应用RT—PCR检测辣椒上的黄瓜花叶病毒

根据黄瓜花叶病毒（CMV）的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,运用两步法RT—PCR与一步法RT—PCR都可以从感病组织中扩增出与预期的780bp大小一致的目标片段。两种方法相比,一步法的特异性强、灵敏度高、省时经济、程序简单,达到了快速检测的目的。应用一步法RT—PCR对采集于山东辣椒产区的病毒病样本进行检测,结果表明6个采样地点的样本中均检测到CMV,在所采集的30个病毒病样本中CMV所占的比例为33．3％,说明CMV是山东省辣椒病毒病主要毒源之一。     

香蕉条斑病毒病和花叶病混合感染的症状及其分子检测

香蕉条斑病毒(Banana streak virus, BSV)和香蕉花叶心腐病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)是危害中国香蕉的2种重要病毒,BSV受低温胁迫影响后表现为典型症状。在低气温时期对海南澄迈、陵水的几个香蕉种植园调查发现,部分香蕉携带BSV疑似症状,PCR检测证实BSV在海南普遍发生;此外,在部分具BSV典型症状的感病植株上发现了CMV疑似症状,经过RT-PCR检测证实,部分样品存在BSV和CMV的混合感染。本研究为后续香蕉病毒病的防治以及健康组培苗的监测提供理论支撑。     

一步法和两步法RT-PCR对裸大麦β-actin基因的检测

通过一步法RT-PCR和两步法RT- PCR扩增裸大麦内参基因β- actin,都得到500bp的目的片段.结果表明,一步法RT - PCR和两步法RT - PCR都能快速检测出目的基因,一步法比较简便、快速、污染少,但是有明显的引物二聚体形成,对后续的荧光定量试验不利;两步法灵敏度更高而且比较经济,目的条带单一,无引物二聚体,更适合裸大麦后续的分子克隆试验.     

单头灰飞虱体内两种水稻病毒的双重一步法RT PCR检测

灰飞虱传播的水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)和水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus, RBSDV)是危害我国水稻生产最主要的2种病毒,建立灰飞虱体内RSV和RBSDV快速、可靠的检测方法是水稻生产中的重要问题。本研究根据RSV RNA3和RBSDV S10序列分别设计了2个病毒的特异性引物,通过退火温度和PCR循环数等条件的优化,建立了灰飞虱体内RSV和RBSDV快速鉴定的双重一步法RT PCR体系。对一步法和两步法RT PCR检测结果进行比较,表明2种方法均能准确有效鉴定灰飞虱体内的2种病毒,且两步法的检测效果略好于一步法。而灵敏度实验表明一步法RT PCR可以从0005 ng·μL-1的灰飞虱RNA初始模板中准确检测到病毒,完全满足单头灰飞虱体内病毒检测的需要。应用本研究建立的双重一步法RT PCR体系对200头获毒灰飞虱样品中的RSV和RBSDV进行了检测,结果进一步证实了此方法的稳定性和可靠性。     

36%降黄龙可湿性粉剂防治香蕉花叶心腐病和香蕉束顶病示范试验

36％降黄龙可湿性粉剂属于新型噻嗪酮类杀菌剂，2000年进行了36％降黄龙可湿性粉剂防治香蕉花叶心腐病和香蕉束顶病的药效示范试验。结果表明：降黄龙对由病毒侵染所致属全株性病害的香蕉花叶心腐病和香蕉束顶病的防效显著，药后45天调查，感染香蕉花叶心腐病的植株，叶片黄绿相间的条纹症状消失，根系分布的深度和广度增加，假茎迅速增粗，叶色浓绿，叶片增厚；感染香蕉束顶病的植株，叶片抽出快、叶面积增长迅速，大部分植株已达到最大叶面积，继而转为正常生长发育。     

小鼠肝炎病毒RT-PCR检测方法的研究

用4株小鼠肝炎病毒(MHV1,MHV3,A59,JHM)分别感染DBT细胞,收获病毒,提取病毒RNA。根据病毒基因的特异性保守序列设计引物,在最佳务件下进行RT—PCR,建立了RT—PCR检测方法,即两步法和一步法,分别扩增出600bp,375bp的特异性核酸片段,其中,一步法检测MHV更快速、简便。     

双重一步法RT-PCR检测2种主要兰花病毒

[目的]研究建兰花叶病毒（CymMV）和齿兰环斑病毒（ORSV）双重一步法RT—PCR检测方法,为病毒的早期快速诊断提供技术支持。[方法]根据2种病毒的外壳蛋白基因的保守序列分别设计两对特异性引物,并进行双重与单一RT—PCR对比试验。[结果]结果在健康蜘蛛兰被人工接种病毒后第10天和第21天用一步法RT-PCR方法分别获得CymMV和ORSV与预期相符的约764和946bp扩增产物务带;且双重一步法RT—PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后,出现两务与单一RT—PCR产物相对应的清晰务带,获得较理想的检出效果;扩增产物的核酸序列经BLAST分析,同源性均在85％以上,证实了检测结果的准确性。[结论]该方法具有更加灵敏、特异、快速和简便的特点,适合于两种主要兰花病毒的同时快速检测。     

TC-RT-PCR技术在马铃薯病毒检测及其基因克隆上的应用

利用试管捕捉RT—PCR（TC—RT—PCR）技术从马铃薯病毒发病叶片中检测并克隆到PVX、PVY和PLRV3种病毒及其外壳蛋白基因的全长序列,长度分别为714、804和627bp。结果表明,TC-RT—PCR技术是一种简单,快捷,灵敏度高的方法,在马铃薯病毒的检测和相关基因的克隆中将会得到很好的应用。     

香蕉生长中期病虫害防治

香蕉小叶生长至抽蕾前常常受到香蕉象鼻虫、交脉蚜、弄蝶、斜纹夜蛾、网蝽、叶螨等害虫及香蕉花叶心腐病、束顶病、叶斑病、茎腐病、黄肿病等病害危害，致使香蕉叶片、植株受损，导致香蕉叶片残缺不齐、黄化、坏死、枯死，严重影响香蕉的生长发育，推迟抽蕾或不能正常抽蕾挂果。因此必须加强香蕉生长中期的病虫害防治，确保香蕉的正常生长，促进香蕉的高产优质。现把香蕉生长中期病虫害防治技术介绍如下。     

海南香蕉叶脉坏死病病原检测

应用ELISA和PCR技术对香蕉叶脉坏死病病样进行病原检测。结果显示：病样在ELISA 反应中对BBTV 和CMV 表 现为阳性,对BSV 表现为阴性;而在PCR 反应中,对上述猿种病毒均表现为阳性。初步研究认为袁该病可能是由BBTV 和CMV 两种病毒复合侵染所致。     

双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析

通过对转ＴＭＶ和ＣＭＶ双价外壳蛋白基因番茄Ｔ１代群体和Ｔ２代株系进行ＰＣＲ及ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ鉴定，并分别进行温室及田间抗病毒试验，结果表明，Ｔ１代工程番茄植株中确有ＣＭＶ—ＴＭＶ双价外壳蛋白基因的遗传和分离，其遗传行为符合显性单基因的孟德尔遗传。Ｔ２代部分株系ＣＭＶ—ＴＭＶ双价ＣＰ基因已获得稳定遗传，共获得了３个遗传稳定的番茄株系。     

甘蔗花叶病毒外壳蛋白基因的克隆及系列表达载体的构建

采用RT-PCR法,从表现玉米矮花叶病症状的玉米叶片中克隆了外壳蛋白(Coat protein)基因。测序和同源性比较结果表明:所克隆的CP基因来自甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)MDB株系,编码219个氨基酸。以CP基因为目的基因,构建了用于基因枪转化的p35SCPfBar,p35SCPrBar,pUbiCPfBar,pU-biCPrBar 4个表达载体和用于农杆菌转化的pCAMBIACPf,pCMABIACPr 2个表达载体。     

茸毛基因和Tm－2nv及其重组基因型对番茄病毒病抗性的研究

茸毛、Tm-2nv重组基因型对病毒病的抗性调查结果表明:重组基因型间的病毒病抗性存在极显着差异,茸毛基因能极显着地降低病毒危害,而Tm-2nv各基因型间的病情指数却无显着差异.1993年秋季大田生态条件下,番茄病毒病危害潜力达63.48%,其中CMV、TMV分别约占67.7%和32.3%.CMV和TMV危害程度的相对大小是制订Tm-2nv和茸毛基因综合利用方案的重要依据,当CMV占主导地位时,主要以茸毛基因利用为宜.     

纳米银对烟草病毒的体外抑制作用

为弄清纳米银对烟草病毒病是否具有抑制作用,采用半叶接种法,研究了纳米银对烟草病毒的体外防抑作用.结果表明:微波纳米银对TMV、CMV和PVY 3种单一病毒的体外抑制效果显著,电解纳米银对CMV和PVY的单一病毒的体外抑制效果显著.在3种病毒的复合侵染试验中,微波纳米银对TMV-CMV体外复合侵染的抑制效果显著,电解纳米...     

云南主要地区辣椒分离的黄瓜花叶病毒的亚组鉴定*

 在云南富民、砚山、邱北和南涧等云南主要辣椒产区采集了28个病毒样品,选择应用RT-PCR,Msp I以及EcoR I酶切和克隆测序等分子生物学手段对其中的7种进行检测。经过RT-PCR实验确定其病原为黄瓜花叶病毒（CMV）,同时分离物的Msp I酶切图谱与CMV亚组I的酶切图谱很相似,经EcoR I酶切后也没有出现异常差异。进一步对所检测的黄瓜花叶病毒分离物的外壳蛋白基因进行克隆测序,结果表明,分离物的核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组I的分离物的核苷酸序列有极高的同源性,达93%~98%; 而与亚组II株系的核苷酸序列同源性仅为77%。因此将所分离到的黄瓜花叶病毒分离物归属于黄瓜花叶病毒亚组I。     

建兰花叶病毒的分子生物学检测

根据建兰花叶病毒外壳蛋白基因的保守序列设计2对引物,采用IC-RT-PCR方法和质粒梯度稀释的方法,研究建兰花叶病毒的分子检测方法和灵敏度.结果表明,从21个建兰花叶病毒的病株样品中均能扩增出与预期大小相同的DNA条带,序列测定和序列同源性分析表明所测定的序列均为CyMV外壳蛋白基因的部分序列,序列同源性均达到89%以上;灵敏度检测结果表明:可检测的最低病毒含量为2.72×10-7 μg/mL.     

花叶病毒侵染的果蔗(Badila)的基因表达

采用荧光标记差异显示技术(d ifferential d isp lay,简称DD-PCR)对甘蔗花叶病毒(Sugarcane m osaic virus,SCMV)侵染的果蔗(Bad ila)基因表达进行研究.用随机筛选出的23对引物组合扩增出9条差异条带,其中4条是有明显差异表达的cDNA条带,5条是表达强弱的差异条带.同时对一些影响荧光标记DD-PCR的因素进行了分析.     

菌克毒克防治烟草花叶病效果研究

研究菌克毒克对烟草花叶病的防治效果,结果表明:菌克毒克(8%宁南霉素水剂内销品)对烟草花叶病有较好的防治效果,平均防治效果达66.7%,可促进烟株的生长,经济效益显著。     

黄瓜花叶病毒（CMV）土壤非介体传播研究

对黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）土壤非介体传播的试验结果表明，土壤非介体传播是ＣＭＶ传播的新途径，不同作物间的传播效率有差异，一般ＣＭＶ传入根部后多数地上部不表现症状，但根系生长明显受到影响。文章还分析了ＣＭＶ能够以土壤非介体方式传播的原因。     

玉米种子携带矮花叶病毒调查研究

经几年来对240个玉米品种(系),62841株的调查,从中发现54个品种(系)出现种子带毒苗,平均带毒苗率为0.56%,最高的6174×墨黄二为27.03%。后经过对25个品种(系)进行田间种子带毒苗率的测定,有16个品种(系)出现种子带毒苗,带毒苗率为1.23%～6.90%。经过种子存放时间、种衣剂包衣和不同温度处理种子带毒测定结果表明,玉米种子存放31个月后,所携带的矮花叶病毒仍具有侵染活性,种衣剂包衣和不同温度处理也不能使病毒失去活性。通过不同种植方式带毒测定结果证明,地膜覆盖种植可大幅度降低种子带毒苗率。因此,地膜覆盖种植对降低初侵染源具有明显的作用。