秦川牛瘤胃微生物DNA提取方法的比较试验

[目的]本试验的目的是优化秦川牛瘤胃微生物DNA提取方法。[方法]针对秦川牛特有的生理及生物学特性,采取珠磨法、反复冻融法、液氮研磨法、超声波法提取微生物DNA,并获得一种提取秦川牛瘤胃胃微生物DNA的最佳方法。[结果]珠磨法、反复冻融法提取的DNA片段较完整,DNA含量较高。[结论]珠磨法和反复冻融法是较科学的提取方法。     

PK-15细胞膜蛋白提取方法的比较及猪瘟病毒膜表面受体的初步鉴定

以猪肾细胞(PK-15)为材料,比较真核细胞膜蛋白提取试剂盒、超声破碎法、反复冻融法、低渗裂解法4种不同方法对PK-15细胞膜蛋白提取的影响,结果表明,通过超声破碎的膜制备方法提取的PK-15细胞膜蛋白较理想。用此方法提取PK-15细胞膜蛋白,经SDS-PAGE后转印NC膜,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定CSFV病毒的细胞受体。结果发现,PK-15细胞膜上有3种能与CSFV结合的蛋白质,分子量在90～100 ku之间,暗示这些蛋白可能是CSFV受体或者受体复合物。     

一种快速高效制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法

家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性和所得总蛋白的差异性,并对提取蛋白进行双向电泳试验。结果表明:使用玻璃珠破碎法对微孢子虫孢子壁的破碎率可达到90%以上,基因组DNA得率约为7.65 fg/粒,总蛋白得率约为788.3 fg/粒,均显著高于常用的发芽法和液氮冻融研磨法的得率。双向电泳结果显示玻璃珠破碎法能有效提取家蚕微孢子虫总蛋白,经考马斯亮蓝染色可检测到约350个蛋白点,蛋白信息丰富,可进一步用于质谱分析。     

多浪羊不同时期卵巢蛋白提取效果研究

蛋白质的功能与活性决定了动物机体组织器官生理功能的发挥,同一组织不同生理期蛋白表达及功能有差异,组织高质量蛋白的提取是功能蛋白研究的基础。该试验以多浪羊发情期、发情间期和妊娠期卵巢为材料,利用超声破碎法分别提取蛋白,通过标准曲线及SDS-PAGE检测蛋白完整性。结果表明,6个样品总蛋白在25～200 kDa分子量范围内得到有效分离,而且蛋白条带清晰、完整,蛋白无降解。其中60 kDa左右LLY-4(发情间期)和LLY-5(妊娠期)与其他4例样本在该位置的蛋白条带丰度有些微差异,但差异不显著。根据判定标准:蛋白条带清晰、完整、均一,蛋白无降解,蛋白总量≥400μg,质检合格,均为A类,可以满足后续iTRAQ试验进行蛋白组学的研究。     

桑叶蛋白的超声分级提取及体外抗氧化活性分析

为了探究超声处理不同溶剂分级提取所得到的四种桑叶蛋白（清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白）的含量及其抗氧化活性的变化，以桑叶粉为原料，依次使用水、氯化钠、乙醇、氢氧化钠四种溶剂分级提取，并以未超声处理作为对照，研究超声对四种蛋白质提取率及抗氧化活性的影响。结果显示：四种桑叶蛋白的含量为清蛋白>谷蛋白>球蛋白>醇溶蛋白，超声后清蛋白及球蛋白的含量有明显提高，分别为2.67、0.47 mg/mL；在五种抗氧化指标中，羟基自由基（·OH）清除率较其他四种抗氧化指标提高更为显著，分别为91.15%、28.20%、3.91%、46.79%。结果表明：在超声分级提取的四种桑叶蛋白中，清蛋白与球蛋白的蛋白质含量及五种抗氧化指标均明显高于未超声组，而醇溶蛋白与谷蛋白的蛋白质含量及五种抗氧化指标则低于未超声组。因此，在超声逐级提取桑叶蛋白的过程中，超声处理可明显增加清蛋白与球蛋白的提取率及抗氧化效果，但对醇溶蛋白及谷蛋白的提取并无积极效果。     

荷斯坦奶牛瘤胃微生物脲酶的分离与鉴定

本研究旨在从荷斯坦奶牛瘤胃中分离活性脲酶。从奶牛瘤胃中收集瘤胃内容物,通过离心和超声破碎的方法得到不含菌体细胞的瘤胃液(CFRF)和瘤胃菌体蛋白液(RCP),利用85%硫酸铵盐析,并透析后,用HiTrap Capto Q离子交换层析柱纯化脲酶。将纯化后的脲酶用活性PAGE分离,并利用改良的Fishbein染色法,确定脲酶条带位置,切胶,经胰蛋白酶消化后,用LC-MS/MS分析,并用SEQUEST软件在NCBI数据库搜索与质谱信号相匹配的肽段和蛋白质。结果表明从CFRF和RCP中分离出较高活性的脲酶,但经染色后只有RCP脲酶显示活性条带。经质谱分析,最终鉴定出了3种微生物来源脲酶,分别与嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、唾液链球菌(Streptococcus salivarius)和嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)相似。这说明绕过纯培养微生物,直接从瘤胃中分离脲酶,来研究其性质和来源是可行的,尤其适合对未培养微生物的研究。     

牛支原体膜蛋白6种提取方法的比较研究

为筛选最佳牛支原体(mycoplasma bovis,Mb)膜蛋白的提取工艺,本试验以牛支原体W70株为代表,分别比较了4种浓度的TritonX-100 、TritonX-114、TritonX-100和TritonX-114;3种浓度碘化钾(KI)复合提取;反复冻融和超声裂解等6种Mb膜蛋白提取工艺和参数.各方法所获膜蛋白经SDS-PAGE和Bradford定量分析表明:不同方法的提取物中蛋白多肽和蛋白浓度各异;其中以3％ TritonX-114和0.4％TritonX-100结合0.6 MKI两法提取的蛋白条带清晰度较好,蛋白浓度及蛋白收集率较高,蛋白多肽条数24～28条,蛋白相对分子质量分别在170 000～12 200和167 000～11 400之间;超声裂解及反复冻融法提取效果一般;而1.8 MKI法效果最差.研究发现3％TritonX-114或0.4 ％TritonX-100结合0.6 MKI是Mb膜蛋白较优的提取方法.     

三种方法纯化相思子毒素单抗的比较

采用不同的方法纯化相思子毒素单抗,寻求一种效果好、操作简便的纯化方法。采用硫酸铵沉淀法、辛酸-硫酸铵法和硫酸铵-蛋白A亲和层析法三种方法分离纯化相思子毒素单抗,并采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、BCA蛋白检测试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)对纯化产物进行相对分子质量、浓度、纯度、回收率及免疫活性的鉴定。结果表明,纯化后单抗的回收率以硫酸铵沉淀法及辛酸-硫酸铵法较高,硫酸铵-蛋白A亲和层析法较低;产物纯度以硫酸铵-蛋白A亲和层析法和辛酸-硫酸铵法较高,硫酸铵沉淀法较差;不同方法纯化后的单抗活性未见降低。     

黄芪多糖提取工艺研究进展

为进一步了解和研究黄芪多糖不同提取工艺的优缺点,将近年来有关黄芪多糖的溶剂法、酶解法、物理法相关提取工艺的研究报道进行综述。经比较后发现,基于物理原理的微波、超声波辅助提取法、高压脉冲法、组织破碎提取法等新技术,较传统热水浸提法、碱提法、碱醇提取法和酶解法在提取率、提取时间、纯度、能源消耗等方面有较大优势,并且发现不同方法的协同提取也能明显提高黄芪多糖的提取率。虽然目前这些技术没有被广泛的采用,但是随着科技的发展,提取工艺成本的下降,应用于黄芪多糖的高效、节能的提取技术会逐步成为主流。     

生物碱提取方法及作用研究进展

<正>1生物碱的提取方法1.1超声波提取超声波提取法一般作为生物碱的辅助提取法,它的3个理论依据是超声波热学机理、超声波机械机制和空化作用。在超声场中,物料吸收声能,温度升高,有效成分溶解加速,超声空化产生的瞬间高压造成生物细胞壁及整个生物体破裂,同时,超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散及溶解。被浸提的物质在被破碎瞬间,生物活性保持不变,同时,能提高破碎速度和提取率。王忠华等分别采用超声波辅助提取法和摇床振荡(浸     

去除单细胞蛋白中核酸方法的研究

酵母单细胞蛋白和甲烷单细胞蛋白在饲料中应用广泛,解决了我国饲料应用不足的问题。单细胞蛋白中含有丰富的营养物质,但其中核酸含量过高,影响动物的健康,需要将其去除。去除单细胞蛋白有多种方法,文章介绍和归纳目前文献报道中从单细胞蛋白中除去和提取核酸的方法,包括超声波破碎法、菌体自溶法、浓盐法、浓盐与超声波破碎结合法、高压脉冲电场破壁法。前人使用方法的核酸提取量分别为46.47%、50.20%、78.90%、45.19%、25.40%。对这些方法进行总结与评估,希望对去除单细胞蛋白中核酸的研究有所帮助,为单细胞蛋白在我国饲料行业更好的发展提供参考。     

5种粗纤维饲料底物对瘤胃真菌纤维素酶的影响

本试验通过在体外模拟瘤胃内环境,利用取自崂山奶山羊瘤胃内的混合厌氧真菌为菌种,分别以花生蔓、地瓜蔓、豆荚、玉米叶和滤纸为培养底物,以羧甲基纤维素酶、木聚糖酶、β-葡萄糖苷酶酶活为监测指标,研究不同纤维素含量的发酵底物对混合瘤胃厌氧真菌产纤维素酶的影响。结果表明:木聚糖酶在豆荚底物组培养72 h酶活达到最高,显著高于其他各底物组(P<0.05);羧甲基纤维素酶活性和β-葡萄糖苷酶活性的最高点均出现在培养72 h的花生蔓底物组,酶活比地瓜蔓组分别高25.00%、14.67%(P<0.05);滤纸组3种纤维素酶酶活均显著低于其余4种底物组(P<0.05)。发酵120 h后,花生蔓、地瓜蔓和玉米叶组的干物质消失率均达到37%,显著高于豆荚底物组和滤纸底物组(P<0.05)。综上,底物中木质素含量对木聚糖酶、纤维素含量对羧甲基纤维素酶和β-葡萄糖苷酶均有一定诱导作用;选择豆荚做发酵底物可产生较高活性的木聚糖酶,选择花生蔓则可以产生较高活性的羧甲基纤维素酶和β-葡萄糖苷酶;底物干物质消失率对3种酶的活性高低影响不大。     

三种预处理方法对多年生王草的酶解产糖效果研究

以高产多年生牧草王草为材料,比较常温稀碱法、微波辅助稀碱法、超声辅助稀碱法三种预处理方法对王草的酶解产糖效果的影响。结果表明:常温稀碱法处理的条件为NaOH浓度3%(w/v),固液比1∶15(w/v),处理时间36h,王草的酶解还原糖产量是406.98mg/g,超声辅助法糖产量最高可比常温稀碱法提高24.65%,微波辅助法最高可提高17.95%。最优的预处理方法为超声辅助稀碱法1,还原糖产量为507.31mg/g。     

肉牛日粮中添加活性干酵母对瘤胃蛋白降解及利用的影响

本试验旨在研究饲料添加活性干酵母对秦川牛肉用新品系(以下简称"秦川肉牛")饲料蛋白降解和瘤胃氨态氮、菌体蛋白的影响。试验以3头装有永久性瘤胃瘘管的秦川肉牛为试验动物,饲喂相同的基础日粮,试验共分三期,每期30天,每期三头牛分别采用三种酵母添加水平(0、30、60g/d),间隔5d调整期。采用尼龙袋法分别测定四种饲料(苜蓿干草、豆粕、菜粕、棉粕)的粗蛋白(CP)在瘤胃内动态降解率的变化及测定瘤胃内氨态氮浓度、菌体蛋白浓度和挥发性脂肪酸发酵参数。结果表明:活性干酵母的添加对7种饲料的CP降解速率有不同程度的提高;活性干酵母具有降低氨态氮浓度(P0.05),增加总挥发性脂肪酸的浓度(P0.05),提高菌体蛋白浓度(P0.05)的作用。综上,添加活性干酵母可显著提高秦川肉牛饲料CP的降解速率,不同饲料的降解率变化水平与其特性有关;而且具有降低瘤胃氨态氮浓度、提高总挥发酸浓度和菌体蛋白浓度,提高饲料中瘤胃降解蛋白的利用率的作用。     

狼毒大戟的不同提取工艺比较与成分分析

采用不同提取液、不同提取液倍数、不同提取方法对狼毒大戟进行了提取率的研究，同时对不同提取液及提取方法所得提取物质成分进行了分析。结果表明：以甲醇作为提取溶液采用6倍常温浸泡后索氏提取然后再常温浸泡的提取方法提取率最高，以95％乙醇作为提取液采用同样的提取方法其提取率次之；以95％乙醇、石油醚、乙酸乙酯作为提取液采用6倍常温浸泡后索氏提取再常温浸泡的提取方法较其他方法提取率高。甲醇在该方法下不仅提取率最高，而且其提取物所含成分也比较多，乙醇次之。由此可以得出，对于狼毒大戟的粗提取．采用甲醇或者乙醇作为提取溶液比较合适，其最佳提取方法为6倍常温浸泡后索氏提取然后再常温浸泡的提取方法。     

连续培养瘤胃模拟发酵的工作参数设置研究进展

体外培养法作为反刍动物营养学研究的重要方法,主要有批次培养法和连续培养法两种。由于连续培养法能够更好地模拟瘤胃内发酵情况,其应用也更为广泛。但连续培养瘤胃模拟装置的主要运行参数多,如温度、pH、稀释率、缓冲液与瘤胃液接种比、搅拌速率与方式等,且不同运行参数设置以及参数的组合对试验结果影响较大,因此作者在总结前人研究结果的基础上,就不同工作参数对连续培养瘤胃模拟发酵过程中挥发性脂肪酸、干物质消失率、pH、酶活、原虫数量、微生物蛋白等指标的影响进行了综述。     

响应面优化双酶解提取米糠蛋白工艺的优化

为了研究酶解法提取米糠蛋白的工艺,试验采用Box-Behnken试验设计和响应面法,以脱脂米糠为原料,使用碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解提取米糠蛋白,研究了不同水解时间、液料比、p H值、温度、加酶总量、加酶比例对米糠蛋白提取率的影响。结果表明:当液料比为4∶1、加酶总量为0.75%、碱性蛋白酶与中性蛋白酶用量之比为2∶1时,经碱性蛋白酶在p H值为10、温度为45℃的条件下水解3 h,再用中性蛋白酶在p H值为6.5、温度为45℃条件下水解1 h,米糠蛋白的提取率最高可达84.63%。说明由响应面法优化得到的工艺参数比较准确,具有实用性。     

奶牛瘤胃微生物DNA提取法的研究与优化

试验通过对提取瘤胃微生物DNA常用的方法进行比较,优化出一种可以获得完整瘤胃微生物总DNA片段的方法,使其能进一步满足PCR的扩增要求以及后续的分子生物学研究。试验的瘤胃液样本取自3只装有瘘管的荷斯坦奶牛,将方法适当改进。结果表明:珠磨-CTAB法提取的总DNA片段长度大于20 kb,OD260/OD280在1.8以上,DNA的提取效果最稳定。同时对所提的DNA样本应用PCR方法进行了检测,成功扩增出长度分别为1 500 bp、1 000 bp左右的瘤胃细菌和古细菌的16S rDNA序列。结果证明了该方法所提取的瘤胃微生物DNA可以应用到后续的试验研究工作中。     

不同加工方式玉米的干物质和淀粉瘤胃降解率及过瘤胃淀粉含量的测定

为测定三种不同加工方式玉米的干物质及淀粉的瘤胃降解率并计算各自的过瘤胃淀粉含量,以3头安装有永久性瘤胃瘘管的利木赞×鲁西黄牛杂交阉牛为试验动物,采用尼龙袋法对常用的破碎玉米、膨化玉米、蒸汽压片玉米瘤胃降解率进行测定,并计算出三种不同加工方式玉米的过瘤胃淀粉含量.结果破碎玉米、膨化玉米和蒸汽压片玉米的干物质瘤胃有效降解率(%)依次为48.11、77.16和72.72,淀粉瘤胃有效降解率(%)依次为64.37、87.05和82.76;过胃淀粉含量(g/kg)依次为216.22、89.13和121.50.     

超声协同酶法提取紫花苜蓿多酚及其抗氧化性质

采用超声协同酶法提取紫花苜蓿多酚。以多酚提取量为指标,考察了液料比、加酶量、酶解时间、超声时间、超声温度及pH 6个因素对多酚提取效果的影响,并通过响应面法优化该提取工艺。同时探讨其抗氧化活性。结果表明,超声协同酶法提取紫花苜蓿多酚的最佳工艺条件为酶量4.9%、超声时间74 min、超声温度49℃,多酚提取量可达3.642mg·g~(-1)。此外,紫花苜蓿多酚具有较好的抗氧化活性,其清除DPPH和·OH自由基的半数抑制浓度IC50分别为10.78和19.28μg·mL~(-1)。