Application de la chromatographie sur couche mince a l'analyse des phospholipides et galactolipides des vegetaux

Résumé Les principes de la séparation des lipides polaires des autres catégories lipidiques, puis de la séparation des différents lipides polaires entre eux sont rapidement passés en revue. Les principaux systèmes, récemment décrits, permettant de réaliser ces séparations sur couche mince, sur papier silicé ou en couplant un fractionnement préalable sur colonne avec une chromatographie ultérieure sur couche mince, sont présentés. Plusieurs exemples sont fournis de l'application de ces méthodes d'analyse aux lipides polaires de divers fruits, tubercules ou feuilles vertes.

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Summary The principles of the separation of polar lipids from the other lipid categories, then the principles of the separation of the various polar lipids between them, are rapidly reviewed. The main systems, recently described, thanks to which it is possible to achieve these separations on a thin-layer, on silica paper, or by coupling a preliminary column fractionation with an ulterior thin-layer chromatography are presented. Several examples of the application of these methods of analysis to the polar lipids of various fruits, tubers, or green leaves, are given.

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Zusammenfassung Die Grundsätze der Trennung der polaren Lipide von den anderen Lipiden, und der verschiedenen polaren Lipide untereinander werden kurz besprochen. Die kürzlich beschriebenen Verfahren, welche diese Trennungen auf Dünnschichten möglich machen, auf Kieselgel oder durch Kupplung mit einer vorherigen Säulen-Fraktionierung und anschließender DC werden dargestellt. Mehrere Beispiele werden bezüglich der Anwendung dieser analytischen Verfahren für polare Lipide in verschiedenen Früchten, Knollen oder grünen Blättern gegeben.

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Abréviations utilisées PA acide phosphatidique - PI phosphatidylinositol - PS phosphatidylsérine - PE phosphatidyléthanolamine - PG phosphatidylglycérol - PGP diphosphatidylglycérol (cardiolipine) - MGDG monogalactosyldiglycéride - DGDG digalactosyldiglycéride - LN lipides neutres     

La chromatographie sur couche mince: Principes et possibilités

Résumé Après un bref rappel des avantages de la chromatographie de surface sur la chromatographie sur colonne, on compare les avantages et les inconvénients respectifs de la chromatographie sur couche mince et de la chromatographie sur papier. Les méthodes générales de la chromatographie sur couche mince (CCM) sont présentées (préparation des couches, types de couches, dépot des échantillons à analyser, CCM analytique, CCM préparative, moyens de développement des chromatogrammes). Les principes généraux des divers types de chromatographie (adsorption, partage direct, partage inversé, relargage, exclusion-diffusion, échange d'ions, spécifique) qui peuvent être mis en oeuvre sont rappelés et des exemples concrets sont donnés dans chaque cas. Les problèmes de l'électrophorése et de la chromato-electrophorése sur couche mince sont également évoqués. Bien que cette méthode analytique soit le plus simple et le puissant moyen de séparation des corps en mélange, il est nécessaire de rappeler que bien des erreurs de conception sont à la base de son manque de développement dans certains domaines (chromatographie des substances hydrosolubles par exemple). A titre d'exemple on rappelle que la première chromatographie de relargage et la première chromato-electrophorése basse tension n'ont été réalisées que tout récemment.

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Summary After a brief summary of the advantages of surface chromatography compared to column chromatography, the respective advantages and inconveniences of thin-layer and paper chromatography are compared. The general methods of thin-layer chromatography are presented (preparation of the layers, types of layers, deposition of the samples to be analyzed, analytical TLC, preparative TLC, methods for developing the chromatograms). The general principles of the various types of chromatography (adsorption, direct partition, reverse partition, salting out, exclusion-diffusion, ion-exchange, specific chromatography) that may be used are reminded of, and concrete examples given in each case. The problems of electrophoresis and thin layer chromato-electrophoresis are also treated. Though this analytical method be the simplest and most powerful means for the isolation of components in mixtures, it is necessary to remind that quite a number of errors in the conception are responsible for its lack of development in certain fields (water soluble substances chromatography, for instance). As an example one might remember that the first salting-out chromatography, and the first low-tension chromatoelectrophoresis have been developed only very recently.

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Zusammenfassung Die Vorzüge der Oberflächen-Chromatographie gegenüber der Säulen-Chromatographie wurden kurz aufgezählt und die Besonderheiten der Dünnschicht- und der Papier-Chromatographie verglichen. Die Grundlagen der DC werden erklärt (Vorbereitung der Schicht, Arten der Schicht, Auftragen der Proben, analytische DC, vorbereitende DC, Entwicklungsverfahren der Chromatogramme). Anschließend werden die grundsätzlichen Verfahren der verschiedenen Typen von Chromatographie erörtert (Adsorption, direkte Trennung, inversierte Trennung, Aussalzen, Diffusion, Ionenaustausch, spezifische Verfahren), die praktisch infrage kommen. Für jeden Typ werden Beispiele gegeben. Die Probleme der Elektrophorese und der Elektrophorese-DC werden ebenfalls behandelt. Obwohl diese Analysenmethode das einfachste und stärkste Trennverfahren für Stoffgemische ist, so muß daran erinnert werden, daß ihre Entwicklung in gewissen Gebieten durch Fehler in der Auffassung gehemmt worden ist, zum Beispiel ihre Anwendung für wasserlösliche Stoffe. Verfasser weist darauf hin, daß die erste Aussalz-DC und die erste Niederspannungs-Chromato-Elektrophorese erst ganz kürzlich realisiert wurden.

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Avec la collaboration technique de MademoiselleCh. Thommegay et de MademoiselleA.-M. Drapier.     

Recherche des colorants naturels et artificiels dans les aliments à l'aide de la chromatographie sur couche mince

Résumé La recherche des colorants dans les aliments est de première importance, car non seulement les colorants modifient l'aspect des substances comestibles, mais bien souvent ils interviennent dans les effets physiologiques d'une façon bienfaisante (action vitaminique, antiseptique) ou malfaisante (action toxique). Il faut d'ailleurs distinguer les colorants normaux des colorants ajoutés aux matières alimentaires. Ces additifs pouvant être constitués par des colorants naturels ou artificiels, seuls certains d'entre eux sont autorisés par la loi, d'où l'intérêt de la caractérisation des colorants au point de vue des falsifications et de la santé publique.Dans des milieux aussi complexes que les aliments, la recherche des colorants est longue et difficile, d'autant plus qu'il s'agit la plupart du temps de mélange de principes de teintes variées; la chromatographie, et en particulier la chromatographie sur couche mince, est venue apporter une heureuse solution à la résolution de ce problème compliqué. Cependant elle est rarement applicable directement à l'analyse des aliments, il faut au préalable préparer une liqueur extractive amenant une certaine purification des pigments: fractionnement par solvants, adsorption sur floche de laine, sur ruban polyfibres, sur échangeurs d'ions, formation de complexes insolubles dans l'eau ou solubles dans les solvants organiques, etc.La chromatographie sur couche mince elle-même s'effectue dans des conditions différentes suivant qu'il s'agisse de substances liposolubles (caroténoïdes, quinones) ou de principes hydrosolubles (flavonoïdes, anthocyanes, dérivés sulfurés, etc); dans le premier cas seront utilisées des plaques activées avec des solvants anhydres. Les solvants seront également différents suivant qu'il s'agit de colorants acides ou de colorants basiques. La révélation est souvent inutile, les substances à caractériser étant naturellement colorées; cependant il est utile d'observer les changements de teintes à divers pH et par formation de complexes métalliques. Enfin, pour une meilleure caractérisation, il est prudent d'opérer comparativement avec des substances étalons.

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Summary The detection of dyes in foods is of primary importance, since not only do the dyes modify the aspect of edible substances, but very often intervene in the physiological effects in a beneficial (vitaminic or antiseptic action) or a harmful (toxic effects) way. One must distinguish normal colouring matter from dyes added to foods. As these additives include natural colouring matters and artificial dyes, only a few of them are authorized by law, hence the importance of the characterization of the dyes from the standpoint of adulterations and public health.In medium as complex as are the foods the detection of dyes is long and difficult in as much as most of the times it concerns mixtures of compounds of various colourings; chromatography, and more especially thin-layer chromatography, has brought a happy solution to this complicated problem. However, it is seldom applicable directly to the analysis of foods, the preliminary preparation of an extractive liquor bringing a certain purification of the pigments: solvents fractionation, adsorption on soft wool or polyfiber, on ion exchangers, formation of water-insoluble, (or soluble in organic solvents) complexes.This layer chromatography in itself is carried out in different conditions depending on whether one has to do with fat soluble substances (carotenoïds, quinones), or water soluble ones (flavonoïds, anthocyans, sulphurid derivatives). In the first case plates activated by anhydrous solvents will be used. Solvents will also differ depending on whether the dyes are acid or basic. Development is usually useless, as the substances to be characterized are coloured naturally; it is useless to observe alterations of tints at various values of pH, and by the formation of metal complexes. To conclude, for a better characterization it will be safer to operate comparatively with standard substances.

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Zusammenfassung Der Nachweis von Farbstoffen in den Lebensmitteln ist von größter Bedeutung, da dieselben nicht nur das Aussehen verändern, sondern oft auch auf die physiologischen Wirkungen einen günstigen (vitaminisierende oder antiseptische Wirkung) oder nachteiligen (giftige Wirkung) Einfluß haben. Es ist übrigens zwischen normalen und den Nahrungsmitteln zugesetzten Farbstoffen zu unterscheiden. Diese Fremdstoffe können natürliche oder künstliche Farbstoffe sein. Von ihnen sind nur einige durch Gesetz zugelassen. Hier liegt die große Bedeutung der Farbstoffidentifizierung zum Nachweis der Fälschungen und zum Schutz der öffentlichen Gesundheit.Auf einem so komplexen Gebiet wie der Lebensmittel, ist der Farbstoffnachweis langwierig und schwierig, um so mehr da es sich zumeist um Gemische verschiedener Farbprinzipien handelt. Zur Lösung dieser komplizierten Probleme trägt die Chromatographie und insbesondere die DC entscheidend bei. Letztere kann jedoch selten direkt zur Lebensmittelanalyse angewandt werden. Als Vorbereitung muß eine Extraktionsflüssigkeit, die zu einer Pigmentreinigung führt, hergestellt werden: Trennung durch Lösungsmittel, Adsorbierung auf Wollbausch, auf Mehrfachstreifen, auf Ionenaustauscher, Bildung unlöslicher Komplexe in Wasser oder löslicher Komplexe in organischen Lösungsmitteln, usw. — Die DC selbst wird unter verschiedenen Bedingungen durchgeführt, wenn es sich um fettlösliche (Carotinoide, Chinone) oder wasserlösliche (Flavonoide, Anthocyane, Schwefelabkömmlinge, usw.) Stoffe handelt. Im ersten Fall benutzt man mit wasserfreien Lösungsmitteln aktivierte Plättchen. Auch die Lösungsmittel sind verschieden und zwar ob es sich um saure oder basische Farbstoffe handelt. Meist bedarf es keiner Entwicklung, da die Stoffe natürliche Färbung aufweisen. Es ist jedoch wichtig, die Farbänderungen bei verschiedenem pH und bei der Bildung von Metallkomplexen zu beobachten. Schließlich ist es ratsam für eine gute Identifizierung, Vergleichsversuche mit Standard-Stoffen durchzuführen.

     

Quelques progres dans la chromatographie sur couche mince

Résumé L'auteur envisage les possibilités d'améliorer le pouvoir séparatif et discute plus particulièrement de la variabilité des conditions de milieu tel que l'atmosphère de la chambre, mode de développement et conditions initiales.Du point de vue de l'examen des chromatogrammes les relations entre le mode d'analyse, la surface des zones et la nature des substances sont démontrées. Dans cet ordre d'idées trois groupes de procédé de haute sensibilité sont envisagés.1. méthode universelle.2. méthode des groupes.3. méthode spécifique sur une substance déterminée.Les résultats d'essais présentés dans la partie finale de l'exposé montrent qu'il est possible de raccourcir sensiblement le temps de séparation en se servant de couches possédant une constitution et une granulométrie déterminée ou en utilisant des substances d'élution spécifiques.L'auteur présente une classification selon leur vitesse de passage des solvants susceptibles d'être appliqués avantageusement à la C.C.M.L'existence d'un rapport plus ou moins étroit entre la vitesse et la viscosité des solvants a été démontrée.

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Summary The author considers the possibility of improving the separative power and discusses more particularly the variability of the conditions of the medium such as room atmosphere, method of development, and initial conditions.As regards the study of the chromatograms the correlation between the analytical procedure, the area of the spots, and the nature of the substances are demonstrated. From this point of view three groups of procedures of high sensitiveness are considered.1. Universal method.2. Method of groups.3. Method specific on a determined substance.The results of the tests presented in the final part of this report show that it is possible to shorten considerably the time for separation through the use of layers having a determined constitution and granulometry or by using specific substances for election.The author presents a classification of solvents that may be advantageously applied in thin-layer chromatography, based on the speed of their passage.

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Zusammenfassung In einer Übersicht werden die Möglichkeiten zum Verbessern der Trenneffekte besprochen. Den experimentell variablen Milieubedingungen, wie Kammerklima, Art der Entwicklung und den Verhältnissen am Startpunkt wird hierbei besondere Beachtung gewidmet. Im Hinblick auf die Auswertung der Chromatogramme werden die Zusammenhänge zwischen der Art des Nachweises, Zonengröße und Substanzart demonstriert. Erstrebenswert sind in diesem Zusammenhang drei Gruppen von Erkennungsmöglichkeiten: 1. Universal-, 2. Gruppen- und 3. Substanzspezifische Nachweisverfahren; alle mit hoher Empfindlichkeit. Die abschließenden Versuchsergebnisse zeigen, daß es durch die Verwendung von Schichten mit einer bestimmten Korngrößenzusammensetzung und/oder entsprechenden Fließmitteln gelingt, die Trennzeit erheblich zu verkürzen. Die in der DC häufig verwendeten Lösungsmittel wurden nach ihrer Wanderungsgeschwindigkeit geordnet und es ergab sich ein mehr oder weniger enger Zusammenhang mit deren Viskosität.

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avec 13 figs.     

Etude far chromatographie sur couche mince des produits du rancissement der corps gras

Résumé Le rancissement autoxydatif des corps gras alimentaires qui altère profondément leurs qualités gustatives, conduit à la formation de petites quantités de mélanges complexes constitués essentiellement de dérivés carbonylés volatiles et d'acides à bas poids moléculaire. En étudiant les produits d'oxydation de l'acide oléique, les auteurs ont identifié les premiers sous forme de leurs di-nitro-phényl-hydrazones et les seconds sous forme de leurs dérivés hydroxamiques par diverses techniques de chromatographie sur couche mince.Les résultats obtenus ont permis de confirmer une hypothèse précédemment émise par les auteurs sur le mécanisme de l'altération des chaines grasses par autoxydation, ainsi que sur la nature de diverses impuretés susceptibles de se former.

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Summary The autoxidative rancidity of food fats which brings deep alterations to their gustatory qualities leads to the formation of small quantities of complex mixtures composed essentially of volatile carbonyl derivatives and low molecular weight acids.In studying the products of oxidation of oleic acid the authors have identified the first as their di-nitrophenyl hydrazones, and the seconds as their hydroxamic derivatives, by means of various thinlayer chromatographic techniques.The obtained results have enabled the authors to confirm an hypothesis recently voiced by them concerning the mechanism of autoxidative alteration of fatty chains as well as concerning the nature of the various impurities that may be formed.

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Zusammenfassung Das autoxydierende Ranzigwerden der Nahrungsmittelfette, das ihre geschmacklichen Qualitäten weitgehend mindert, führt zur Bildung kleiner Mengen komplexer Gemische, die im wesentlichen aus flüchtigen Carbonyl-Abkömmlingen und niedermolekularen Säuren bestehen. Bei der Untersuchung der Oxydationsprodukte der Ölsäure stellten die Autoren die ersten in Form ihrer Di-nitrophenyl-hydrazone, die letzteren in Form ihrer Hydroxamate mittels verschiedener DC-Techniken fest.Die Ergebnisse bestätigten eine kürzlich von den Autoren entwickelte Hypothese betreffend den Mechanismus des Abbaues der Fett-Ketten durch Autoxydation und die Natur der verschiedenen sich bildenden Verunreinigungen.

     

Chromatographie sur couche de gel de silice-charbon actif. Application a la separation analytique et preparative des acides gras satures et de leurs esters methyliques

Résumé Les auteurs ont mis au point une méthode de chromatographie sur couche mince des substances selon leur caractère apolaire qui ne recourt pas aux techniques habituelles d'imprégnation. Le procédé, basé sur l'emploi de charbon actif mélangé en faibles proportions au gel de silice, a fourni d'excellents chromatogrammes d'acides gras saturés et de leurs esters méthyliques.La méthode utilisant une phase apolaire solide se prête facilement à la technique préparative. Des mélanges de laurate, myristate, palmitate et stéarate de méthyle, constituant des échantillons de 50 à 200 mg, ont été parfaitement résolus en leurs composants sur couches épaisses contenant des quantités variables de charbon actif.

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Summary The authors have evolved a method of thin-layer chromatography based on the non-polar characteristics of the substances, that does not resort to the usual impregnation techniques. The procedure, based on the use of activated carbon mixed in small proportions with silica gel, has given excellent chromatograms of saturated fatty acids and their methylesters.The method making use of a non-polar solid phase lends easily itself to the preparative technique. Mixtures of methyl laurate, myristate, palmitate, and stearate, making samples of 50 to 200 mg have been perfectly resolved in their components on thick layers containing variable amounts of activated carbon.

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Zusammenfassung Die Verfasser haben eine DC-Methode entwickelt für Stoffe gemäß deren apolaren Eigenschaften. Diese Methode benutzt nicht die gewöhnlichen Imprägnierungs-Techniken. Das Verfahren beruht auf der Anwendung von Aktivkohle, die in geringen Anteilen zum Siliziumgel gemischt ist. Wir erhielten sehr gute Chromatogramme von gesättigten Fettsäuren und deren Methylestern.Die Methode, die eine feste, apolare Phase benutzt, ist gut geeignet für die vorbereitende Technik. Gemische von Methyl-Laurat, Myristat, Palmitat und Stearat in Form von Proben von 50 bis 200mg, ergaben für ihre Bestandteile einwandfreie Ergebnisse auf Schichten mit verschiedenen Quantitäten von Aktivkohle.

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Un exposé plus complet de la technique est décrit dans: -Bull. Soc. Chim. France, 1967, 9,3443. - Bull. Soc. Chim. France, 1968, 6,2607.     

Recherche de quelques antiseptiques dans les aliments par chromatographie sur couche mince

Résumé Les auteurs ont cherché à établir une technique rapide, simple et largement applicable, de recherche qualitative de quelques antiseptiques dans les aliments. Dans la très grande gamme d'antiseptiques existant, un choix a été fait de ceux dont l'utilisation est la plus courante. Il s'agit des acides benzoïque, parahydroxybenzoïque, salicylique, sorbique, monobromacétique, monochloracétique et de leurs esters. Ces agents conservateurs ont été recherchés dans des aliments aussi variés que mayonnaise et salad dressing, biscuit, pain, viande, boissons alcoolisées et non alcoolisées, etc...Leur extraction s'est faite, d'une manière générale, après défécation par les liqueurs de Carrez, par extraction avec un mélange à parties égales d'éther de pétrole et d'éther.Après concentration de l'extrait à très faible volume, des quantités de l'ordre de 50 Gamma ont été déposées sur les plaques chromatographiques. Au moins deux chromatogrammes en utilisant un ou deux supports et solvants différents ont été réalisés, donnant, pour chaque produit des Rf différents, ce qui a permis une meilleure identification dans les cas douteux.Cette technique, jointe à l'utilisation éventuelle de réactions colorées spécifiques, permet d'identifier avec certitude chacun des antiseptiques étudiés. On peut estimer que la sensibilité de la méthode avec un révélateur général pour la chromatographie en couche mince est de l'ordre de 30 Gamma pour les acides benzoïque, sorbique, monochlor- et mono-bromacétique.Pour l'acide salicylique on peut descendre presqu'à 5 Gamma.Bien que tous les esters de l'acide parahydroxybenzoïque n'aient pas été étudiés séparément, ils sont aisément décelables sous forme d'acide après saponification de l'extrait éthéré. Cette identification globale des esters sera généralement suffisante, étant donné que dans la plupart des pays la législation n'autorise l'emploi d'aucun d'entre eux.

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Summary The authors have endeavoured to set up a rapid, and widely applicable technique for the qualitative detection of some antiseptics in foodstuffs. Among the wide range of existent antiseptics a choice has been made of those that are most commonly used. That means benzoic acid, parahydroxybenzoic acid, salicylic acid, sorbic acid, monobromacetic acid, monochloracetic acid and their esters. These preserving agents have been sought for in foodstuff as various as mayonnaise and salad dressing, biscuits, bread, meat, alcoholic and non alcoholic drinks, etc...Their extraction is carried out mainly, after defecation with Carrez solutions, by means of a mixture of petroleum ether and ether in equal proportions.After concentrating the extract to a very reduced volume, quantities of about 50 gamma have been applied on the chromatographic plate. At least two chromatograms with two different supports and solvents were carried out, giving for each product different Rf values, ensuring thus a better identification in doubtfull cases.These technics, coupled if necessary with the use of specific colored reactions, allow to identify with certitude each of the studied antiseptics. The sensitivity of the method with a general developer for the thin layer chromatography can be evaluated to about 30 gamma for benzoic, sorbic, monochlor and monobromacetic acids. For salicyclic acid, this level can be as low as 5 gamma.Although parahydroxybenzoic acid esters have not been examined separately, they can be easily detected as acids after saponification of the ether extract. This bulk identification of the esters will be probably sufficient insofar as the law in most countries does not authorize the use of any one of them.

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Zusammenfassung Die Forschungen erstreckten sich auf eine schnelle, einfache und allgemein anwendbare Methode zum qualitativen Nachweis von Konservierungsstoffen in Lebensmitteln. Unter der sehr großen Anzahl der Konservierungsstoffe wurden die am häufigsten angewandten ausgesucht: Benzoesäure, Parahydroxybenzoesäure, Salizylsäure, Sorbinsäure, Monobrom-Essigsäure, Monochlor-Essigsäure und deren Ester. Diese Konservierungsstoffe wurden in den verschiedensten Lebensmitteln nachgewiesen: Mayonnaisen, Salad dressing, Keks, Brot, Fleisch, alkoholische und alkoholfreie Getränke, usw.Nach der üblichen Klärung mittels der Klärflüssigkeit von Carrez erfolgt die Extraktion der Konsierverungsstoffe unter Anwendung eines Gemisches gleicher Teile von Petroläther und Aether.Nach Konzentrierung des Extraktes auf kleinstes Volumen, werden Mengen von etwa 50 Gamma auf die Chromatogrammplatten aufgebracht. Es wurden mindestens zwei Chromatogramme mit ein oder zwei verschiedenen Schichten und Lösungsmitteln angefertigt und man erhielt für jeden Stoff verschiedene Rf-Werte, wodurch eine einwandfreie Identifizierung in Zweifelsfällen gewährleistet wird.Das Verfahren, das eventuell durch spezifische Farbnachweise ergänzt wird, erlaubte die sichere Identifizierung jedes der untersuchten Konservierungsstoffe. Die Empfindlichkeit des Verfahrens mit einem normalen Entwickler der DC liegt bei etwa 30 Gamma für den Nachweis von Benzoesäure, Sorbinsäure, Monochlor-Essigsäure und Monobrom-Essigsäure, fast bei 5 Gamma im Falle der Salizylsäure.Obwohl samtliche Ester der Parahydroxybenzoesäure nicht einzeln untersucht wurden, kann man sie in Form von Säuren nach Verseifung des Aetherextraktes leicht nachweisen. Diese globale Identifizierung dieser Ester ist im allgemeinen ausreichend, da die meisten Länder in ihrer Gesetzgebung die Anwendung derselben insegesamt untersagen.

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Travail réalisé à la Station d'Essais et d'Analyses du CERIA (Centre d'Enseignement et de Recherches pour les Industries Alimentaires et Chimiques)1, av. E. Gryzon à Bruxelles7.

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Directeur et assistants de la Station d'Essais et d'Analyses     

Application de la chromatographie sur couche mince (CCM) à la mise en évidence des métabolites du diphényl

Résumé Il a pu être constaté que des injections répétés du diphényl ou d'ortho-phénylphenol par voie intraveineuse ne déterminent aucun trouble de la fonction hépatique chez le lapin. Ceci se vérifie même si les doses injectées étaient relativement grandes.Les métabolites phénoliques du diphényl ont été fractionnés à l'aide de la CCM, élues et identifies à l'aide de leurs spectres dans l'ultraviolet. On a pu reconnaître ainsi le diphényl -4-ol, diphényl-4,4-diol et (pour la première fois chez le lapin adulte) le diphényl -2-ol.Un quatrième métabolite n'a pu être identifié qu'approximativement.D'après son Rf et son spectre infrarouge on peut supposer que dans cette substance l'un des deux noyaux benzéniques a éclaté.

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Summary It could be shown that no biochemical changes are detectable if biphenyl or biphenyl-2-ol is injected i.v. into rabbits in relatively large amounts over longer periods of time.The phenolic metabolites of biphenyl were separated by means of thin-layer chromatography (TLC) and were identified spectrophotometrically in the UV after elution from the TLC spots. Thus the metabolites biphenyl-4-ol, biphenyl-4,4-diol and (for the first time in adult rabbits) biphenyl-2-ol have been ascertained.IR-spectrograms were prepared from the eluted spots of another phenolic metabolite whose Rf value lies outside the series of biphenyl hydroxy derivatives. From these, it is presumable that one of the two benzene rings in biphenyl is cleaved in the substance.

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Zusammenfassung Es konnte gezeigt werden, daß keine klinisch-chemischen Störungen nachweisbar sind, wenn Diphenyl und auch o-Phenylphenol (= Diphenyl-2-ol) über lange Zeiträume hinweg an Kaninchen intravenös in relativ großen Mengen verabfolgt werden.Die phenolischen Metabolite des Diphenyls werden mit Hilfe der Dünnschichtchromatographie aufgetrennt und nach Elution der Flecke UV-spektrophotometrisch identifiziert. Es konnten dabei Diphenyl-4-ol, Diphenyl-4,4-diol und erstmals im erwachsenen Kaninchen Diphenyl-2-ol nachgewiesen werden.Von einem zusätzlich gefundenen phenolischen Stoffwechselprodukt, das sich mit seinem Rf-Wert nicht in die Reihe der Diphenylole einordnen läßt, konnten IR-Spektrogramme aus den Flecken erhalten werden. Danach ist es wahrscheinlich, daß bei dieser Substanz einer der beiden Benzolringe im Diphenyl aufgespalten ist.

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Je dois remercier mon Collègue français, le ProfesseurComsa de la Faculté de Médecine à Homburg/Saar, de la traduction de mon texte allemand en français.     

Essais et observations sur la valeur des verts de Carthame comme fourrage et ensilage

Summary Safflower is usually considered to be a potential oil crop throughout the world. In Israel it is a winter crop, whose grain is utilized for the extraction of oil for industrial purposes (manufacture of oil and margarine).In this preliminary report results are given of some trials which have shown that, from a nutritional point of view, the green plant has a feed value when compared to other forage crops, if comparison is made on a dry weight basis. It was also found that safflower plants attaining a high level of yield and dry matter serve as very good material for making a pleasant smelling silage rich in food nutrients. The few actual feeding tests carried out showed that the succulent safflower plant is very palatable to livestock and is readily eaten by sheep and cows, while the silage is greedily consumed by calves. The effect of rate of seeding on the plant composition during growth, time of sowing is also considered.

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Zusammenfassung Der Saflor wird gewöhnlich in der ganzen Welt als Ölfrucht betrachtet. In Israel wird er während des Winters kultiviert und seine Samen zur Extraktion von Öl für industrielle Zwecke verwendet (Herstellung von Pflanzenölen und Margarine).In diesem vorläufigen Bericht werden Ergebnisse einiger Versuche bekanntgegeben, die in ernährungsphysiologischer Hinsicht gezeigt haben, daß die grüne Pflanze — verglichen mit anderen Futterpflanzen und bezogen auf Trockengewichte — einen Futterwert aufweist. Auch wurde festgestellt, daß Saflorpflanzen einen hohen Ertrag erreichen und die Trockenmasse ein gutes Material zur Herstellung einer angenehm riechenden und wertstoffreichen Silage liefert. Die wenigen vorliegenden Fütterungsversuche ergaben, daß die sukkulente Saflorpflanze für Vieh sehr schmackhaft ist, bereitwillig von Kühen und Schafen gefressen wird, während Jungtiere begierig die Silage annehmen. Schließlich wird dem Einfluß der Saatmenge auf die chemische Zusammensetzung der Pflanzen während der Wachstumszeit sowie dem Aussaatzeitpunkt Beachtung geschenkt.

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A contribution from the National Institute of Agriculture and Agricultural University, Rehovot, No. 895 F.     

Influence des ultra-sons sur l'augmentation des taux de vanilline et d'oleoresines dans les gousses de vanille

Summary In view of the increased importance, which Vanilla consumption is taking in the food industry to-day, an increase of the Vanillin percentage in Vanilla pods, by means of Ultra-Sonic treatments, was tried.It was therefore of particular interest to develop a new method which could increase the Vanillin and Oleoresins percentage, as treatments with X-rays, Ultra-violett, Infrat-red, yperite etc. did not give the expected results.In our previous publications we have shown that enzymes can be activated by Ultra-Sonic treatments (see alpha-amylase and cellulase), and as on the other hand the formation of Vanillin and Oleoresins are due to biochemical (enzymatic) processes, it was logical to try to induce an increase of these constituents by means of this new method.Our hypothesis has proved to be right and after several years of intensive research, we were able to prove that Ultra-Sonics of certain specific frequencies and intensities, are able to induce an increase of 25–35% of Vanillin and 10–15% of the Oleoresins in the treated Vanilla pods.     

Chromatographie des dérivés cinnamiques du vin

Résumé Les auteurs décrivent une méthode bi-dimensionnelle de chromatographie sur papier pour l'identification d'acide caféique, d'acide férulique, d'acide chlorogénique, d'acide para-cumarylquinique et d'acide féruloquinique dans le vin.Une détermination approximative d'acide chlorogénique et d'acide caféique a été réalisée. Ces agents rendent au vin des propriétés biologiques intéressantes, concernant son activité cholérétique et hypocholéstérolique, s'opposant à une surcharge de l'organisme en choléstérol.

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Summary By two-dimensional paper chromatography the authors have shown the presence in wine of caffeic, ferulic, chlorogenic, paracoumarylquinic and feruloylquinic acids. An approximate quantitative determination of chlorogenic and caffeic acids has been attempted. These components confer to the wine various interesting biological properties, related to their choleretic and hypocholesterolemient activity.

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Zusammenfassung Mittels bi-dimensionneller Papierchromatographie haben die Autoren im Wein die Anwesenheit von Kaffee-, Ferula-, Chlorogen-, Paracumarulchinin-, und Feruloylchininsäure dargelegt. Eine annähernde quantitative Bestimmung von Chlorogen- und Kaffeesäure wurde unternommen. Diese Bestandteile verschaffen dem Wein verschiedene interressante biologische Eigenschaften, in Verbindung mit ihrer choleretischen und hypocholesterierenden Aktivität.

     

Age physiologique du plant de pomme de terre. Incidence sur la germination et répercussions sur le comportement des plantes

Résumé L'age physiologique d'un tubercule de pomme de terre est la conséquence d'une évolution physiologique qui se déroule selon une séquence bien définie au sein des tissus de réserve et qui s'exprime d'une manière visible par l'influence qu'elle exerce à tout instant sur les processus de croissance et de tubérisation des germes. L'influence de l'age physiologique des plants est particulièrement nette sur les caractères des plantes qui sont l'expression directe de processus de germination: rapidité et régularité de levée, manifestation du boulage, nombre de tiges et de tubercules par plante, etc. Elle est beaucoup plus variable sur les caractères complexes de la vigueur et du rendement.

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Summary The conception of the physiological age of a potato tuber is that of the consequences of physiological evolution which proceeds within its storage tissues according to a well defined sequence and which expresses itself in a visible way by the influence that it exerts throughout the process of growth and on the tuberization of the sprouts (Madec, 1958; Pérennec & Madec, 1960). The physiological age of a tuber at any given moment of its life depends on its chronological age, measured from the date of its formation on the mother plant and on the temperature conditions to which it has been subjected during growth and storage. The rate of ageing increases with temperature. The purpose of the work described here was to demonstrate how the influence exercised by the physiological age of the seed tuber at the time of sprouting reacts on the growth and yield of the daughter plant. Eight lots of seed tubers of cv. Bintje, of different physiological age, were studied in a series of experiments carried out during the years 1970 to 1974. The planting material was obtained from crops planted at successive dates during the previous year: I April (P1), 28 April (P2), 28 May (P3), and 28 July (P4). At lifting, each lot was divided into two parts. The first (F) was held at 2–4°C, the second (S) at 16–18 °C from 15 December to 14 March. On that date, following desprouting of Series (S), a part of each lot was placed at 15 °C in the dark to sprout, the other part, after pre-sprouting, was planted in the field. The differences in the physiological age of the eight lots of seed tubers was clear when they sprouted. The rapidity of elongation of the sprouts showed an initial increase related to age followed by a slowing down, reaching zero at the time the shoots were ready to tuberize. Simultaneously, the ageing tuber produced a large number of sprouts which began to branch earlier, thus manifesting progressive diminution of apical dominance (Table 1, Figs 1 and 2). The effects of the physiological age of the seed tubers on the plant are particularly clear with regard to those characters which are a direct expression of the sprouting process; rate and regularity of emergence coupled with the rate of elongation of the shoots, the presence of swellings when the sprout is prepared to tuberize, the number of stems and tubers and their distribution in size grades in relation to the number of shoots per plant (Tables 1, 2 and 3). There is greater variation in the more complex characters such as vigour and yield (Tables 2 and 3), which are greatly dependent on climatic conditions during vegetative growth. In individual cases, the primary effect of the mother tuber on sprouting can be accentuated, minimized or even masked when it comes to the vigour and yield of the daughter plants. It is, therefore, possible to conceive, in the case of these two characters, a great diversity in the behaviour of the plants resulting from the physiological age of the seed tubers used, according to the locality and date of planting, the incidence of favourable or unfavourable climatic conditions, the varieties etc.

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Zusammenfassung Der Begriff, physiologisches Alter einer Kartoffelknolle, ist eine Folge physiologischer Entwicklung, welche in einer ganz bestimmten Sequenz im Speichergewebe vor sich geht. Durch das Wachstum und Kn?llchenbildung der Keime wird der Verlauf des physiologischen Alters ?usserlich ersichtlich (Madec, 1958; Pérennec & Madec, 1960). Das physiologische Alter einer Knolle ist zu einem bestimmten Zeitpunkt von seinem chronologischen Alter, gemessen von der Knollenbildung auf der Mutterpflanze an, abh?ngig, sowie von den Wachstumsbedingungen und der Lagertemperaturen. Die Alterung der Knollen geht umso rascher als die Temperatur ansteigt. Das Ziel dieser Arbeit war darzustellen, wie sich das physiologische Alter der Knolle auf das Wachstum und die Ertragsbildung der Tochterpflanze auswirkt. W?hrend fünf Jahren, von 1970–1974, wurden in einer Serie von Versuchen 8 Posten Saatgut der Sorte Bintje mitunterschiedlichem physiologischem Alter untersucht. Die Saatknollen wurden durch gestaffelte Pflanzungen des Vorjahres erhalten: 1. April (P1), 28. April (P2), 28. Mai (P3) und 28. Juli (P4). Bei der Ernte wurde jeder Posten in zwei Partien geteilt; die erste Partie (F) wurde bei 2 4°C gelagert und die zweite bei 16–18 °C vom 15. Dezember bis 14. M?rz. Nach einer Abkeimung am 14. M?rz der Serie (S) wurde eine Partie von jedem Posten in der Dunkelheit zur Keimung bei 15 °C gelagert, die andere Partie wurde nach Vorkeimung im Feld ausgepflanzt. Der Unterschied der physiologischen Alterung der 8 Posten Saatgut wurde sehr gut ersichtlich mit der Keimung der Knollen. Die Wachstumsgeschwindigkeit der Keime steigt zuerst an mit der Alterung und nimmt dann ab, bis Null, wenn die Keime Knollen bilden k?nnen. Zur selben Zeit wachsen auf der alternden Knolle eine gr?ssere Anzahl Keime, welche sich stark verzweigen, dies entspricht einer Abschw?chung der apikalen Dominanz. (Tabelle 1, Abb. 1 und 2). Der Einfluss des physiologischen Alters der Knolle auf die Pflanze wird am besten durch den Verlauf des Keimwachstums ersichtlich; die Auflaufzeit-und Regelm?ssigkeit h?ngt von der Wachstumsgeschwindigkeit der Keime ab. Das Auftreten von Kn?llchensucht, wenn der Keim alt ist, die Anzahl Stengel, Knollen und die Verteilung der Knollengr?sse ist abh?ngig von der Keimzahl pro Saatknolle (Abb. 1, 2 und 3). Der Einfluss des physiologischen Alters der Knolle ist weniger deutlich bei komplexen Faktoren wie Wüchsigkeit und Ertrag, welche sehr von den Witterungsbedingungen w?hrend des Wachstums abh?ngig sind (Abb. 2 und 3). Je nach Fall kann der prim?re Einfluss der Mutterknolle auf die Keimung betont, vermindert oder sogar maskiert werden, speziell was die Wüchsigkeit und der Ertrag der Tochterknollen betrifft. Es scheint somit, dass für diese beiden genannten Merkmale ein grosser Unterschied im Verhalten der Pflanzen angenommen werden muss, je nach physiologischem Alter der Saatknollen, Ort und Zeitpunkt der Pflanzung, Einfluss des Klimas, günstig oder ungünstig, Sorten usw.

     

L'utilisation de la chromatographie sur couches minces pour separer quantitativement les flavonols des anthocyanes des extraits et jus de raisin et des vins en vue du dosage de ces colorants jaunes

Résumé Les recherches sur les flavonols du raisin et du vin prennent une importance croissante, notamment à cause des propriétés vitaminiques et physiologiques de ces polyphénols et de l'intérêt que présentent ces colorants jaunes en génétique.Dans le cas du raisin, on constate qu'il n'existait pas jusque-là de méthode adéquate d'isolement quantitatif des flavonols. Or la chromatographie sur couche mince permet une séparation fine des divers polyphénols, et en particulier des flavonols, sans qu'un traitement préalable du vin soit nécessaire. Cette technique donne en outre la possibilité de récupérer facilement ces flavonols en vue de leur dosage.Au cours des recherches entreprises dans cette direction à la Station Centrale de Technologie des Produits Végétaux (I.N.R.A.) de Narbonne, on a d'abord sélectionné la cellulose comme support et deux solvants de développement. Le mode opératoire établi, fondé sur la chromatographie bidimensionnelle conduit simultanément à la séparation entre flavonols et anthocyanes et à la séparation individuelle des divers flavonols, glucosides et aglucones, qu'il est ainsi possible d'identifier et de doser après grattage et élution.Le dosage global est fondé sur la mesure, à 430 mµ, de l'exaltation de la densité optique due à la formation d'un complexe avec l'aluminium. Dans les conditons précisées, l'exaltation est proportionnelle au nombre de molécule-grammes de flavonols par litre et indépendante de la nature des flavonols. La rutine est prise comme étalon. La précision des résultats est de ± 4 mg/l.Le choix de la chromatographie sur couche mince de cellulose permet l'utilisation de cette méthode dans le cas des moûts, des jus et des extraits.L'application de cette méthode montre que les vins rouges peuvent contenir de l'ordre de 100 mg de ces colorants jaunes par litre (vendange éraflée). Les vins blancs sont très pauvres (de l'ordre de 5 mg/l), sauf s'ils proviennent d'une vinification avec macération des pellicules auquel cas ils sont aussi riches en flavonols que les vins rouges.

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Summary Investigations on flavonols of grapes and wine are growing in importance, especially because of the vitaminic and physiological properties of these polyphenols and of the interest presented by these coloured compounds in genetics.In the case of grapes one may see that up to now there was no adequate method for the quantitative isolation of flavonols. Now thin-layer chromatography makes possible a precise separation of the various polyphenols, and particularly of flavonols without any previous treatment of the wine being necessary. This technique gives also the possibility of easily recovering these flavonols in view of their quantitative determination.In the course of investigations undertaken in this direction by the Central station of Technology of vegetable products (INRA) of Narbonne, cellulose as support and two developing solvents were selected. The operatory procedure, such as it was established, based on bi-dimensional chromatography, leads simultaneously to a separation between flavonols and anthocyans, and to the individual separation of the various flavonols, glucosides, and aglucones, that it is possible to identify and determine quantitatively after scraping and elution.The overall quantitative determination is based on the measuring at 430 mµ, of the increase of the optical density due to the formation of a complex with aluminium. In the conditions of the experiment this increase is proportional to the number of molecule-grams of flavonols. Rutin is taken for standard. The precision of the results is ± 4 mg/l.The choise of chromatography on thin-layer of cellulose enables this method to be used in the case of musts, juices, and extracts.The application of this method shows that red wines can contain as much as 100 mg of those yellow-coloured substances per liter (after destemming). White wines are very poor (of about 5 mg/l) except when they are macerated with their skins during the elaboration of the wine, in which case they are as rich in flavonols as are the red wines.

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Zusammenfassung Die Forschungen über die Flavonole der Rebe und des Weines werden immer bedeutender, besonders wegen der physiologischen Eigenschaften dieser Polyphenole, auch als Vitamin, und dem genetischen Interesse dieser gelben Farbstoffe. Im Fall der Rebe stellt man fest, daß es bisher keine entsprechende Methode zur quantitativen Isolierung der Flavonole gab. Die DC erlaubt aber eine feine Scheidung der verschiedenen Polyphenole, besonders der Flavonole, ohne vorherige Behandlung des Weines. Diese Technik gibt übrigens die Möglichkeit, diese Flavonole zur Bestimmung leicht zu gewinnen. Im Verlauf der Forschungen in dieser Richtung hat man in der Zentrale für Technologie der Pflanzenprodukte (I.N.R.A.) von Narbonne die Cellulose als Träger und zwei Entwicklungslösungsmittel gewählt. Dieser Arbeitsvorgang, die zweidimensionale Chromatographie, führt sowohl zur Trennung der Flavonole und Anthocyane, als auch zur individuellen Trennung der verschiedenen Flavonole, Glucoside und Aglucone, die auf diese Weise identifiziert und nach dem Abkratzen und Eluieren bestimmt werden können. Die quantitative Bestimmung basiert auf der Messung bei 430 mµ, der Erhöhung der optischen Dichte mittels Bildung eines Komplexes mit Aluminium. Unter den Versuchsbedingungen steht diese Erhöhung im Verhältnis zur Zahl der Gramm-Mole der Flavonole je Liter und ist unabhängig von der Natur der Flavonole. Das Rutin dient zur Eichung. Die Genauigkeit der Ergebnisse ist ± 4 mg/l. Die Wahl der DC auf Cellulose erlaubt die Verwendung dieser Methode für Moste, Säfte und Extrakte. Die Anwendung dieser Methode zeigt, daß die Rotweine diese gelben Farbstoffe in der Größenordnung von 100 mg/l enthalten können (Weinlese nach Abbeeren). Die Weißweine sind sehr arm (in der Größenordnung von 5 mg/l), außer wenn bei der Weinbereitung der Most lange auf der Maische steht. Im letzten Fall sind sie so reich an Flavonolen wie die Rotweine.

     

La CCM dans l'etude des isomeres de position et geometriques des acides gras mono- et polyinsatures

Résumé On a employé la chromatographie en couche mince de gel de silice G imprégné de nitrate d'argent et celle imprégné de nitrate d'argent ammoniacal pour séparer les isomères géométriques des acides avec dix-huit atomes de carbone, respectivement mono- et polyinsaturés.L'emploi de la chromatographie en couche mince, comme technique de séparation, en coordination avec la chromatographie en phase gazeuse, la spectrophotométrie U.V. et I.R. nous a permis l'identification des différents isomères.Avec cette méthode on a pu aussi déterminer les isomères géométriques et de position de certains acids polyinsaturés conjugués, c'est à dire le 9, 11- et le 10, 12- octadécadiénoïques.Les méthodes que nous avons décrites peuvent être aussi appliquées pour révéler les isomères géométriques et de position des lipides alimentaires.

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Summary Thin layer chromatography on Silica Gel G and silver nitrate, and silver nitrate and ammonium hydroxide was used in the separation of geometrical isomers of C₁₈ fatty acids mono- and polyunsaturated, respectively.The use of thin layer chromatography, as a preparative technique, in coordination with gas chromatography, infrared and ultraviolet spectrophotometry allowed the identification of each isomer.By this method geometrical and positional isomers of some conjugated polyunsaturated acids like 9,11- and 10,12-octadecadienoic, were also determined.The method described can be applied to the study of geometrical and positional isomers in food lipids.

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Zusammenfassung Die DC auf AgNO₃-Kieselgel G und [Ag(NH₃)₂] NO₃-Kieselgel G wurde für die Trennung der geometrischen Isomeren der mono — und polyungesättigten C₁₈ — Fettsäuren verwendet.Die Anwendung der Dünnschicht-Chromatographie, als Vorbereitungstechnik, hat zusammen mit der Gaschromatographie und mit der I.R. — und U.V. — Spektrophotometrie die Identifizierung von verschiedenen Isomeren erlaubt.Die Stellungs- und die geometrischen Isomere von einigen konjugierten poly-ungesättigten Fettsäuren (wie 9,11- und 10,12-C₁₈-di-ungesättigten Fettsäuren) sind durch diese Methode bestimmt worden.Die beschriebenen Methoden können zur Erkennung der geometrischen und Stellungs-Isomere, die in den Fetten der Nährstoffe enthalten sind, angewandt werden.

     

Possibilites d'application en analyse bromatologique de la chromatographie sur couches minces d'echangeurs d'ions et sur couches multiples juxtaposees

Résumé En analyse bromatologique, la chromatographie sur couches minces classiques a été appliquée jusqu'alors essentiellement à des séparations de composés organiques. Il n'est pas doûteux cependant, que l'utilisation de couches minces d'échangeurs d'ions puisse élargir encore le domaine d'application de cette méthode, tout particulièrement en expertise alimentaire. La séparation et la caractérisation de nombreux ions minéraux toxiques ou frauduleux, tels que Pb, Hg, Cu, As, SCN, Fe (CN)₆ ..., peuvent être réalisées à l'aide de cette méthode, couplée éventuellement avec les procédés classiques de minéralisation et d'extraction par solvants ou avec des méthodes plus modernes, telles que la radioactivation.La chromatographie sur couches multiples juxtaposées de nature différente doit permettre de réaliser en une seule opération des analyses plus complètes de mélanges complexes de composés minéraux et organiques, en mettant en jeu successivement des phénomènes de partage, d'adsorption ou d'échange d'ions.

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Summary In bromatological analysis, classical thin layer chromatography has been applied up to now essentially for the separation of organic compounds. It cannot be doubted though, that the use of thin layers of ion exchangers may broaden the field of application of this method, particularly in food evaluation. The isolation and characterization of numerous toxic or fraudulent mineral ions such as Pb, Hg, Cu, As, SCN, Fe(CN)₆ ... can be achieved by this method, eventually coupled with the classical methods of mineralisation or solvent extraction, or with more modern methods such as radio activation.Chromatography on multiple layers of differing nature, set side by side, must give the possibility of achieving in one operation more complete analysis of complex mixtures of mineral and organic compounds by bringing into play, successively, the phenomena of partition, adsorption, and ion exchange.

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Zusammenfassung Für Lebensmittelanalysen wurde die klassische DC bisher hauptsächlich zur Trennung von organischen Stoffen benutzt. Zweifellos kann der Anwendungsbereich durch Einführung von dünnen Schichten aus Ionenaustauschern noch erweitert werden, insbesondere für Lebensmittelbegutachtungen. Die Trennung und Identifizierung von zahlreichen giftigen oder gefälschten mineralischen Ionen, wie Pb, Hg, Cu, Ag, SCN, Fe(CN)₆ ..., können mit dieser Methode erreicht werden, die nötigenfalls mit den klassischen Verfahren der Mineralisierung und der Extraktion durch Lösungsmittel oder mit modernsten Methoden wie Radioaktivierung gekuppelt wird.Die Chromatographie mit nebeneinander liegenden Schichten ist anders geartet und erlaubt in einem einzigen Arbeitsgang vollständigere Analysen komplexer Gemische mineralischer oder organischer Art. Hier werden nacheinander Teilungs-, Adsorptions- oder Ionenaustauschphänomene ausgenützt.