抑菌浓度因药物种类和菌种类型的不同而呈现出差异。同时,结合单方药物的抑菌效果,配置了19种不同的中药复方,并测定了它们的抑菌效果及其最低抑菌浓度,结果表明,11种复方中药对奶牛乳房炎病原菌具有较强的抑菌作用。     

小檗碱体外抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性的研究

目的 研究小檗碱体外抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）活性。方法 运用琼脂扩散法、液体稀释法测定并分析小檗碱对MRSA的抑菌环大小、最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）;运用96孔酶标板结晶紫法测定并分析小檗碱对MRSA的最小生物膜清除浓度（MBEC）。结果 与DMSO比较,小檗碱与氯霉素（阳性对照药物）可显著增加MRSA的抑菌环半径（P<0.01）,小檗碱对MRSA的MIC为0.2 mg/mL,MBC为0.4 mg/mL;小檗碱对MRSA的MBEC为0.2 mg/mL。结论 小檗碱对MRSA有比较明显的抗菌、抑菌作用,其效应机制可能与其抑制细菌生物膜的形成有关。     

金黄色葡萄球菌黏附素及其靶位疫苗的研究进展

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要病原体,因其具有细胞内定殖和对抗生素极易产生耐药性的特点,使得用抗生素治疗的效果越来越差,为此疫苗防治成为首选。黏附素在金黄色葡萄球菌致病过程中起着至关重要的作用,在金黄色葡萄球菌感染的早期,黏附素是最重要的致病因子,只有当金黄色葡萄球菌黏附到宿主细胞上,毒素和荚膜才能开始表达。因此阻断金黄色葡萄球菌感染的初始阶段,特别是阻止细菌黏附到细胞和定殖在黏膜表面,将是预防和治疗奶牛乳腺炎的最有效途径。因此近些年研究者致力于黏附素的结构及功能的研究,试图以黏附素为靶点设计金黄色葡萄球菌疫苗。本研究对近几年黏附素的种类和作用,以及其相关疫苗的研究进行了综述。     

3种地锦草总黄酮和鞣质质量分数及体外抗菌活性比较

采用紫外-可见分光光度法测定陕西产地锦、斑地锦、小叶地锦总黄酮和鞣质质量分数,应用微量肉汤稀释法测定其在体外对大肠埃希菌、鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的最小抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC)。结果表明,地锦、斑地锦、小叶地锦的总黄酮质量分数分别为16.53、18.62、22.65mg/g,鞣质质量分数分别为38.31、32.78、41.44mg/g。地锦、斑地锦、小叶地锦对大肠埃希菌MIC、MBC均为125g/L,对鼠伤寒沙门菌MIC分别为62.5、31.25、62.5g/L,MBC分别为125、62.5、250g/L,对金黄色葡萄球菌MIC分别为125、31.25、62.5g/L,MBC分别为250、125、62.5g/L,对无乳链球菌MIC分别为125、62.5、125g/L,MBC分别为125、250、125g/L。陕西产斑地锦,尤其是小叶地锦为中药地锦草的潜在新基原。     

牛源耐药性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及黏附因子基因FnBP和clfA的表达分析

为探究致奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的生物学特性,对新疆垦区部分奶牛场乳房炎奶样进行病原学分析,并对病原菌进行耐药性、毒力因子的表达分析。从乳房炎奶样中分离得到S.aureus,采用血浆凝固酶试验、KB法、琼脂筛选法、生化鉴定法(VITEK32)、聚合酶链式反应等法进行鉴定。针对毒力基因clfA(凝集因子A)和FnBP(纤维结合素结合蛋白)进行特异性PCR扩增,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体,并构建原核表达载体pET-28a(+)-FnBP和pET-28a(+)-clfA。转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。常规鉴定出葡萄球菌105株,其中金黄色葡萄球菌(S.aureus)62株,从62株S.aureus中检出耐药性金黄色葡萄球菌(MRSA)13株,检出率为20.10%,2株未确检。经测序证实与GenBank中FnBP基因(J04151)和clfA基因(AB245457)序列同源性分别为100%和95.69%。SDS-PAGE显示,clfA和FnBP蛋白相对分子质量分别为45ku和58ku。Western blot分析显示,clfA蛋白和FnBP蛋白均可与金黄色葡萄球菌多克隆抗血清发生特异性反应。病畜奶样中MRSA检出率较高,新疆垦区部分牛场呈蔓延趋势,成功表达了clfA、FnBP蛋白,具有一定的免疫保护效果。     

苦丁茶不同提取物的体外抑菌作用研究（摘要）

[目的]研究苦丁茶不同粗提物的抑菌效果。[方法]制备了3种苦丁苯粗提物。粗提物1：称取苦丁茶50 g,加500 ml去离子水浸泡10 h,加热至沸腾,文火2h,过滤。药渣再加3～5倍去离子水煎煮,方法同上,重复3次。合并3次提取液,用旋转蒸发仪浓缩成50 ml,即每1 ml相当于含生药1.0 g,粗提物2：称取50 g干粉（用中药粉碎机粉碎后过80目）,加500 ml去离子水,水浴80℃恒温振荡3 h,离心,取上清液,浓缩,加3倍体积无水乙醇,离心取沉淀,用去离子水配成50 ml溶液。粗提物3：称取50 g干粉,加500 ml 90%乙醇,采用回流提取法,同流时间3 h,回流次数3次,合并3次提取液,过滤,用旋转蒸发仪浓缩成50 ml。粗提物1、粗提物2、粗提物3分装于棕色试剂瓶,封口,于-20℃冰箱中保存,使用前121℃高压灭菌20 min采用试管二倍稀释法和纸片扩散法,对金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌进行体外抑菌试验,并测定其最小抑菌浓度（MIC）,最小杀菌浓度（MBC）和抑菌环直径。[结果]粗提物1抑菌效果较强,高于粗提物2和粗提物3,对金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的MIC分别为3.91 mg/ml和31.25 mg/ml。粗提物1对金黄色葡萄球菌的抑菌作用效果最好,抑菌能力最强,抑菌作用为高敏,抑菌环直径达（17.46±0.40）mm,对大肠埃希菌的抑菌作用为中敏,但比粗提物2、粗提物3好;粗提物2对这2种菌的抑菌能力都较差,均为低敏,特别是对大肠埃希菌,抑菌环直径只有（6.30±0.16）mm。粗提物3对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌作用相差不大,都为中敏。粗提物1不但抑菌效果好,且其提取方法、步骤简单,仪器设备价格低,同时不产生废气,可为临床应用上提供支持并带来方便。粗提物3需使用有机溶剂,大量使用容易产生三废,给环境带来一定的危害。考虑到抑菌能力及成本、环保和简便等因素,采用提取粗提物1的方法在生产上比较实用。[结论]苦丁茶的不同粗提物均有不同程度的抑菌作用,为苦丁茶开发成新型、安全的抑菌剂提供了参考。     

不同季节竹叶提取物对致病性大肠杆菌抑菌效果的研究

为了寻找替代抗生素的促生长物质预防畜禽大肠杆菌病,能有效地利用我国丰富的植物资源,在不同的季节采集当地常见的孝顺竹竹叶提取有效成分,同时从患乳房炎奶牛的乳汁中和患大肠杆菌的病猪心、肝等组织中分离出致病性强、对抗生素耐药的大肠杆菌,对其进行抑菌试验。结果显示:不同季节采集的竹叶水提物对大肠杆菌具有不同的抑制作用,春季最大抑菌圈为17mm,MIC为3.125mg·mL-1,MBC为6.25mg·mL-1;夏季最大抑菌圈为15mm,MIC为3.125mg·mL-1,MBC为6.25mg·mL-1;秋季抑菌圈最大为12mm,MIC为6.25~12.50mg·mL-1,MBC为12.5~25.0mg·mL-1;冬季最大抑菌圈为20mm,MIC 1.56mg·mL-1,MBC为3.125mg·mL-1。抗生素耐药的菌株对竹叶提取物敏感程度,不同季节的竹叶提取物对大肠杆菌抑制效果强弱为:冬季春季夏季秋季。     

18种中草药对大肠杆菌抑菌效果的研究

[目的]研究鹿蹄草(WINTERGREEN)、功劳叶(CHINESE HOLLY LEAF)、金樱子(CHEROKEE ROSE FRUIT)和大黄(RHEUMOFFICINALE)等18种中草药提取物的抑菌作用。[方法]采用水煎法提取中草药的有效成分,以大肠杆菌作为供试菌,利用滤纸片法测定中草药提取物的抑菌作用,并用2倍稀释法测定抑菌效果最好的4种中草药的最小抑菌浓度。[结果]18种中草药中有15种对大肠杆菌有抑制作用;其中鹿蹄草的最小抑菌浓度为31.25 mg/ml,功劳叶、金樱子和大黄的最小抑菌浓度均为62.50 mg/ml。[结论]鹿蹄草对大肠杆菌具有较好的抑制效果。