酶联免疫法测定猪肉组织中莱克多巴胺的残留量

莱克多巴胺（Ractopamine）是一种结构和功能类似于肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物．属于β-兴奋剂，它可以促进畜禽生长．降低酮体脂肪含量．起到改变酮体瘦肉和脂肪比例的作用．从而提高了瘦肉率。但是．人类食用了残留有菜克多巴胺的食品动物后．会出现不同程度的中毒现象．表现为骨骼肌收缩增加．破坏快缩肌纤维与慢缩肌纤维间的融合．引发肌肉震颤．四肢和面部肌肉尤为明显，其他中毒症状包括心动过速，心率失常，腹痛，肌肉疼痛，恶心和眩晕等。     

ELISA检测饲料中莱克多巴胺的不确定度分析

为探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果的影响因素,试验分析了ELISA法检测饲料中莱克多巴胺的不确定度。依据JJF 1059-1999《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》规定的测量不确定度的基本方法,分析不确定度来源并进行量化,找出主要影响因素。结果显示,ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量为43.75 ng/kg时,其扩展不确定度为6.77 ng/kg,k=2。影响不确定度的主要因素为样品称量、测量重复性和标准曲线拟合。     

酶联免疫法检测饲料中莱克多巴胺

莱克多巴胺(Ractopamin)属于β-兴奋剂.β-兴奋剂是营养重分配剂的一种,是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物,它可加快畜禽的生长速度,降低酮体脂肪含量,提高瘦肉率.β2-兴奋剂常见的有克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇等,克伦特罗俗称"瘦肉精".随着我国对克伦特罗监管力度的加大,克伦特罗的使用逐渐减少,其他β 2-兴奋剂的使用逐渐增加.莱克多巴胺是美国最新研制出的一种β 2-兴奋剂,由于莱克多巴胺有类似于盐酸克伦特罗的作用,在动物组织中残留,可能对人体产生不利影响,所以我国农业部、卫生部和国家药品监督管理局明文禁止莱克多巴胺用于动物养殖.目前,我国还未统一监测莱克多巴胺的方法,因此,建立莱克多巴胺的快速准确的测定方法以适合市场监测十分必要.目前,国内测定β 2-兴奋剂测定的方法主要有酶联免疫法、高压液相色谱(HPLC)法及气质联用(GC-MS)法等,而酶联免疫分析技术具有检测快速(检测过程只需2 h)的特点.经试验研究,应用酶联免疫法检测莱克多巴胺,回收率可达到75%～95%,相关系数(r值)可超过0.99,而最低检测限能达到0.5ng/mL.     

酶联免疫吸附法检测猪肉和猪尿中莱克多巴胺残留

以莱克多巴胺单克隆抗体间接竞争酶联免疫吸附（ELISA）法测定猪肉和猪尿中莱克多巴胺残留。该法对莱克多巴胺的检测限为0.8ng/mL（g）,在空白组织中的添加回收率为80.4%～109.5%,变异系数为5.8%～12.6%。     

肉品中莱克多巴胺残留的酶联免疫快速检测方法的建立

用自主制备的莱克多巴胺特异性抗体建立了猪肉样品中莱克多巴胺药物残留的间接竞争酶联免疫检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性等性能进行了测定,并将该检测系统与高效液相色谱法(HPLC)进行了对比分析。结果显示:莱克多巴胺药物残留的酶联免疫检测体系的检测范围为1～100 ng,灵敏度为0.12 ng/mL,检测限为1 ng/mL,回收率为80%～100%,与同类药物如盐酸克仑特罗、硫酸特布他林及硫酸克仑特罗的交叉反应率均小于0.01%;采用HPLC方法进行莱克多巴胺药物残留的检测时,其检测范围为10～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为83%～100%。该方法与高效液相色谱法相比灵敏度较高,特异性强,检测结果准确度相近,但是在检测结果稳定性方面逊于HPLC方法。     

高效液相色谱法测定猪肉组织中莱克多巴胺的残留

用乙酸乙酯-正丁醇混合液为提取剂提取猪肉组织中的莱克多巴胺,经固相萃取柱净化,浓缩后用2%乙酸溶液定容,用高效液相色谱-荧光检测法分离测定;色谱柱为C18柱,长250mm,内径4.6mm,粒度5μm;流动相为戊烷磺酸钠溶液:乙腈(78:22,V/V);激发波长为226nm,发射波长为306nm;流速1mL/min;进样量50μl;猪肉组织中莱克多巴胺的检测限为5μg/kg;莱克多巴胺的测定在2.5～25ng/mL范围内具有良好的线性关系,平均回收率在85.0%以上,RSD小于2.5%;方法简单,灵敏度高,可用于猪肉组织中莱克多巴胺残留的测定。     

酶联免疫吸附法测定猪尿中莱克多巴胺残留的研究

用酶联免疫吸附法对猪尿中莱克多巴胺进行了残留检测,结果:该方法的最低检测限为0.92μg/L;50%抑制浓度的平均值为2.7μg/L;回收率在(65.2±3.9)%(～86.6±6.1)%,批内变异系数≤17.8%,批间变异系数小于≤15.6%。试验表明该方法可用于莱克多巴胺残留量的筛选检测。     

新疆昌吉州畜产品莱克多巴胺残留量调查分析

采用莱克多巴胺酶联免疫快速检测试剂盒对新疆昌吉州的牛肉、羊肉、猪肉及其肝组织中莱克多巴胺残留进行调查分析,共抽检599份样本。检测结果表明,共检出3份阳性样本,检出率为0.5%。3份阳性样本均来自昌吉州各县市的农村集贸市场,昌吉州相关监督监测部门应加强对农村集贸市场的监督监测力度。     

ELISA捡测饲料中莱克多巴胺的不确定度分析

为探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果的影响因素,试验分析了ELISA法检测饲料中莱克多巴胺的不确定度.依据JF 1059-1999《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》规定的测量不确定度的基本方法,分析不确定度来源并进行量化,找出主要影响因素.结果显示,ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量为43.75 ng/kg时,其扩展不确定度为6.77 ng/kg,k=2.影响不确定度的主要因素为样品称量、测量重复性和标准曲线拟合.     

畜产品中莱克多巴胺残留的快速检测

莱克多巴胺属于β类肾上腺激素,因具有"减脂增肉"的作用而被广泛用于畜牧生产中,但在动物机体中有较大的残留时会严重威胁人类健康。检测莱克多巴胺有多种方法,而ELISA应用抗原抗体反应,能够对猪尿、猪肝中的莱克多巴胺残留快速进行检测筛选,从而有效控制瘦肉精在动物及人体的残留。     

直接竞争酶联免疫法检测菜克多巴胺研究

莱克多巴胺(RAC)是一种β2激动剂,人类食入高残留量莱克多巴胺的食物后会产生严重的毒副作用,研究建立了直接竞争酶联免疫法用于莱克多巴胺的快速检测。用合成的免疫抗原RAC-BSA免疫大白兔,获得了效价为1.6×104的多克隆抗体,用1,4-丁二醚法将RAC与辣根过氧化物酶偶联合成酶标记物,建立了RAC直接竞争酶联免疫吸附法。经质量评价,直接竞争酶联免疫吸附法的检测限为0.1 ng/mL,半数抑制浓度IC50为1.07 ng/mL,批内和批间变异系数均小于11%,抗体与多巴酚丁胺的交叉反应率为8.3%,与RAC的其他类似物几乎不发生交叉反应,猪尿样品中平均添加回收率为104%,表明建立的直接竞争酶联免疫吸附法可用于对莱克多巴胺的残留检测。     

进口猪产品中莱克多巴胺残留的快速检测

应用经验证可靠的ELISA方法,对进口猪产品进行莱克多巴胺残留快速筛选检测,对ELISA检测阳性的样品采用色谱质谱联用分析方法进行确证检测。1330份猪产品的检测结果显示,采用ELISA方法检出阳性率达11．4％（152／1330）;对ELISA阳性样品采用高效液相色谱-串联质谱（HPLC—MS／MS）或气相色谱-质谱方法（GC—MS）确证,阳性率达90．8％（138／152）。检测工作表明,综合运用快速筛选检验技术与确证检测技术可实现快速准确检测动物产品中莱克多巴胺残留,提高进出境检验工作效率。     

气相色谱-质谱法同时测定猪肝中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺残留

猪肝用乙酸乙酯、盐酸溶液提取后，经SCX固相萃取柱净化、BSTFA衍生化，定容后用气相色谱-质谱（GC／MS）外标法测定。测定结果表明：采用该方法，猪肝中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的检出限分别为0．3、1．0ng／g。盐酸克伦特罗在3．0～300ng／mL范围内与峰面积具有良好的线性关系，平均回收率为85．6％；莱克多巴胺在10～1000ng／mL范围内与峰面积具有良好的线性关系，平均回收率为76．6％。该方法简便可靠、干扰小、灵敏度高，可用作猪肝中克伦特罗和莱克多巴胺残留的同时测定。     

莱克多巴胺在兔体内的药物动力学及生物利用度研究

为了研究莱克多巴胺静脉注射和灌胃在兔体内的药动学特征和生物利用度,静脉注射和灌胃的给药剂量分别为10和20 mg·kg~(-1)。兔静脉注射莱克多巴胺溶液的药-时数据符合无吸收两室模型,主要药动学参数分别为T_(1/2α)为0.56±0.084 h、T_(1/2β)为7.20±0.59 h、AUC为8.04±2.32 h·μg·m L~(-1)。兔灌胃莱克多巴胺溶液的药-时数据符合一级吸收两室模型,主要药动学参数分别为TK01为0.72±0.07 h、T1/2α为0.72±0.11 h、T_(1/2β)为26.43±2.73 h、T_(max)为1.13±0.09 h、Cmax为1.29±0.08μg·mL~(-1)、AUC为3.98±0.43 h·μg·mL~(-1)。灌服莱克多巴胺溶液的绝对生物利用度F为24%。莱克多巴胺在兔体内的药动学特征是吸收迅速,分布广泛,消除缓慢,生物利用度低。     

生物样本中莱克多巴胺检测方法的研究进展

莱克多巴胺(ractopamine,RAC)是一种常用的β-兴奋剂,近年来,人们发展了许多方法检测其在食用动物中的残留情况,以期达到对其使用的有效监控.作者在介绍RAC基本理化性质和作用机理的基础上,论述了国内外检测生物样本中RAC的分析方法,并对这些方法的优缺点进行了分析,进一步说明无论仪器分析方法还是免疫分析方法都有其固有的特性和优缺点,彼此是无法完全替代的,并在此基础上,对未来RAC分析方法的发展方向进行了展望.     

气相色谱-质谱法测定猪肉中的莱克多巴胺

建立了气相色谱-质谱法（GC-MS）测定猪肉中莱克多巴胺残留的方法.用乙腈提取试样中的莱克多巴胺,经SLH固相萃取柱净化,氮气吹干,衍生化后进行气相色谱-质谱法测定.猪肉中莱克多巴胺的检出限为0.5μg/kg,定量限为2.0μg/kg.溶液中莱克多巴胺浓度在0.02～1.0μg/mL范围内,峰面积与之呈良好的线性关系.平均回收率在81.4%以上,批内相对标准偏差小于8.4%.     

猪肾脏等组织中盐酸莱克多巴胺的HPLC检测方法及其残留消除

本研究建立了猪肝脏、肾脏、肌肉和脂肪中盐酸莱克多巴胺的高效液相色谱检测方法。方法的检测限为1ng/g,定量限为2 ng/g,肝脏的平均回收率在73.4%～83.2%,变异系数在2.1%～6.6%;肾脏的平均回收率在73.1%～95.5%,变异系数在3.8%～4.0%;肌肉的平均回收率在80.7%～82.5%,变异系数在4.9%～9.1%;脂肪的平均回收率在73.3%～78.8%,变异系数在2.9%～6.7%。对60头健康猪以18 mg/kg的剂量混饲给药28d,停药饲喂14 d。在给药7、142、8 d和停药1、2、3、7、9、14 d分别屠宰6头猪,取各组织进行残留量测定。结果显示：肾脏中残留量最高,肝脏其次,残留量在停药期间较给药期间显著降低。其中肾脏和肝脏中的残留量分别在停药14 d、停药9 d后降至定量限以下;肌肉和脂肪中的残留量显著低于肾脏和肝脏,给药28 d时,残留基本低于定量限;停药1 d时均低至检测限以下。     

不同屠宰方式对猪肉品质的影响

选用不同致晕、放血法及烫毛方法对140头杜长大和杜大长三元杂商品猪进行屠宰,测定其肌肉的肉色、pH值、剪切力、失水率等指标。结果表明：在其他条件相同的情况下,烫毛水温为60℃时,烫毛6min,胴体质量最佳。电击致晕生猪,采用悬挂放血,有出现PSE猪肉的倾向;而CO2致晕生猪,采用水平放血或悬挂放血,肉质指标差异不显著。较好的组合是：电击致晕生猪,采用水平放血;而CO2致晕生猪,采用悬挂放血较好。     

应用ELISA检测肉猪尿液中盐酸克仑特罗方法的研究

应用酶联免疫吸附法(ELISA)，检测肉猪尿液中盐酸克仑特罗残留，实现了肉猪活体盐酸克仑特罗快速测定。实验结果表明，盐酸克仑特罗的线性范围为200—2000ng/kg，最小检出限为100ng/L,样品不用前处理可直接检测，1个样品的2个平行样测定时间为45min。