德国牧羊犬精液冷冻保存的研究

以德国牧羊犬为实验动物,用两种不同的冷冻方法和剂型对犬的精液进行冷冻,以冻精解冻后的活率作为评定指标,提高犬精液利用效率和扩大犬精液的使用范围。采集4条公犬的精液40次,分别在四种稀释液中稀释,冷冻成两种剂型,根据冻后活率比较优劣。结果表明,稀释液2颗粒冻精的冻后活率显著高于稀释液1、稀释液3和稀释液4(P0.05);对犬的精液进行炸熏法和程序冷冻法冷冻,炸熏法冷冻的精液冻后活率均显著高于程序冷冻法冷冻的精液(P0.05)。     

猪精液冷冻保存的初步研究

采用液氮熏蒸法制作猪冻精颗粒 ,对稀释液及冷冻保护剂进行优化筛选。结果表明 ,在 5种稀释液中 ,5号稀释液优于其他 4种 (P<0 .0 5 ) ;甘油的冷冻保护性能优于乙二醇和二甲基亚砜 (P<0 .0 1) ,其适宜浓度为2 m L/ L;稀释液中添加安钠咖可有效延长精子的冻后存活时间 (P<0 .0 1)。猪精液冷冻效果的关键因素是冷冻温度、冷冻速度和解冻温度 ,通过对不同温度情况的研究 ,初步制定了猪精液冷冻温度曲线。     

猪精液颗粒冷冻技术的研究

为提高猪冻精质量,加速猪冻精在生产上的应用,本试验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)结果作为判定指标,探讨了冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,分别采用含有Equex.STM的稀释液和普通稀释液进行两步法稀释,然后以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果表明,以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为0.487833±0.046761,顶体完整率为0.782±0.039704,而以液氮为冷源的方法冻后活率为0.3334±0.055734、顶体完整率为0.5578±0.068482,前者在这两项指标上均显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,可使冻精顶体完整率极显著提高(P<0.01)。以含有Equex.STM的稀释液采用干冰滴冻的冻精进行IVF,胚胎卵裂率、囊胚率分别为0.5316±0.125582和0.216±0.053198。结果表明,采用Equex.STM作为冷冻保护剂并以干冰作为冷源可以获得高质量的猪冷冻精子。     

稀释液·清洁剂·冷冻程序对猪精液冷冻效果的影响

探讨了稀释液、清洁剂及冷冻程序对猪精液冷冻保存效果的影响。结果显示:①稀释液Ⅳ保存鲜精,精子活率明显低于其他组(P<0.05);但其作为冻精的解冻稀释液时,效果最佳(P<0.05),说明猪精液冷冻保存时可采用第Ⅰ～Ⅲ组稀释液,而解冻时采用第Ⅳ组较佳。②稀释液中于不同阶段添加SDS(Sodiumlaurylsulfate,十二烷基硫酸钠)或OEP(OrvusESPaste,清洁剂)均能显著提高冷冻精子活率(P<0.05),SDS与OEP对冻精活率的影响无显著差异(P>0.05)。③精液冷冻程序采用-70℃、液氮熏蒸与直接液氮熏蒸在对解冻后冻精精子活率上无显著差异(P>0.05)。添加咖啡因能有效提高冻精的解冻后活率。     

波尔山羊个体精子抗冻性研究

为了加速贵州省地方山羊品种改良,2000年9月试验采用常规的精液冷冻解冻方法,通过鲜精活力、畸形率、冻精活力、解冻后4 h存活指数、顶体完整率、谷草转氨酶(GOT)释放量等指标研究了3只波尔山羊精子的抗冻性,结果3只试验公羊精子抗冻性存在明显差异,968号公羊生存指数显著高于2022和098号(P<0.05),098号公羊谷草转氨酶释放量显著低于2022和968号(P<0.05),但其鲜精品质全部达到常规制作冻精的要求,配种试验,65.77 %(146/222)的受胎率也验证了3只公羊适宜制作冻精。     

驴精液冷冻保存的研究

试验以解冻后精子的活力、顶体完整率、顶体膨胀率、顶体破损率、尾部畸形率等几个重要评定指标为依据,筛选了几种驴冻精的冷冻稀释液配方,将其中较好的稀释液作为对照组,再分别进行细管冻精、颗粒冻精和添加不同剂量安钠咖的对比试验.结果表明:5号稀释液的冻后精子活力要显著高于其他4种稀释液(P0.05),精子活力达到0.31,顶体完整率达62.8%;细管冻精的活力要显著高于颗粒冻精(P0.05);在冷冻液中添加安钠咖2mg·mL-1能显著提高解冻后精子的活力(P0.05),使顶体的膨胀率降低9%.     

不同解冻温度对精子活力的影响

温度是精子最敏感的外界因素之一。人们的注意力多集中在稀释液和冷冻方法的研究,对冷冻精液的解冻方法和技术的研究不足。但实践证明,牛精液冷冻效果好坏与解冻温度有很大关系。长期以来,人们沿用冷冻精液的解冻温度38～40℃解冻冷冻精液。为此,可以通过本试验了解不同解冻温度对牛冷冻精子复苏的影响,找出适宜牛细管冷冻精液的最佳解冻温度。     

四种冷冻保护剂对鸡精液冷冻效果的比较

采用浓度为12%的甘油、二甲基亚砜(DMSO)、二甲基乙酰胺(DMA)、二甲基甲酰胺(DMF)作为冷冻保护剂,分别添加到A液(乙酸钠、柠檬酸钠、谷氨酸钠、磷酸氢二钾、果糖、TES);B液(氯化镁、乙酸钠、柠檬酸钠、谷氨酸钠、果糖、EDTA-Na2)2种基础液中,进行常温保存和冷冻试验.常温保存结果发现:甘油对精子毒害作用最大,在A、B 2种基础液中精子生存指数分别为(8.40±0.114),(8.30±0.055)(P<0.01);其次是DMF,而DM-SO及DMA对精子的毒害作用最小.冷冻保存结果发现,以DMSO和DMA作为冷冻保护剂,精子解冻后活率优于DMF和甘油(P<0.01).     

山羊精液冷冻保存技术研究

[目的]探索山羊精液的冷冻方法。[方法]以甘油为冷冻保护剂,采用细管法冷冻保存山羊精液,探讨甘油浓度和添加时间、冻结方法和解冻温度对山羊精液冷冻效果的影响。[结果]在稀释液中添加6%和7%甘油的处理组中,冻后精子活率与复苏率均显著高于添加3%、5%甘油的处理组。配液时添加6%甘油的处理组中冻后精子活率与复苏率均显著低于在4℃平衡后添加的处理组。把平衡的山羊精液分别在离液氮面3 cm处熏蒸9 min和-80℃冰箱中冻结9 min,前者的精子复苏率显著低于后者。在解冻温度分别为40、45和50℃的处理组中精子冻后活率与复苏率显著高于解冻温度为55和60℃的处理组,说明解冻温度以40～50℃为宜。[结论]在山羊精液冷冻保存中,甘油的最佳添加时间为4℃平衡后冻结前。     

两种不同冷冻方法对犬冷冻精液品质的影响

本试验以德国牧羊犬的精液为材料,采用液氮熏蒸法和细管炸熏法两种冷冻方式进行细管冷冻试验,用精子活力、顶体完整率和畸形率,作为判定精子冷冻品质的指标,确定两种冷冻方法对犬冷冻精液效果的影响。结果表明:(1)液氮熏蒸法冷冻后的精子活力为0.30±0.12,细管炸熏法冷冻后的精子活力0.38±0.08,细管炸熏法优于液氮熏蒸法,且差异显著(P<0.05);(2)液氮熏蒸法冷冻后精子顶体完整率42.20±3.51,畸形率25.60±7.03,细管炸熏法冷冻后精子顶体完整率43.50±4.64,畸形率24.50±5.94,细管炸熏法稍优于液氮熏蒸法,差异不显著(P>0.05)。     

小尾寒羊冷冻精液制作保存技术研究

在制作小尾寒羊冻精颗粒时,我们对其冷冻稀释液和甘油浓度进行了研究。结果表明, 2号稀释液效果最好(P<0.05),甘油浓度为6 %时的冷冻效果最佳(P<0.01);在40～50 ℃解冻后,其活力可达0.5以上。     

不同解冻方法对奶牛细管冻精活力的影响

研究探讨了不同解冻方法对0.25 mL奶牛细管冻精解冻后的影响,细管冻精分别在5,15,40,75,90℃下不同时间（1～120 s）进行解冻操作,通过评定精子冻后活率、顶体完整率、尾膜完整率,筛选出最佳的奶牛细管冻精的解冻方法。结果表明：（1）奶牛细管冻精采用75℃解冻3 s,精子的活率最高,解冻效果最好;其次在接近体温40℃解冻20 s,效果也较好;在低温5℃和室温15℃解冻,精子活率低于0.3;在90℃高温解冻条件下不稳定,不适合生产使用;（2）90℃解冻精子的顶体完整率、尾膜完整率明显低于40℃和75℃,差异显著（P＜0.05）,但是精子畸形率却高于40℃与75℃的处理组（P＜0.05）,而后两者间差异不显著（P＞0.05）;（3）不同解冻温度解冻后精子在37℃时保持有效存活时间存在较大差异,表现为：40℃＞75℃＞90℃。因此,在生产实践中对奶牛细管冻精进行解冻时,可根据具体情况选用适合的解冻方法。若解冻后立即输精的,建议采用75℃下3 s解冻;解冻后不能立即输精的,为了使精子在较长时间内保持活力,宜采用40℃下20 s解冻。     

绵羊冷冻精液平衡方法研究

不同体积水浴平衡法和8层纱布包被平衡法对绵羊冷冻精液品质影响比较研究的结果表明:250 mL和200 mL 38 ℃ 体积水浴平衡的冷冻精子的活率、生存指数、顶体完整率分别为0.43和0.45、3.57和3.55,47.60 %和47.98 %,显著高于150 mL、100 mL、50 mL 38 ℃体积水浴和8层纱布包被平衡冷冻精子的活率、生存指数、顶体完整率(P<0.05);250 mL和200 mL38 ℃ 体积水浴平衡的冷冻精子GOT释放量分别为303.33和303.86(UL-1)(P<0.05)。200 mL38 ℃ 体积水浴平衡到达4℃的时间比250 mL38 ℃ 水浴平衡缩短0.5 h,因此,推荐生产实践中应用200 mL 38 ℃ 体积水浴2.5 h降温到4℃的平衡方法。     

季节变化对夏洛来种公牛精液品质的影响

从洛阳市白马寺种公牛站挑选年龄、健康状况相近且性欲旺盛的夏洛来种公牛5头,对其生产性能指标按春(3—5月)、夏(6—8月)、秋(9—11月)、冬(12—2月)4个季节连续五年的记录进行统计分析。结果表明:(1)采精量随季节变化不明显(P>0.05)。(2)原精活力:夏季(0.46±0.04)与春(0.70±0.01)、秋(0.65±1.01)、冬季(0.69±0.01)差异极显著(P<0.01)。(3)冻后活力:春、秋、冬季均极显著高于夏季(P<0.01),说明季节对夏洛来种公牛精液冻后活力具有明显影响。(4)精液密度:夏季与春、冬季差异极显著(P<0.01),夏季与秋季差异显著(P<0.05)。(5)精液冻后畸形率:夏季的夏洛来种公牛精子冻后畸形率极显著地高于其它季节(P<0.01)。(6)精液冻后的顶体完整率:夏季的夏洛来种公牛冻精顶体完整率极显著地低于冬、春季节(P<0.01),显著地低于秋季(P<0.05)。     

不同浓度咖啡因对犬精液冷冻效果的影响

为提高犬冷冻精液的冷冻效果,试验向Tris-卵黄基础稀释液中添加不同浓度的咖啡因;结果表明:当所添加的咖啡因浓度为5.0mmoL/L时,精子活率为0.33±0.04(P0.01),显著对照组。添加浓度为12.5mmoL/L时,精子活率仅为0.23±0.04(P0.01),显著对照组。浓度为5.0mmoL/L时精子畸形率最低,为0.174±0.036(P0.01),显著对照组。但添加咖啡因的各组跟对照组在顶体完整率上并无显著差异。     

稀释液中卵黄浓度对猪精液冷冻保存效果的影响

为探索卵黄在猪精液冷冻中的应用效果,筛选出猪精液冷冻稀释液中卵黄的最佳浓度,分别在猪精液冷冻稀释液中添加不同比例（20%、25%、30%）的卵黄,并以精子活率、活力、路径速率（VAP）、轨迹速率（VCL）、直线运动速率（VSL）等为指标,对猪精液稀释后、平衡后和冷冻后3个阶段的精液质量进行比较分析。结果表明,将猪精液冷冻稀释液中卵黄的添加量提高5～10个百分点,其稀释后、平衡后及解冻后3个阶段精子的5个运动参数与常规添加量相比均无显著差异（P〉0.05）。可见,提高猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度未能显著改善猪精液冷冻后的质量,综合考虑,猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度仍以20%（v/v）为宜。     

低温定向冷冻法冻存食蟹猴精液的研究

[目的]使用低温定向冷冻方法建立有效的精子冻存条件。[方法]采用低温定向冷冻方法冻存食蟹猴精液,并与常规方法进行对比,探讨冷冻方法和甘油浓度对精子冷冻存活率的影响。[结果]在相同甘油浓度下,低温定向冷冻的食蟹猴精子的活力与顶体完整性显著高于常规冷冻法(P0.05),定向冷冻方法在保存食蟹猴精液效果明显优于常规冷冻方法,且甘油浓度5%时能够达到更好的冷冻效果。[结论]与常规冷冻相比,低温定向冷冻能显著提高精子存活率。在食蟹猴的精液冻存中,采用定向冷冻仪冻存精液能达到较好的冻存效果。     

大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响#br#

为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素（proanthocyanidin，PC）对山羊精子的冷冻保护作用，以20％卵黄为对照（EY组），分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60 μg·mL-1的PC（分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组），冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明，当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40 μg·mL-1（SL3组）时，解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高，分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%，显著高于其他PC添加组和EY组（P<0.05）。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶（SOD）（224.87 U·mL^-1）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量（129.6 U·L^-1）最高，总caspase凋亡率（54.33%）和TUNEL凋亡率（41.36%）最低，与EY和SL0组差异显著（P<0.05）。当PC的添加浓度提高至60 μg·mL^-1（SL4组）时，解冻后精子质量显著下降，表现为对精子毒性作用。综上，在山羊精液冷冻中，大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40 μg·mL^-1可降低精子氧化损伤和细胞凋亡，提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果，提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景     

HSP90蛋白表达量与牛精子抗冻性的关系

【目的】探索热应激蛋白90（HSP90）表达量与牛精液冷冻-解冻后品质的关系。【方法】采用假阴道法采集身体健康、年龄2～4岁的9头荷斯坦奶牛精液（编号1～9）,测定新鲜精液指标（活力、形态、活率和密度）,评定其品质,合格的精液样品经过冷冻解冻后检测其精子活率、质膜完整率和顶体完整率,并根据冻后品质将其分为HFTs(High freezing resistance teams)和LFTs（Low freezing resistance teams) 2组,对精子HSP90蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳和Western blot检测,分析其表达量与精子抗冻性的关系。【结果】不同牛个体精液冻后品质相差较大。SDS-PAGE电泳结果显示,HFTs组的分子质量约为90 ku的蛋白表达量显著高于LFTs组（P＜0.05）,经Western blot分析,该蛋白为HSP90。HSP90蛋白表达量与冷冻-解冻后的牛精子品质呈明显正相关,其与精子活率、顶体完整率、质膜完整率的相关系数分别为0.364,0.447和0.402。【结论】HSP90蛋白表达量可以作为判断牛精子抗冻性的指标之一。     

6种鸡精液冷冻稀释液以及冻后保存条件比较

为探究不同稀释液对鸡精液冷冻保存效果的影响,选择LR、Lake’s、BPSE、Modified Sasaki、Beltsville和Nabi共6种稀释液对霞烟鸡精液进行冷冻,解冻后分别在37或4 ℃条件下短时间保存,分析不同冷冻稀释液和保存条件对精子活率、活力、功能完整性和抗氧化指标的影响。结果表明,6种稀释液中Lake’s稀释液的冻后活率、活力和顶体完整性最高,分别为48.20%、45.70%和45.26%;LR稀释液虽然获得了48.16%的冻后活率,但其活力显著低于Lake’s稀释液。解冻后4 ℃保存更适合鸡精子的短时间保存,Lake’s和Nabi稀释液在4 ℃条件下保存45 min后活力仍达30 %以上。虽然Nabi稀释液解冻初始时的精子活率和活力低于LR和Lake’s稀释液,但随着保存时间的延长,其冻后精子存活能力表现最佳。随着冻后保存时间的延长,LR、Lake’s和Nabi稀释液冻后精子的线粒体活性、质膜完整性和抗氧化能力均呈现下降趋势,且37 ℃保存时下降更为明显,同时LR稀释液在这些指标上表现出较差的耐受性。综上所述,Lake’s和Nabi冷冻稀释液对鸡精子冷冻保存的效果最佳;解冻后4 ℃保存可延长冻精的体外存活时间;LR稀释液虽获得了较高的冻后活率,但其活力和冻后耐保存性能较差。