淫羊藿属植物杂交F1代植株形态和种间系统演化研究

淫羊藿属植物多数种类在形态分类性状上存在连续过渡的形态变异现象,导致种间的鉴别困难.本研究对粗毛淫羊藿、巫山淫羊藿、天平淫羊藿,3个物种合计29个居群之间的种间杂交F1代植株及其亲本形态学进行了比较研究.结果表明:AC×MY、AC×WU、WU×MY 3种组合杂交F1代的叶片形状表现为双亲过渡形态,控制淫羊藿花瓣距短于内萼片的基因可能是部分显性,E.acuminatum的花瓣和内萼片颜色属于显性遗传.所得结果为淫羊藿属植物分类学、种间系统关系及其起源与进化研究提供了新的资料和线索.     

淫羊藿属植物的RAPD遗传多样性研究

淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(Epimedium,)植物,目前记载有55种,80%为中国特有种,贵州、四川、湖北等为淫羊藿属植物的变异中心.本研究对主要来自于四川、贵州的17种淫羊藿植物进行了较系统的RAPD标记研究,建立了淫羊藿植物DNA标记系统关系图.研究结果表明,该属植物遗传关系与其地理分布关系密切,并支持了将中国种类划分为大花类群和小花类群.     

贵州省淫羊藿属(小檗科)特有和珍稀植物及其保护价值

报道贵州省小檗科淫羊藿属特有植物(或已知仅贵州分布植物)10种1变种,分别为黔北淫羊藿(E.borealiguizhouenseS.Z.He & Y.K.Yang)、短茎淫羊藿(E.brachyrrhizum Steam)、德务淫羊藿(E dewuense S.Z.He,Probst & W.F.xu)、普定淫羊藿(E.pudingense S.Z.He,Y.Y.Wang & B.L.Guo)、多花淫羊藿(E.multiflorum T.S.Ying)、剑河淫羊藿(E.myrianthum Steam var.jianheense S.Z.He & B.L.Guo)、小叶淫羊藿(E.parvifolium S.Z.He & T.L.Zhang)、拟巫山淫羊藿(E.pseudowushanense B.L.Guo)、贵州淫羊藿[E.sagittatum (Siebold & Zuccarini)Maximowicz var.guizhouense S.Z.He & B.L.Guo]、水城淫羊藿(E.shuichengense S.Z.He)和单叶淫羊藿(E.simplicifolium T.S.Ying);易危植物2种,分别为小叶淫羊藿和单叶淫羊藿,被《中国物种红色名录》收录.描述了贵州淫羊藿属特有植物和珍稀植物的药用和保护价值及其分布产地.对淫羊藿属存在的问题进行总结分析,并提供贵州省小檗科淫羊藿属植物新名录和以贵州标本命名的淫羊藿属新物种名录.     

淫羊藿属植物种间杂交亲和性研究

对原产贵州、四川的14个种、38个居群淫羊藿属植物进行种间杂交结实率统计分析研究。结果显示,淫羊藿属植物种间杂交多数组合有较好的可杂交性,但是不同组合之间有较大的变异。E.wushanense、E.lishihchemii是广亲和的花粉受体,种间杂交中适合作母本。E.myrianthum是广亲和的花粉供体,种间杂交中适合作父本。E.acuminatum、E.pubescense是广亲和的花粉供体兼受体,种间杂交中作为母本或父本都有很高的可杂交性。可确定的生物学物种:大花种类E.pauciflorum、E.acumi-natum、E.chlorandrum,小花类群种类E.sagittatum、E.myrian-thum、E.ecalcaratum、E.pubescense。该结果对于该属进一步的杂交研究、品种改良及该属系统关系研究等都具有一定的参考价值。     

基于ITS 2序列的15种淫羊藿属药用植物分类鉴定研究

为探讨内转录间隔区2(ITS2)序列及其二级结构在15种淫羊藿属(Epimedium)中的鉴定效率。利用试剂盒提取叶片总DNA,对ITS2序列进行PCR扩展与测序,计算K2P遗传距离,构建系统发育树,预测其二级结构。结果表明,ITS2序列在15种淫羊藿属植物中的通用性好,扩增成功率与测序成功率均为100%。从K2P种间和种内遗传距离看,ITS2在淫羊藿属中的种间变异较小,部分种类种内遗传距离大于种间遗传距离,鉴定成功率约为60%。采用比对法(Blast)分析,ITS2鉴定效率为75%。由ITS2系统进化树可知,淫羊藿属与鬼臼属各为一支,易于分开。除薄叶淫羊藿、竹山淫羊藿、巫山淫羊藿外,其余种类均能较好的进行聚类;除粗毛淫羊藿、保靖淫羊藿外其余均不能与NCBI下载到的序列进行较好聚类。研究表明,15种淫羊藿属植物ITS2序列在ML系统进化树中具较好的鉴别能力,但淫羊藿属各样本种内与种间遗传较为混乱,遗传距离复杂,ITS2二级结构形态结构亦较为相似,将各种间进行区分存在一定难度,不适合单独作为该属条形码使用。     

半夏自交与杂交研究

为解决半夏生产中种茎的退化问题,为半夏的新品种选育及栽培技术提供科学依据。对三叶半夏和掌叶半夏进行自交与杂交,观测并比较其生物学特性、授粉、结实情况及出苗率。结果表明,掌叶半夏、三叶半夏的人工杂交、自交均能结实,但种间杂交表现不育;掌叶半夏与三叶半夏种内杂交结实率分别达65%和60%,平均单株结种子分别为37粒和17粒。掌叶半夏和三叶半夏的自交结实率分别为88.24%和62.5%;半夏自然授粉植株的单株种子数及其种子出苗率都明显高于自交和杂交植株,对异株的花粉有一定的排斥作用。半夏属于同株异花授粉植物,种间杂交不育;其种子不具有休眠特性,应趁鲜播种;半夏有性繁殖可以选育新品种,提高种茎的抗逆能力。     

贵州淫羊藿药材种质资源的研究

通过资源调查,分类学研究,发现贵州有淫羊藿种质资源18种.其中,巫山淫羊藿(E.wushanense)、箭叶淫羊藿(E.sagittatum)为国家药典种;粗毛淫羊藿(E.acuminutum)、天平山淫羊藿(E.myrianthum)、毡毛淫羊藿(E.coactum)、黔岭淫羊藿(E.leptorrhizum)为贵州省地方标准种;黔北淫羊藿(E.borealiguizhouense)、短茎淫羊藿(E.brachyrrhizum)、毡毛淫羊藿(E.coactum)、德务淫羊藿(E.dewuense)、小叶淫羊藿(E.elachyphyllum)、水城淫羊藿(E.shuichengense)、单叶淫羊藿(E.simplicifolium)、普定淫羊藿(E.pudingense)、贵州淫羊藿(Epimedium sagittatum var.guizhouense)为贵州特有种质资源.     

淫羊藿炮制前后总黄酮的含量对比

试验测定了淫羊藿炮制前后总黄酮的含量变化.采用乙醇回流提取从淫羊藿中提取总黄酮,以淫羊藿苷为标准品配置标准曲线溶液,并绘制标准曲线.采用分光光度法测定样品的吸光度,根据标准曲线计算总黄酮含量.淫羊藿苷浓度在2.5～22.5 μg/ml范围内吸光度与浓度呈良好的线性关系,回归方程为A=0.029839C＋0.0064,R=0.9994.鲜品淫羊藿总黄酮含量为12.48％,购买淫羊藿炮制品总黄酮含量为7.09％,新工艺炮制品总黄酮含量为9.00％,传统药典法炮制品总黄酮含量为8.65％.鲜品淫羊藿总黄酮含量最高,说明淫羊藿在炮制后总黄酮损失了一部分;新工艺炮制品的总黄酮含量比传统方法炮制的淫羊藿总黄酮含量略高;市售淫羊藿总黄酮含量达到药典标准.     

粗毛淫羊藿叶绿体基因组及其结构分析

本研究通过Illumina HiSeq X-Ten高通量测序平台对粗毛淫羊藿的叶绿体基因组进行测序,并应用生物信息学分析工具对其结构特征进行比较分析。结果表明,粗毛淫羊藿叶绿体基因组大小为156 894 bp,具有被子植物典型的环状四分体结构,大单拷贝区(large single copy, LSC)长度为88 496 bp,小单拷贝区(small single copy, SSC)长度为16 685 bp, 2个反向重复区(inverted repeat sequence, IRa/IRb)长度为25 809 bp;粗毛淫羊藿叶绿体基因组有133个基因,其中包括85个蛋白编码基因、10个rRNA基因和38个tRNA基因,44个外显子,23个内含子。研究结果丰富了淫羊藿属物种的叶绿体基因组资料,可为淫羊藿属物种的分子标记开发、系统学研究与药材的混伪品鉴定提供参考。     

淫羊藿多糖的提取工艺研究

通过正交试验,对影响淫羊藿多糖提取效率的乙醇体积分数、提取时间、提取温度、溶剂与淫 羊藿量比等因素进行了研究。结果表明,优化工艺为以20％乙醇为溶剂,淫羊藿与溶剂按1:100g/mL 投料,在60℃下提取100min,淫羊藿多糖收率为17．6％。