富T-DNA-纳米氧化石墨烯荧光探针检测乳制品中的三聚氰胺

为了检测乳制品中的三聚氰胺,使用T-DNA-纳米氧化石墨烯荧光探针的方法。该方法灵敏度高,选择性好,检出浓度范围为50～1 000 nM,回收率76%～119%。该方法也可用于其他食品中三聚氰胺的测定。     

基于金纳米团簇的比率型pH荧光探针制备及表征

在合成牛血清白蛋白(BSA)修饰的金纳米团簇(金簇)的基础上,将荧光素异硫氰酸酯(FITC)与金簇偶联,构建一种新型比率型p H荧光探针。当体系p H值在4.0~10.0之间变化时,FITC的荧光强度逐渐增加,而金簇的荧光强度基本保持不变。在p H为5.5~8.0之间,该探针对于p H具有良好的线性关系,线性方程为Y=1.72X-8.8,相对标准偏差为0.994,同时该探针在p H为6.0~9.0之间还具有良好的可逆性。此外,将此p H荧光探针与PK15细胞共培养,通过MTT实验证明该比率型p H荧光探针对细胞几乎没有毒性。     

水稻稻瘟病菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立

依据GenBank中登录的稻瘟病菌28S rDNA保守区域设计合成了对稻瘟病菌特异的TaqMan探针,并对实时荧光PCR各反应条件进行摸索优化,得出水稻稻瘟病菌实时荧光PCR的最佳反应体系.利用该体系对其他侵染水稻常见的病原菌进行特异性检测,结果表明只有稻瘟病菌能检测到荧光信号的增加,检测的灵敏度为0.328pg/μL DNA样品.说明该方法是一种较常规PCR快速、特异性强的方法,并且可有效的用于稻瘟病菌的检测.     

水溶性CdTe纳米晶荧光探针的制备与表征

采用水相合成技术制备了表面带有羧基的发射红光CdTe纳米晶.应用单因素法探索最佳的合成条件.采用TEM、XRD、紫外-可见吸收光谱和荧光光谱等技术对所制得产晶进行表征.结果表明,当Cd2+:HTe-:TGA的摩尔比为1.0:0.2:2.4时,反应体系的pH=11.0,在96℃条件下回流4h,为制备发射红光的CdTe纳米晶的最佳实验条件.该红光纳米晶量子产率较高(42.54%)、半峰宽较窄(FWHM=17.3 nm、EM=696 nm),与其他制备方法相比,这种方法不但大大的缩短了红光CdTe纳米晶的制备时间,而且提高了水溶性CdTe的荧光量子产率,从而为建立免疫分析新方法检测环境中的环境激素类污染物提供了新的荧光纳米颗粒探针.     

二氧化硅生物荧光纳米颗粒的制备与应用

以荧光染料(联吡啶钌配合物)为核,二氧化硅为外壳制备了荧光纳米颗粒.电镜检测结果显示,合成的二氧化硅纳米颗粒粒径为(20±3)nm,分布均匀,形态规则.对荧光纳米颗粒进行生物修饰得到荧光探针,以DNA碱基配对原则为基础建立检测DNA的方法,利用激光扫描共聚焦显微镜研究玻片上的荧光信号和荧光强度.结果表明,该方法不仅可定量检测到4.4×10-8 mol/L的目标DNA3,而且可定性检测目标DNA3、单碱基错配DNA4及随机序列DNA5,为发展DNA检测技术提供了新的思路.     

高效荧光定量PCR探针的筛选及HBV-DNA检测方法的建立

目的:筛选一套灵敏度高、特异性强的引物探针,用于建立检测HBV病毒载量的荧光定量PCR方法.方法:通过PCR方法扩增HBV基因组片段,与T载体连接,制备工作标准品,并运用设计的荧光定量PCR对HBV DNA国家标准品进行检测.结果:以pMD18-T-HBc作为标准品,HBcF和HBcR为上下游引物,HBcP为探针所建立的荧光定量PCR检测HBV病毒载量方法的线性范围为109copies/mL到103copies/mL,批内重复性变异系数为0.20％一1.44％,批间重复性变异系数为3.08％～5.63％,检测国家阴阳性标准品的特异性灵敏度为100％,国家线性标准品的检测值与理论值的线性相关系数R为0.998.结论:成功筛选出一套荧光定量PCR检测HBV DNA的引物探针,并已建立了一种特异性灵敏性均非常高的荧光定量PCR检测HBV DNA的方法.     

锌离子荧光探针生物应用研究进展

Zn2+荧光探针的生物应用研究可为新型探针合成提供重要的设计策略,也是探针合成的最终目标。文中从细胞、组织和活体3个方面综述了Zn2+荧光探针的生物应用,并对其未来发展进行了展望。     

虾虹彩病毒TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立

[目的]建立检测虾虹彩病毒(SIV)的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,为实现虾虹彩病毒病(SIVD)快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段.[方法]根据SIV的MCP基因保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,将目的片段克隆至pMD18-T载体制备重组质粒pMD18-T-MCPSIV;优化反应体系及扩增条件后建立检测SIV的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,以pMD18-T-MCPSIV为标准品绘制标准曲线,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性.[结果]制备的重组质粒(pMD18-T-MCPSIV)DNA稳定性好,满足作为标准品的要求;标准品起始模板范围为2.0×101~2.0×109拷贝/反应时,建立的标准曲线具有良好线性关系.优化后的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR灵敏度高,对重组质粒的检测灵敏度可达20拷贝/反应,对虾组织SIV的检测灵敏度约10拷贝/mg,其临床检测的敏感性与套式PCR相当;与虾类其他常见病原无交叉反应,组内和组间变异系数分别为0.27%~0.54%和0.61%~0.95%,且扩增与产物分析同步完成,整个检测过程仅需1 h左右.采用建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR与目前农业农村部推荐的套式PCR同时对276份临床虾样品进行SIV检测,结果显示,两种方法的大部分检测结果一致,符合率为98.6%,但检测低拷贝数样品时前者具有更高的灵敏度.2018和2019年广西虾样品的SIV阳性检出率分别为19.7%和7.5%,且养殖凡纳滨对虾、罗氏沼虾和红螯螯虾均检测到SIV阳性.[结论]基于SIV MCP基因保守序列建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、定量范围宽及简单快速等优点,适用于虾类样品SIV检测,可为SIVD快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段.     

叶绿素荧光在大豆莠去津药害早期诊断中的应用

为了研究除草剂药害与叶绿素荧光参数之间的关系,通过对大豆喷施一系列剂量的莠去津(有效剂量4.687 5~150 g/hm2),并在处理1、3、5 d后测量大豆叶片叶绿素荧光参数,分析大豆叶片叶绿素荧光参数值与莠去津剂量的关系。结果表明,喷药1 d后,大豆叶片原初光能转换效率(Fv/Fm)、非光化学淬灭系数(NPQ)、PSⅡ实际光化学效率(Y(Ⅱ))和相对光合电子传递速率(ETR)均随着处理剂量升高而降低,并且其抑制方程的R2值均大于0.9,表现出一定的剂量-效应关系。所以叶绿素荧光参数Fv/Fm、NPQ、Y(Ⅱ)和ETR的抑制率及抑制率变化曲线均可作为大豆莠去津毒性快速检测系统的生物学指标,实时、高效且无损地检测大豆莠去津药害。     

紫外线照射灭卵效果的荧光探针技术检测

以林木害虫舞毒蛾(Lymantria dispar L.)虫卵为试验材料,利用吖啶橙、罗丹明123、Ho33342和碘化丙啶4种荧光探针追踪标记虫卵细胞内部的不同细胞器,研究了紫外线照射对舞毒蛾虫卵的微现影响.研究表明:经过紫外线照射后,吖啶橙标记的虫卵细胞产生红色荧光;罗丹明123标记虫卵细胞荧光强度有所减弱;Ho3...     

基于碳量子点荧光恢复检测牛奶中多巴胺残留

[目的]本文旨在建立一种牛奶中兽药残留检测方法。[方法]选用常见粮食小麦、大米、玉米作为碳源,用水热法合成一种新型荧光探针。利用碳量子点与铁离子结合荧光猝灭,向猝灭体系中加入盐酸多巴胺,碳量子点荧光强度恢复的机理,在λex=365nm、λem=440nm处检测碳量子点荧光强度,通过观察碳量子点的荧光强度变化定量分析牛奶中的盐酸多巴胺含量。[结果]盐酸多巴胺在1～110μmol·L~(-1)浓度范围内与碳量子点荧光强度变化呈线性关系,检出限为0.3μmol·L~(-1),牛奶中的回收率为82.38%～104.2%,相对标准偏差为1.09%～2.01%。[结论]运用碳量子点荧光信号"开-关-开"原理实现对牛奶中兽药盐酸多巴胺的快速、高灵敏度检测,建立了一种新的痕量物质检测方法。     

TaqMan探针实时荧光定量PCR诊断犬瘟热病毒方法的建立

根据犬瘟热病毒核蛋白基因的保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针建立荧光定量PCR。构建FQ-PCR绝对定量的标准品,并对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验。结果显示:实验成功构建了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.994。犬瘟热病毒FQ-PCR检测反应的灵敏度为10TCID50;5种非犬瘟热病毒病原体检测均为阴性;说明实验建立的FQ-PCR具有快速、灵敏和稳定的特点,适用于临床样品的检验。     

复合探针实时荧光PCR技术快速检测海产品中 副溶血性弧菌方法的建立

副溶血性弧菌是一种食源性致病菌,海产品和其制品海鲜酱油等最容易被副溶血性弧菌污染,而副溶血性弧菌寄生于鲜虾、海鲜酱油等复杂的食品基质中有时却很难被检测出。以快速检测食品中的副溶血性弧菌为目的,针对副溶血性弧菌的tlh基因,设计引物和复合探针,采用实时荧光PCR方法检测鲜虾和海鲜酱油中的副溶血性弧菌,得出以下结论,该方法检测副溶血性弧菌具有较强的特异性和灵敏度,当鲜虾(固体)中的样品菌含量为10~3cfu·g~(-1)或海鲜酱油中的样品菌含量为10~3cfu·m L~(-1)时,无需增菌培养,即可快速检出。增菌6~8 h即可检出鲜虾(固体)或海鲜酱油(液体)的1cfu的副溶血性弧菌。     

NO荧光探针应用于植物细胞的研究

[目的]探讨一种能够有效地应用于植物细胞的NO荧光探针装载方法。[方法]在相同荧光探针浓度,进行不同装载时间（0、6、12、18h）及不同装载温度（4、25℃）的探针装载,并用荧光显微镜观察荧光强度。[结果]植物细胞的荧光强度随装载时间的延长和温度的降低而增强。[结论]延长装载时间及低温均有利于植物细胞的NO荧光探针装载。     

磁性氧化石墨烯的制备及其对沙门氏菌荧光探针的猝灭机理

为探讨磁性氧化石墨烯(Fe3O4/GO)对荧光的猝灭作用,通过扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、X射线衍射(XRD)及傅里叶变换红外光谱(FT-IR)对化学共沉淀法制备的Fe3O4/GO和氧化石墨烯(GO)的结构进行对比表征,发现Fe3O4磁性纳米粒子负载在GO的表面,表明成功合成了Fe3O4/GO.以Fe3O4...     

西瓜细菌性果斑病菌Taq Man探针实时荧光PCR检测鉴定方法的建立

根据西瓜细菌性果斑病菌（Acidovorax avenae subsp．citrulli）与相关细菌16SrDNA序列差异，设计出对西瓜细菌性果斑病菌具有稳定点突变特异性探针Aac—probe，利用该探针对23种供试菌株进行了实时荧光PCR检测实验。结果表明，只有西瓜细菌性果斑病菌能检测到荧光增强信号，其它细菌无荧光增强信号。该方法特异性强，灵敏度高，重复性好，可有效地应用于西瓜细菌性果斑病菌的检测。     

以铕离子为荧光探针测定痕量环丙沙星

本文研究了环丙沙星( CIP)同铕离子形成的配合物体系的荧光光谱特性及实验条件对荧光强度的影响.在pH值为8.02的Tris-HCl条件下,Eu3+和环丙沙星(CIP)能形成配合物发生分子内能量转移,发射铕离子的特征荧光,其最大激发和发射波长为265nm和615nm.加入阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)后,可极大地增强体系的荧光强度,据此建立了一种以铕离子为荧光探针分析痕量环丙沙星含量的新方法,方法的线性范围为2.46×10-7mol· dm-3～9.84×10-5 mol·dm-3,相关系数r=0.9965,检出限为1.92×10-7mo 1·dmn-3.该法用于环丙沙星片剂和针剂的测定,回收率在98％～103％之间,结果令人满意.     

荧光探针法研究茶多酚与DNA的相互作用

利 用荧光探 针 Ｅ Ｂ（溴 化乙啶）研 究茶多酚 （ Ｔ Ｐ）与 Ｄ Ｎ Ａ 的相 互作用 及顺 铂（ Ｃ Ｄ Ｄ Ｐ）对其 的影响,结果表明：在 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 体系中加 入 Ｔ Ｐ 后,荧光光谱 形状和峰位几乎 无变化,而荧光强度 明显下降; Ｔ Ｐ 压低 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 荧 光强度的效率 Ｄ 与其浓度成正相关,高浓度 Ｔ Ｐ 可以完全抑制 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 荧光强度⒚ Ｔ Ｐ与 Ｃ Ｄ Ｄ Ｐ 对 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 荧光压低作用存在叠加现象,表明 Ｔ Ｐ 可增强 Ｃ Ｄ Ｄ Ｐ 的药用效果,又 可降低其副作用⒚ Ｔ Ｐ使 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 体系的荧 光偏振度 Ｐ增加,而荧光寿命 τ缩短,这表明 Ｔ Ｐ 与 Ｄ Ｎ Ａ 作用的机理可能是 Ｔ Ｐ 插 入了 Ｄ Ｎ Ａ 分子碱 基对平 面中,影 响了 Ｄ Ｎ Ａ 分子双 链的有 序度,并 使从 Ｄ Ｎ Ａ 分子中 向 Ｅ Ｂ 分子传递的能量减少⒚     

TaqMan-LNA探针荧光定量PCR快速检测对虾

【目的】建立快速、特异、灵敏检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）的TaqMan-LNA探针荧光定量PCR方法,为IHHNV的临床诊断和疫情监测提供更简便的检测技术。【方法】根据GenBank已发表的IHHNV毒株序列,在IHHNV保守区序列设计特异性引物和TaqMan-LNA探针;对荧光定量PCR反应条件进行优化以缩短检测时间,提高特异性和灵敏度;应用TaqMan-LNA探针荧光定量PCR对广西地区的300份凡纳滨对虾样品进行检测,验证方法的实用性。【结果】TaqMan-LNA探针荧光定量PCR检测IHHNV的灵敏度高,约为10个病毒粒子/反应,定量范围宽,在1.6×101～1.6×108拷贝/μL的范围内具良好的线性关系;与SPF凡纳滨对虾组织、WSSV、副溶血弧菌的DNA和TSV的RNA均无反应,特异性好;组内变异系数为0.53%～1.75%,组间变异系数为0.81%～1.14%,重复性和重现性均较好,结果稳定可靠;临床应用结果表明,300份凡纳滨对虾样品检出193份阳性,阳性率为64.3%,表明广西沿海地区养殖的凡纳滨对虾IHHNV感染率较高。【结论】利用TaqMan-LNA探针建立检测IHHNV的荧光定量PCR方法具有快速、特异、灵敏、重复性好、能定量等优点,可用于对虾IHHNV的检测。     

TaqMan探针实时荧光定量PCR检测番茄黄化曲叶病毒

根据番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)外壳蛋白(CP)基因序列上的保守序列,设计特异性的引物和Taqman探针,建立荧光定量PCR方法。结果表明,试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.9941;能检测到1 000个病毒拷贝,灵敏度比普通PCR高100倍;与番茄花叶病毒和黄瓜花叶病毒无交叉反应,特异性强、重复性佳,为TYLCV检测提供了一种特异、灵敏、快速的定量检测方法。