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[目的]优化甜瓜半粒干种子DNA提取方法,为甜瓜相关分子研究提供技术支持.[方法]以甜瓜半粒干种子为材料,比较改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和尿素法4种提取方法的DNA提取效果,并对改良CTAB法中的提取液CTAB浓度、裂解时间、苯酚抽提次数等进行优化,以琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分别检测DNA的质量和纯度.最后通过SSR分析验证优化后改良CTAB法提取DNA的效果.[结果]4种提取方法中,改良CTAB法提取的DNA提取率最高,且DNA质量和纯度均高于其他提取方法.优化得到改良CTAB法的最佳提取条件为:提取液CTAB浓度2%,裂解时间20 min,苯酚抽提1次[先用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提1次,再用氯仿/异戊醇(24:1)抽提1次].在此条件下,提取的甜瓜半粒干种子DNA质量和纯度较好,以此为模板进行SSR分子标记分析时,电泳条带稳定、清晰,基本无杂带,可清楚区分品种间的差异.[结论]优化后的改良CTAB法提取甜瓜半粒干种子DNA效果较好,可满足甜瓜种子分子标记和遗传多样性分析等分子实验需求. 相似文献
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[目的]研究不同提取方法对金边瑞香基因组DNA提取质量的影响,筛选最佳提取方法。[方法]以金边瑞香叶片为试材,以SDS法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐低pH法和尿素法5种方法提取基因组DNA,并从DNA纯度、浓度、酶切电泳结果和ISSR-PCR扩增产物电泳等方面进行比较分析。[结果]高盐低pH法和尿素法提取的金边瑞香基因组DNA富含蛋白质和多糖等杂质,DNA纯度低;SDS法提取的基因组DNA含有一些酚类物质和盐等杂质,DNA纯度较低;改良CTAB法提取的基因组DNA纯度较高,但浓度和产率低。SDS-CTAB法提取的基因组DNA纯度、浓度和产率最高,酶切和ISSR-PCR产物电泳检测效果最好。[结论]SDS-CTAB法提取的金边瑞香基因组DNA质量与产量最佳,可以满足后续分子生物学研究的需求。 相似文献
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风信子DNA不同提取方法的效果比较 总被引:1,自引:0,他引:1
采用简易CTAB法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐法和CTAB-硅珠法等5种方法对风信子花蕾、叶片和鳞片基因组DNA进行提取.比较DNA纯度、电泳、得率等指标,结果表明:CTAB-硅珠法没有获得DNA,其他方法均可提出DNA;在纯度方面,简易CTAB法>SDS-CTAB法>改良CTAB法>高盐法;在得率方面,简易CTAB法>改良CTAB法>高盐法>SDS-CTAB法.简易CTAB法提取的DNA纯度较高,OD260/OD280为2.01,OD260/OD230为2.33,浓度为406.8ng·μL-1,得率为175.95ng· μL-1.花蕾、叶片适合风信子基因组DNA的提取. 相似文献
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冷季型草坪草基因组DNA的提取方法比较 总被引:4,自引:0,他引:4
采用SDS法、热CTAB法、高盐低pH法和改进CTAB法分别提取高羊茅(Festuca arundinoceaSchreb.)、草地早熟禾(Poa pratensis L.)和多年生黑麦草(Lolium perenne L.)3种冷季型草坪草基因组DNA.结果表明,改进CTAB法为最佳的提取方法,分离的DNA产率高、纯度高、质量高,经纯化后电泳检测带型清晰.RAPD扩增显示,用该快速、简便、有效的方法提取的基因组DNA能扩增出清晰易辨的带型. 相似文献
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[目的]探讨适于SSR分析的大豆干种子DNA提取的最佳方法。[方法]以2个大豆品种的干种子为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取大豆基因组DNA,用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定其DNA在A230、A260和A280下的吸光值,根据A260/A230和A260/A280的比值检测DNA的纯度和浓度,并分别以两种DNA为模版进行SSR—PCR扩增。[结果]相同DNA提取条件下,SDS法提取DNA样品的纯度和浓度均高于CTAB法,SDS终浓度为2%(W/V),水浴15min,氯仿/异戊醇抽提2次时所提取大豆种子DNA的纯度及浓度最高,其DNA的0D260/0D280值为1.86,SDS法所提的DNA泳带分布较集中,无拖尾现象,其DNA浓度能够满足SSR扩增模板的需求。[结论]SDS浓度为2%(W/V),水浴15min,氯仿/异戊醇抽提2次时提取大豆干种子DNA的浓度和纯度都较高,可以满足后续的各种分子生物学操作的要求。 相似文献
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百合叶片总RNA提取方法比较及优化 总被引:11,自引:1,他引:11
为筛选出适合百合叶片RNA提取方法,以铁炮百合‘白天堂’组培苗叶片为材料,比较了改进的CTAB、SDS及传统的Trizol、CTAB、SDS方法提取RNA的效果。结果表明:不论传统及改进的SDS法和Trizol法均不能有效去除百合叶片组织中的多糖、蛋白等杂质,传统CTAB法提取RNA存在DNA污染。针对百合叶片组织富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用醋酸钠及无水乙醇去除多糖,酚/氯仿反复抽提去除蛋白,DNaseⅠ去除DNA,LiCl有效沉淀RNA。采用此方法提取的RNA条带清晰,经紫外光谱分析D260/D280比值为2.0,D260/D230为2.1,电泳28S、18S条带清晰,比值约为1.5。RT-PCR结果表明,改进的CTAB法提取的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。 相似文献
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苦瓜DNA提取方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
采用CTAB法、SDS法、SDS-CTAB法、试剂盒法4种方法提取苦瓜(Momordica charantiaL.)叶片基因组DNA,并使用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测提取所得DNA的纯度和浓度.结果表明,SDS-CTAB法和试剂盒法提取的基因组DNA纯度高于CTAB法和SDS法,其中SDS-CTAB法提取的DNA浓度和产率高于其他方法. 相似文献
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4种提取鹰嘴豆基因组DNA方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
采用CTAB法、SDS-CTAB法、SDS法、尿素法4种方法对鹰嘴豆DNA进行提取,并从电泳结果、纯度、得率等方面对其进行比较研究,从而确定鹰嘴豆DNA提取适用流程。所提DNA纯度为:CTAB法〉SDS-CTAB法〉SDS法〉尿素法;所提DNA的浓度(μg/mL)为:SDS-CTAB法〉CTAB法〉SDS法〉尿素法。综合分析,CTAB法是提取鹰嘴可DNA的最佳方法。 相似文献
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为了方便稳定地获得松毛虫基因组DNA,寻找适合于松毛虫ISSR-PCR扩增的DNA的提取方法,分别用SDS-蛋白酶K法和CTAB法对松毛虫雌成虫进行基因组DNA的提取。结果显示:用SDS-蛋白酶K法提取的基因组DNA带型整齐,无降解,DNA得率和纯度都较高,操作简单无需纯化,用于ISSR扩增时其稳定性和重复性都很好;而用CTAB法提取出的DNA浓度低,杂质较多,琼脂糖凝胶电泳甚至检测不出,此方法提取的DNA作为ISSR反应模板时需要进行纯化。 相似文献
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金针菇DNA提取方法比较 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]筛选有效的金针菇DNA提取方法。[方法]以培养的金针菇菌丝体为材料,分别采用CTAB法和试剂盒法提取金针菇DNA,并用琼脂糖凝胶电泳法和分光光度法检测所提取DNA样液的浓度与纯度。[结果]分光光度结果及电泳鉴定表明CTAB法提取的DNA产量较大但杂质多,试剂盒法提取的DNA产量小但杂质少。[结论]CTAB法和试剂盒法均可用于金针菇DNA的提取,如后续试验对提取的DNA纯度没有特别要求,可用CTAB法替代试剂盒法。 相似文献
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羊肺炎支原体基因组DNA几种提取方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
为了筛选支原体基因组DNA最优提取方法以便用于支原体的检测和分子鉴定,本试验采用两种试剂盒、CTAB法、高盐法、酚/氯仿/异戊醇法和煮菌法对3批两种支原体液体培养物进行总DNA提取,通过检测基因组DNA纯度和PCR产物比较其提取效果。结果显示:6种方法提取的支原体基因组DNA均能用于PCR。进口试剂盒和CTAB法获得的DNA纯度最高,酚/氯仿/异戊醇法、高盐法和国产试剂盒次之,煮菌法省时但质量较差,酚/氯仿/异戊醇法较慢。CTAB法和高盐法可快速获得优质的基因组DNA,可作为提取支原体基因组DNA的首选方法。 相似文献
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[目的]寻找一种简便、高效的基因组DNA提取方法,为进一步开展镰刀菌等丝状真菌的分子生物学研究提供科学基础。[方法]采用改良的CTABS、DS、高盐沉淀和SDS-CTAB 4种方法提取8个镰刀菌菌株的基因组DNA,并对其进行质量测定及PCR分析,比较不同提取方法的效果。[结果]4种提取方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为SDS、SDS-CTAB法、高盐沉淀法和CTAB法。其中采用SDS法可成功提取到所有供试菌株基因组DNA,而且DNA浓度和纯度均较高,RNA及其他杂质污染少。而高盐沉淀法和CTAB法提取到的基因组DNA不够完整或浓度较低。[结论]SDS法更适合于镰刀菌等丝状真菌基因组DNA的提取。 相似文献