棘球蚴囊液抗原A和B在酶联免疫吸附试验中的应用比较

用醋酸缓冲液和４０％饱和硫酸铵边续沉淀法从绵羊棘球囊液（ＳＨＣＦ）中得到部分纯化抗原（ＳＰＰＣＦ），并从中分离了抗原Ａ和抗原Ｂ，分别用单克隆抗体反向间接血凝试验（Ｍ－ＲＰＨＡ）、单克隆抗体双扩散试验（Ｍ－ＤＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行了鉴别，表明自制的三株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）均识别ＳＨＣＦ、ＳＨＣＦ、ＳＰＰＣＦ及抗原Ｂ，而不识别抗原Ａ；用ＥＬＩＳＡ对阳、阴性血清检测，ＳＰＰＣＦ、抗原     

快速测定火鸡出血性肠炎病毒的单克隆抗体—免疫过氧化…

应用生物素－新和素过氧化物酶复合物和单克隆抗体（ＡＢＣ－ｍＡｂ）检测冷冻和福尔马林固定石蜡包埋的感染火鸡出血性肠炎（ＨＥ）的火鸡脾组织切片中ＨＥ病毒抗原的间接免疫过氧化物酶技术（ＩＰ），与间接免疫荧光抗体技术（ＩＨＡＴ）及琼脂沉淀试验（ＡＧＰＴ）作了比较。ＩＰ染色法从感染后４８小时至试验结束时的第１１天均能检出ＨＥ病毒抗原。ＡＧＰＴ和ＩＦＡＴ检出ＨＥ病毒抗原的时间分别为感染后３～７天和２～９天.同     

套式反转录—聚合酶链反应检测恙螨及鼠肺内肾综合征出血热病毒RNA

选择覆盖肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成２对引物,采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ,建立了ＲＴ－ＰＣＲ检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法,扩增产物经凝胶电泳及斑点印迹杂交证实具有特异性。结果显示,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离螨５０只组,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠肺１０００ｍｇ、５００ｍｇ组经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性;ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组,ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只和１０只组,游离螨１０只和５只组,鼠肺ＨＦＲＳＶ抗原阳性１００ｍｇ组均未见有明显扩增带。进一步用套式反转录－聚合酶链反应（ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ）检测,在ＲＴ－ＰＣＲ未测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ。结果表明ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点,可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ,为确认恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了分子生物学证据。     

应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究

用鸡传染性贫血病病毒（ＣＩＡＶ）ＭＳＢＩ－ＴＫ５８０３毒株感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ；细胞涂片为抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＩＦＡ）。应用该ＩＩＦＡ方法对人工感染的ＳＰＦ鸡进行了检测１５只１日龄ＳＰＦ鸡在接种后第７、１４天时均呈阴性反应；２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，３５天时呈明显阳性反应；１４只４０日龄ＳＰ     

猪对传播流行性出血热作用的研究

应用ＩＦＡ和免疫酶染色法（ＩＥＡ）分别对家猪屠宰工人和饲养员及其猪肺组织和血清检测流行性出血热（ＥＨＦ）病毒抗原与抗体（抗－ＥＨＦ），结果屠宰工人和饲养员ＥＨＦ隐性感染率随着工龄和接触时间的增加而上升，呈正相关关系（ｒ＝０．９５；０．９８）。特别是从ＥＨＦ病毒抗原阳性猪的饲养员抗－ＥＨＦ率高达２０％（２／１０），而ＥＨＦ病毒抗原阴性猪饲养员未见感染（０／５０），不同疫区猪带毒率和抗－ＥＨＦ阳性率均     

流行性出血热病毒气溶胶感染乳鼠的免疫病理学研究

采用免疫组化ＢＡ法，对流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）气溶胶感染乳鼠脏器组织中的病毒动态分布进行了观察，并对其抗体消长进行了测定。结果表明：①ＢＡ法为病理诊断ＥＨＦＶ感染提供了一种准确的手段；②ＥＨＦＶ可通过气溶胶途径感染乳小鼠，乳小鼠感染ＥＨＦＶ的ＬＤ５０值可作为环境浓度的参考值；③ＥＨＦＶ气溶胶途径感染乳鼠后，４ｈ即可在心、肺，１ｄ在嗅球部检出，并可在其组织细胞中增殖，经血循、嗅神经、单核巨噬细胞系统等多途径扩散，造成多组织脏器的泛发性感染。感染后１２～１４ｄ，病毒检出率和病毒量均达峰值。动物自身免疫系统对ＥＨＦＶ有一定的清除能力；④感染乳鼠脑、肺、肾等脏器组织的病变与人类感染ＥＨＦＶ的病变有一定的相似性，提示可作为人ＥＨＦＶ的模型动物；⑤抗原检出率高于抗体检出率，ＥＬＩＳＡ法检出率高于ＩＦＡ法检出率。     

从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究

采用猪肺巨噬细胞和Ｍａｒｃ－１４５细胞培养对国内暴发流行ＰＲＲＳ的某地猪场进行了病毒分离，从流产胎儿分离出特征性致细胞病变因子，用ＰＲＲＳＶＳＤＯＷ－１７单克隆抗体进行间接免疫荧光染色，证明从４头流产胎儿分离到４株ＰＲＲＳＶ（ＣＨ－ｌａ，ＣＨ－１ｂ，ＣＨ－ｌｃ，ＣＨ－ｌｄ）这４株毒均可在猪肺巨噬细胞和Ｍａｒｃ－１４５ 细胞上生长，并产生特征性ＣＰＥ变化，用ＰＲＲＳＶ美国分离毒株ＶＲ－２３３２和ＮＶ     

不同启动子对重组痘苗病毒表达狂犬病病毒糖蛋白基因的影响

以血凝素（ＨＡ）基因为侧翼，将狂犬病病毒糖蛋白基因ｃＤＮＡ置于不同类型的痘苗病毒复合启动子下游，构建了４种表达质粒。重组表达质粒转染已感染ＷＲ株痘苗病毒的ＢＨＫ２１细胞，并通过鸡红细胞吸附试验，筛选、纯化出与表达质粒对应的４组ＨＡ－重组痘苗病毒：ｖＳＦＪ１－１０ＲＶｇｐ，ｖＳＦＪ２－１６ＲＶｇｐ，ｖＲＪ１－１０ＲＶｇｐ，ｖＲＪ２－１０ＲＶｇｐ。经间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）鉴定，从４组重组病毒中每组各鉴定出１株阳性重组病毒。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测显示，重组病毒感染的ＢＨＫ２１细胞裂解物上清中有１种蛋白与抗ＲＶＧＰ的ＭｃＡｂ发生特异反应，分子量为６９０００。在重组病毒感染早期，ＲＶＧＰ的表达量以ｖＳＦＪ１－１０ＲＶｇｐ最高；而在感染晚期，则以ｖＳＦＪ２－１６ＲＶｇｐ最高。４株重组病毒免疫小鼠，均能够不同程度地诱导小鼠产生抗ＲＶＧＰ特异性抗体。     

家禽血清,卵黄和牛乳清中HBV标志物与人HBV—DNA的关系

应用反向间接血凝试验（ＲＰＨＡ）、酶免疫测定（ＥＩＡ）和聚合酶链反应（ＰＣＲ）测定了家禽血清、卵黄和牛乳清中ＨＢＶ标志物及人ＨＢＶ－ＤＮＡ。经ＲＰＨＡ测定发现，ＨＢｓＡｇ阳性率分别为４８／２０５（鸡血清），９／３１（鸭血清），３１／１０７（鸡卵黄）和５／３５（牛乳清）；在ＥＩＡ测定中，ＨＢｓＡｇ的阳性率和滴度均低于ＲＰＨＡ法，而且还发现其他ＨＢＶ标志物（ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｅＡｂ和ＨＢｃＡｂ）阳性的样品。对其中阳性样品应用ＰＣＲ测定ＨＢＶ－ＤＮＡ，结果全部阴性。此外，在ＲＰＨＡ测定中，经热处理的样品中５６．９９％由阳性转阴性；ＲＰＨＡ－ＨＩ测定中，人的阳性对照组明显地被抑制，而畜禽的阳性样品几乎均不能被抑制。根据上述结果，提示存在于家禽血清等样品中的ＨＢＶ标志物可能是由非特异性因素和／或其他交叉抗原所引起，而与人ＨＢＶ无关。     

一种检测猪生殖——呼吸道综合征的ELISA抗原的制备

利用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００助溶，由猪生殖－－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染的ＭＡＲＣ－１４５细胞可制备出高纯度的ＥＬＩＳＡ抗原。这一技术消除了涉及到ＰＲＲＳＶ抗的及细胞抗在的常见本底反应。将这种高质量抗原应用到检测抗ＰＲＲＳＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ中，辅以一咱有效的血清封闭稀释剂可消除血清样品的非特异性反应。这种ＥＬＩＳＡ技术比间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）更为敏感；特别是对感染后期血清有高度特异性     

应用间接免疫荧光法检测狂犬病病毒

取０．５ｍｌ兔ＢＨＫ－２１新鲜健康细胞液和０．１ｍｌ狂犬病病毒细胞液在含小飞片青瓶中混合，培养２４小时后制片，加抗狂犬病病毒兔抗体感作，用驴抗兔荧光抗体染色，通过荧光显微镜观察细胞浆内黄绿色结构判定病毒是否在细胞内增殖，从而建立了检测狂犬病病毒的间接免疫荧光法（ＲＦＡＴ）。用ＲＦＡＴ检测５批Ｆｌｕｎｇ－ＬＥＰ株培养液，５批ＥＲＡ株培养液和５批鹿毒８２０２株培养液，ＴＣＩＤ５０平均滴度分别为５．６８、６６０５、４．８６；对小鼠脑内接种，ＭＬＤ５０平均滴度分别为５．５、５．５６、４．２５。从试验结果看，ＲＦＡＴ是取代ＭＬＤ５０测定法的理想方法。     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性法氏囊病病毒

用制备的抗鸡ＩｇＧＭｃＡｂ－ＨＲＰ作为免疫试剂，以ＩＢＤＶ的高免阳性鸡血清作为抗体，用间接ＥＬＩＳＡ法检测经ＩＢＤＶ强毒攻击的各脏器含毒情况，同时与ＡＧＰ法进行比较。结果表明两种方法具有良好的平行关系，间接ＥＬＩＳＡ法比ＡＧＰ法更为敏感；攻毒鸡的法氏囊带毒最多，而在脾、胸腺、肾中均未检出病毒抗原。     

用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个     

禽脑脊髓炎免疫细胞类别和数量变化的分析

本研究用ＡＥＶ－ＮＨ９３７株分别给１日龄雏鸡口服感染和脑内接种，并在感染后的不同阶段采血、剖检，进行琼扩试验和病理组织学观察（Ｈ．Ｅ．染色、胶质细胞染色、ＲＮＡ显色、ＡＮＡＥ显色），结果表明：ＡＥＶ经不同途径感染均引起了典型的非化脓性脑脊髓炎，血清琼扩反应阳性，各免疫器官和中枢神经小血管周围均见ＲＮＡ阳性细胞（主要是前浆细胞和浆细胞）明显增多。感染后机体出现了活跃而持续的体液免疫应答；同时也见ＡＮＡＥ阳性细胞（主要是巨噬细胞）增多。     

单克隆抗体捕捉法ELISA检测DHV抗体的研究

以ＤＨＶ单克隆抗体包被反应板，以粗提病毒作为抗原，建立了检测ＤＨＶ抗体的单抗捕捉法ＥＬＩＳＡ，经与间接ＥＬＩＳＡ作平行试验，二者检测符合率为１００％。     

单克隆抗体捕捉法ELISA检测DHV抗体的研究

以ＤＨＶ单克隆抗体包被反应板，以粗提病毒作为抗原，建立了检测ＤＨＶ抗体的单抗捕捉法ＥＬＩＳＡ，经与间接ＥＬＩＳＡ作平行试验，二者检测符合率为１００％。     

口蹄疫嵌合病毒疫苗的研究

口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）ＶＰ１（１３２－１５９位残基）的Ｇ－Ｈ环是病毒粒子表面的主要特征，它在疫苗效力，抗原变异和细胞结合中起着主要作用。我们用ＦＭＤＶ的感染性ｃＤＮＡ构建一种Ａ血清型病毒，在该病毒中，其Ｇ－Ｈ环被Ｏ或Ｃ血清型病毒的同源序列取代。这种嵌合病毒的复制滴度高，并表现与野毒相似的噬斑形态。由此证明，Ｇ－Ｈ环可在血清型之间交换。单克隆抗体分析表明，环内所含抗原表位可被转移至嵌合体，并保持由Ａ     

猪繁殖与呼吸综合征病毒实验感染SPF猪外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞早期凋亡细胞的观察

采用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ／ＰＩ双染色法,用流式细胞仪检测了猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）实验感染ＳＰＦ猪不同时期外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞感染Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ＾＋／ＰＩ＾－细胞群（早期凋亡细胞群）。结果显示,ＰＲＲＳＶ感染猪外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ＾＋／ＰＩ＾－细胞群的表达率均明显高于正常对照猪,感染后２４ｈ表达率达最高值。     

猪生殖和呼吸综合症的血清学诊断方法

１９９５年以来,国内学者相继建立了猪生殖和呼吸综合症（ＰＲＲＳ）的ＩＦＡ、ＩＰＭＡ、ＥＬＩＳＡ和Ｄ０ｔ－ＥＬＩＳＡ等血清学诊断方法,简述如下。１间接荧光抗体法（ＩＦＡ）细胞板的制备：将生长于培养瓶的Ｍａｒｃ１４５或ＨＳ２Ｈ细胞消化后,用含１０％犊牛血...