广东省猪多杀性巴氏杆菌血清学分型研究 Ⅱ、116株猪多杀性巴氏杆菌菌体型鉴定及血清型分布

本文概述了在荚膜群鉴定后,利用国际多杀性巴氏杆菌菌体型参考菌株,按照Namioka等人菌体分型方法对从我省各地分离的116株猪多杀性巴氏杆菌进行菌体型鉴定的过程。结果:02型10株、05型73株、06型5株、08型28株。依菌体型和荚膜群的鉴定结果,本省猪多杀性巴氏杆菌血清型为:5:A52株,占44.8％,8:A18株,占15.5％,6:B3株,占2.6％,2:D10株,占8.6％及5:21株、6:-2株,8:-10株。5:A在本省两个大城市和八个地区广泛存在,目前,它是引起本省猪肺疫的重要血清型。8:A在各地区分布仅次于5:A。对于过去引起流行性猪肺疫的6:B在多数地区还未分离到。据文献报道,一般2:D对猪致病力弱而不稳定。     

从病死猪肺脏分离的多杀巴氏杆菌血清型鉴定

虽然目前已普遍应用猪肺疫菌苗对猪群实施免疫接种,但猪肺疫仍是较为常发的一种急性传染病。引起本病的多杀巴氏杆菌的血清型(包括荚膜型和菌体型)复杂,型间交叉保护作用很弱或无。作者从口服接种过猪肺疫弱毒菌苗后又发病的猪肺脏分离到一株A:1(14、16)多杀巴氏杆菌,现将分离和血清型鉴定结果报道如下。     

禽霍乱CA等弱毒菌株对A型(群)猪肺疫的免疫研究

1981——1983年,我们以 Carter 和 Namioka 等人方法,对从本省各地分离,收集的116株猪杀性巴氏杆菌进行了血清型的研究,共得5∶A 和8∶A 血清型菌株70株、占已定群菌株的84.3%,证明这两个血清型在我省广泛存在,它们是引起我省猪肺疫的重要血清型。这两个血清型不但对猪,而且对鸡毒力都很强;它们与我国广泛使用的猪肺疫弱毒菌苗(血清型为6∶B)无交互免疫,但却与禽霍乱弱毒菌株有较好的交互免疫。因此,两年来,我们以我国常用禽霍乱弱毒菌株1号、2号、3号、4号和5号、(本课     

A型(群)猪肺疫CA株弱毒菌苗的研究

根据血清型相同而进行交互免疫试验,筛选出的 A 型(群)猪肺疫 CA 株弱毒菌苗,以3—4亿个活菌免疫猪,安全性为100%,保护率100%,免疫期达9.5个月。对猪的最小免疫剂量为2000万个活菌,最大安全剂量为200亿个活菌,在猪体连传6代毒力无返强现象。该菌株对5:A 和8:A 菌株均有良好的免疫力,共用15批菌苗在14个县、市免疫各类猪只33.7万头,表现安全,免疫力可靠。     

CA菌苗免疫猪对鸡的安全性试验

A 型(群)猪肺疫 CA 株弱毒菌苗从1984至1987年在广东省17个县(市)以及湖北省5个县(区)共注射各类猪只196.77万头,表现安全有效。其菌种是哈尔滨兽医研究所的禽霍乱731菌株。由于731菌苗注射鸡以后出现过不安全的事故,究竟用731菌株制造的CA 株弱毒菌苗注射猪以后会不会对鸡不安全呢?我们进行了本试验。结果表明,CA菌苗在猪体连传6代,毒力无返强现象。免疫猪经48小时后体内已分离不到本菌。敏感鸡与大剂量接种 CA 菌苗的猪同饮同食同居34～45天不发病,攻毒无保护。试验证明生产上用 CA 菌苗免疫猪,对鸡是安全的。     

A型猪肺疫、B型猪肺疫和猪丹毒联合菌苗的免疫试验

1984年我们用A型猪肺疫、B型猪肺疫及猪丹毒弱毒联合菌苗对小白鼠进行了免疫试验,现将结果报导如下。材料与方法一、小白鼠:来自广东省生物药厂,体重为18～21g。二、弱毒菌苗:由广东省生物药厂制造。 1.A型猪肺疫菌苗(CA苗),批号,CA-3。     

猪A型多杀性巴氏杆菌培养基改良的初步探讨

采用改良猪肺疫和常规猪肺疫疫苗用两种培养基培养猪A型多杀性巴氏杆菌,对其培养液进行活菌数测定。实验结果表明,运用改良猪肺疫培养基培养,小批量与反应罐试验测得活菌数分别可达1.3×109～1.7×109CFU/mL、6.8×108～7.5×109CFU/mL;运用常规猪肺疫培养基培养,小批量与反应罐试验测得活菌数分别可达8.0×108～1.0×109CFU/mL、3.5×109～3.7×109CFU/mL,可选择改良猪肺疫培养基替代常规猪肺疫培养基培养,用于制备A型猪多杀性巴氏杆菌病疫苗。     

优选法在猪三联苗效力试验研究中的初步应用

根据《猪肺疫氢氧化铝菌苗制造及检验规程》的规定,对猪肺疫菌苗效力检验时,每次攻毒,对照猪3头全部死亡,免疫猪保护4/5以上时,则该批试验菌苗认为效力合格;对照猪死亡2/3时,则免疫猪要求全部保护,方认为效力合格;如果对照猪仅死亡1头(1/3),或不死亡(0/3),则这次试验算为失败。     

禽多杀性巴氏杆菌菌影活体免疫效果评价

本试验旨在评价化学法制备禽多杀性巴氏杆菌菌影疫苗的活体免疫效果。80只12周龄健康的海兰灰母鸡被随机分为4组:A组(未免疫)、B组(口服免疫)、C组(皮下注射免疫)和D组(静脉注射免疫)。结果显示,相比于未免疫组(A组),菌影免疫组(B、C组和D组)显著提高了蛋鸡IgG抗体水平、CD4~+和CD8~+百分比和血清抗菌力,并且显著降低攻毒后蛋鸡脏器中的病原菌负载量和死亡率(P0.05)。表明鸡只免疫化学法制备禽多杀性巴氏杆菌菌影疫苗能够增强体液免疫和细胞免疫水平,从而保护鸡只免受多杀性巴氏杆菌感染。     

牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选及鉴定

为了筛选生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)灭活疫苗菌株,本试验选取6株来自不同地区致犊牛肺炎死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌分离株,测定了培养基生长曲线、小鼠毒力、菌体脂多糖(LPS)含量及各菌株灭活菌苗免疫小鼠和家兔后的抗体效价,并进行了攻毒保护试验。结果显示,分离株Pm2、Pm3、Pm5生长速度较快、毒力较强、LPS含量较多,均含有与毒力和免疫相关的ptfA和fimA基因;免疫小鼠及家兔未发现明显不良反应,在二免后14d血清抗体达1∶64~1∶128,强毒攻毒后全部存活,而PBS对照组全部死亡。本试验结果表明,Pm2、Pm3、Pm5均可作为多杀性巴氏杆菌灭活菌苗的候选菌株,其中Pm3作为首选株。     

禽多杀性巴氏杆菌交叉保护因子

禽霍乱是有记载以来的最古老的一种家禽细菌性传染病 ,广泛流行于世界各地 ,侵害多种禽鸟 ,给养禽业造成颇大的损失 ,多年来都一直为国内外所重视 ,被列为重点防制的家禽疫病之一。自 1881年 Pasteur首次研制出世界上第一种人工致弱的禽霍乱弱毒菌苗以来 ,现世界上已有许多用于预防本病的不同类型的疫苗 ,归结起来主要有 3大类 :强毒灭活菌苗、弱毒活菌苗和亚单位疫苗。这些疫苗的应用对防制本病的发生和流行起到积极的作用 ,但因巴氏杆菌 ( PM)的血清型众多 (已发现有 16种不同血清型 )、疫苗免疫谱窄 (只对同型菌株具有较好的保护 )和保…     

A型猪肺疫弱毒菌苗研制成功

目前广东省流行的猪肺疫以A型(群)为主,占84.3％。为解决这疫病问题,广东省农科院兽医研究所于80年代初开始进行了“广东猪多杀性巴氏杆菌血清学分型研究”和“A型猪肺疫弱毒菌苗的研究”从我国五株常用的禽霍乱菌苗中筛选出CA弱毒菌株(即731菌株)作为A型(群)猪肺疫弱毒菌苗。该菌苗对猪的稳定性良好,安全性和保     

猪巴氏杆菌病(猪肺疫)口服弱毒菌苗的研究 第一部分 猪巴氏杆菌弱毒菌株(89—14—20)的培育

毛主席指出:“自力更生为主,争取外援为辅,破除迷信,独立自主地干工业、干农业,干技术革命和文化革命,打倒奴隶思想,埋葬教条主义,认真学习外国的好经验,也一定研究外国的坏经验——引以为戒,这就是我们的路线。”在这条正确路线指引下,在黑龙江省农牧局党委和厂党委领导下,黑龙江省富裕兽医研究所和黑龙江省兽药一厂培育出一株巴氏杆菌(猪肺疫)弱毒菌株,研制出口服猪肺疫弱毒菌苗。为克服猪肺疫氢氧化铝菌苗使用剂量大、生产工艺复杂等缺点将起重要作用;为改变防疫方法,增加防疫密度提供了物质条件。这是毛主席革命路线的伟大胜利,是无产阶级文化大革命的又一丰硕成果。黑龙江省兽药一厂于1966年开始进行这项研究工作,该菌株经过89代细菌杂交培养,又通过豚鼠14代,来航鸡20代,定名为89—14—20菌株(简称鸡20菌株)。1971年黑龙江省富裕兽医研究所与黑龙江省兽药一厂协作,组成科研协作小组,对鸡20菌株进行了毒力、免疫原性、稳定性、口服免疫原性、口服安全性等方面的试验研究,现将试验结果分五个部份介绍如下。     

牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选及鉴定

为了筛选生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida，Pm）灭活疫苗菌株，本试验选取6株来自不同地区致犊牛肺炎死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌分离株，测定了培养基生长曲线、小鼠毒力、菌体脂多糖（LPS）含量及各菌株灭活菌苗免疫小鼠和家兔后的抗体效价，并进行了攻毒保护试验。结果显示，分离株Pm2、Pm3、Pm5生长速度较快、毒力较强、LPS含量较多，均含有与毒力和免疫相关的ptfA和fimA基因；免疫小鼠及家兔未发现明显不良反应，在二免后14 d血清抗体达1：64~1：128，强毒攻毒后全部存活，而PBS对照组全部死亡。本试验结果表明，Pm2、Pm3、Pm5均可作为多杀性巴氏杆菌灭活菌苗的候选菌株，其中Pm3作为首选株。     

不能滥用疫苗给猪免疫

据抚松县畜牧兽医总站赵景芳、刘振国二同志报道:1990年9月7日抚松县驻军某部猪场,将口服猪肺疫弱毒菌苗与猪瘟猪丹毒二联苗一同肌注,造成11头猪死亡,死亡率32.3％。他们认为使用疫苗应     

我国多杀性巴氏杆菌荚膜抗原的血清学鉴定

在过去一段时间,研完工作者对各种多杀性巴氏杆菌区分为型的问题实际上已开始了广泛的研究。有关多杀性巴氏杆菌血清学分类的工作结果曾指出,用与流行的巴氏杆菌病在血清学上同样型的菌株制造菌苗的必要性。不同动物的多杀性巴氏杆菌在血清学上的分类在我国尚未进行。现在为了改进生产抗巴氏杆菌病菌苗用菌种,我所进行了巴氏杆菌病茵株的血清学鉴定。由我国不同地区的牛、猪和其他种类动物和禽分离的多杀性巴氏杆菌,共计62株,用经改变的卡特氏(G.R. Carter)间接血凝试验进行了血清学分型。血清学的鉴定结果如下:所有由黄牛、水牛和耗十分离的12个菌株,属于卡特氏英膜B型,13个由猪分离的菌株中7个属于B型,4个A型,2个D型。这个结果与多数的国外研究资料结果不一致,在国外的资料中,猪的菌株是以A型和D型占优势,而在我国Carter氏B型菌是引起猪巴氏杆菌病的主要菌种;在26个禽的菌株中,除了7个菌株未能定型外,其他19个菌种是属于A型;另外由綿羊分离的两个菌株均属于B型,在4个由马分离的菌株中1个属于A型,3个属于B型,3个由兔分离的和1个由水貂分离的菌株全是Carter氏英膜A型。     

我国禽源多杀性巴氏杆菌血清型研究

本试验用Carter的荚膜群鉴定法和Heddlesten的热稳定抗原鉴定法对我国116株禽源多杀性巴氏杆菌进行了血清学分型研究。研究表明,A∶1型是我国最主要的血清型,占69.8%,其次为A∶1(14)型和A∶3(4)型,分别占6.8%和4.3%。并对我国目前使用和试用的8株禽霍乱弱毒菌苗株进行了定型,其中3株为A∶1型,与主要血清型相同,5株与主要血清型不一致。在A∶1型菌株中,大部分菌株的耐热抗原与1型标准血清反应,形成1条沉淀线,部分菌株(9株)形成2条沉淀线,表明在A∶1型菌株中还存在有抗原差异。     

猪肺疫内蒙系弱毒菌苗的检验

为了确保猪肺疫内蒙系弱毒菌苗的生物安全,保证其对猪肺疫的预防效果,试验通过菌苗水分测定、活菌苗纯粹检验、活菌苗计数检验、菌苗安全检验及菌苗效力检验,对其生物安全进行综合评定。结果显示：猪肺疫内蒙系弱毒菌苗水分含量在3％以下;无杂菌存在;计数结果与出厂时标注的头份数相符;安全检验中免疫动物均存活;效力检验中免疫组小白鼠均存活,对照组小白鼠均死亡。表明猪肺疫内蒙系弱毒菌苗各项检验合格,可用于实际生产。     

猪多杀性巴氏杆菌的初步分离鉴定与诊疗体会

2003年2月份,四川某养猪场突然爆发一种发病急、死亡快、呼吸高度困难的疾病,经流行病学、临床症状、病理剖检和实验室检验,确诊为猪巴氏杆菌病。用药敏试验筛选出的有效药物进行治疗,效果显著,同时紧急接种猪肺疫菌苗,很快控制了疫情。1发病情况2003年2月25日下午,该场962头猪     

牛源多杀性巴氏杆菌新型交叉保护性抗原的筛选

为了筛选多杀性巴氏杆菌潜在的交叉保护性抗原,首先对牛源多杀性巴氏杆菌PmCQ2株(A型)、PmCQ6株(A型)、PmB株(B型)、PmF株(F型)全基因组序列进行分泌蛋白及膜蛋白预测,并使用Signal、TMMHM在线分析筛选到48个候选共有抗原基因;然后分别克隆于pET-28α中构建原核重组表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,SDS-PAGE检测获得31个重组表达蛋白。间接ELISA检测重组蛋白对3种不同血清型牛多杀性巴氏杆菌多抗的反应原性,发现13个重组蛋白具有较强的反应原性。最后选择5个重组蛋白免疫小鼠后,分别采用10LD50PmCQ2、PmB和PmF进行攻毒保护性试验,结果显示:r-PmCQ2_1g0376免疫后的小鼠对PmCQ2和PmB的攻毒保护率为50%和30%,对PmF则没有保护性;r-PmCQ2_4g0132免疫后对PmCQ2、PmB和PmF株的攻毒保护率分别为80%,20%和10%;r-PmCQ2_1g0311免疫后的小鼠对PmCQ2的攻毒保护率为30%,对PmB和PmF株均无保护性。本试验筛选出2个交叉保护性抗原,可以不同程度保护同源或异源菌株的攻击,为多杀性巴氏杆菌新型疫苗候选蛋白的筛选奠定了基础。