甘肃棘豆中苦马豆素的分离与鉴定

用升华法从甘肃棘豆中分离到一种白色细针状结晶，经ＴＬＣ、ＭＰ、ＩＲ、ＭＳ鉴定分析确定为苦马豆素，经计算甘肃棘豆中的提取率为 １４μｇ／ｇ。     

HPLC分离甘肃棘豆中苦马豆素

甲醇浸泡甘肃棘豆粉 ,回收甲醇浸泡液至浸膏 ,1 mol/L HCl溶解后上 73 2型强酸性阳离子交换柱 ,1 mol/L NH4 OH洗脱并挥发至干 ,得到总生物碱。总生物碱经氨性氯仿提取后 ,通过高效液相色谱柱分离 ,色谱条件是 :反相 ( C1 8硅胶 )柱 ,在 2 5min内用 5%～ 1 0 0 %甲醇线性梯度洗脱 ,苦马豆素一般出现在 80 %～1 0 0 %的范围内 ,表现为一个宽峰。高效液相色谱柱分离后回收溶液得到一种白色细针状结晶 1 .0 4 mg,植物中的提取率为 0 .0 0 52 %。经 TLC、MP、IR、MS鉴定分析 ,确定所分离到的结晶为苦马豆素     

山羊甘肃棘豆中毒临床病理学研究

每天以10g/kg的剂量,经瘤胃瘘管给山羊甘肃棘豆(Oxytropis kansuensis)粉,20d后受试羊(n=8)陆续出现与自然病例相同的中毒症状,中毒羊血清碱性磷酸酶、谷草转氨酶、精氨酸酶、肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶活性和尿素氮含量明显升高,尿低聚糖及其中甘露糖含量明显升高,血清α-甘露糖苷酶活性和E-玫瑰花环形成率明显下降,脑脊液乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、肌酸磷酸激酶活性明显升高。表明甘肃棘豆对山羊脑、肝、肾、心和其他脏器有不同程度的损害作用,并能降低机体细胞免疫功能,其有毒成分属于吲哚兹定生物碱。     

镰形棘豆化学成分预试及生物碱成分薄层色谱分析

采用植物化学成分系统预试法、生物碱系统提取法和薄层色谱技术对镰形棘豆地上部分全草的化学成分,特别是生物碱成分进行了薄层色谱分析。结果表明,镰形棘豆地上部分全草中含有生物碱、有机酸、皂甙、黄酮、香豆素、萜类和挥发油等多种化学成分,其中以生物碱沉淀反应最明显;1.50 kg镰形棘豆经95%乙醇回流提取得总浸膏198.10 g,经酸化、碱化所得碱水液依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分段萃取,得生物碱氯仿萃取部分0.72 g,乙酸乙酯萃取部分0.97 g,正丁醇萃取部分26.70 g,分别占总生物碱的2.54%、3.42%、94.04%,说明镰形棘豆生物碱主要集中在正丁醇萃取部分以大极性生物碱为主;各部分生物碱经薄层层析分析,发现镰形棘豆中生物碱的种类至少有24种,经与标准样品对照,证明镰形棘豆所含的生物碱主要以苦马豆素及其类似物等吲哚里西啶生物碱为主,同时也含有少量的黄华碱和臭豆碱等喹诺里西啶生物碱。     

急弯棘豆生物碱成分薄层色谱分析及苦马豆素分离

为了探明急弯棘豆的生物碱成分,明确急弯棘豆是否属于疯草类植物,采取醇类溶剂提取法、生物碱系统提取法、薄层色谱分析及平面色谱图像定量分析技术对急弯棘豆生物碱成分进行研究,并采用大孔吸附树脂柱层析方法分离苦马豆素。结果表明,1.25kg急弯棘豆干草粉得到113.35g总浸膏,经酸化和碱化后,碱水液分别经氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取得到各部分浸膏0.30g、0.20g和5.95g,出膏率分别为0.024%、0.016%和0.476%。各萃取部分经薄层展开、Ehrlich’s试剂显色及软件分析发现,氯仿部分有9个斑点,且斑点3相对含量最大,为40.26%,乙酸乙酯部分有6个斑点,且斑点4相对含量最大,为41.90%,正丁醇部分有3个斑点,且斑点3相对含量最大,为78.26%。上述各斑点均与苦马豆素标准品颜色及Rf值一致。通过柱层析,在正丁醇萃取部分得到苦马豆素51.90mg。结果显示急弯棘豆含有苦马豆素,属于疯草类植物的一种。     

甘肃棘豆中产苦马豆素内生真菌的分离与鉴定

【目的】确定甘肃棘豆中是否存在产生苦马豆素(SW)的内生真菌。【方法】对甘肃棘豆的内生真菌进行分离,应用薄层色谱法和气相色谱-甲基化--αD-甘露糖苷内标法分别对菌丝中SW进行检测,筛选可生成SW的疯草内生真菌;通过形态学观察,应用聚合酶链反应对5.8S rDNA-ITS序列进行扩增,并对扩增序列进行分析,构建系统发育树,对其进行种属分类。【结果】筛选出1种可以产生SW的甘肃棘豆内生真菌FEL3,气相色谱内标法测得其菌丝中SW含量为400.52μg/g。根据形态学、5.8S rDNA-ITS序列分析结果和文献报道,确定FEL3为埃里格孢属真菌。【结论】甘肃棘豆中存在生成SW的内生真菌Embellisiasp.FEL3。     

甘肃棘豆中苦马豆素提取工艺改进初报

用40 kH z超声波水媒处理甘肃棘豆草粉1.5 kg,代替传统的索氏提取法或溶剂冷浸法,水提液浓缩除杂后,用正丁醇萃取,正丁醇萃取液用稀酸水萃取,浓缩后的稀酸水萃取液用氨性氯仿萃取,浓缩氨性氯仿萃取液成浸膏,此浸膏经石蜡油浴升华得到24 m g白色晶体,经薄层层析检验,可初步鉴定为苦马豆素。此法不用柱层析,简化了苦马豆素提取的步骤,提取率为16 m g/kg。     

萃取法提取甘肃棘豆中的苦马豆素研究初报

将1.5kg甘肃棘豆干粉经水提取,提取液浓缩后用正丁醇萃取,萃取液加入稀硫酸调节pH7.0,回收溶剂,制成浸膏;将浸膏与二氧化硅粉末混匀后用氯仿萃取该浸膏中的小极性杂质。用氨性氯仿萃取,收集氨性氯仿萃取液,挥干后升华得到7.5mg针状结晶,与苦马豆素标准样品对照进行TLC检测,其Rf值及斑点颜色与苦马豆素标准样品一致;通过熔点和IR、MS、1HNMR、13CNMR等鉴定其化学结构,为苦马豆素,计算甘肃棘豆苦马豆素的产率为5mg/kg。     

疯草灵缓释丸对绵羊黄花棘豆中毒的预防效果研究

将16只藏系绵羊随机分成4组,分别为试验组Ⅰ、试验组Ⅱ、试验组Ⅲ和对照组,每天以10 g/kg.BW的量饲喂黄花棘豆干草粉,试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组Ⅲ每只羊分别投服“疯草灵缓释丸”1丸、2丸和3丸,对照组不投服。每天观察临床症状,出现棘豆中毒症状后停止饲喂黄花棘豆干草粉,试验前及试验期间每7 d采血1次,做血清酶学和血清生化指标检验。结果表明:对照组16~21天出现棘豆中毒症状,试验组出现症状的时间分别为:试验组Ⅰ33~48天、试验组Ⅱ75~77天、试验组Ⅲ75~77天;血清α-甘露糖苷酶活性测定结果,试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组Ⅲ第14天前与对照组比较差异不显著(P<0.05),从第14天开始与对照组比较升高差异显著(P<0.05);天门冬酸氨基转移酶活性测定结果,试验组Ⅰ从第14天开始与对照组比较下降,试验组Ⅱ和试验组Ⅲ从第7天开始与对照组比较下降,差异显著(P<0.05)。     

绵羊实验性变异黄芪和黄花棘豆中毒的比较

利用饲喂试验比较了变异黄芪和黄花棘豆对绵羊的毒性作用．结果表明，变异黄芪和黄花棘豆的毒性作用极为相似．主要临床症状为沉郁、被毛粗乱、消瘦、体重减轻、僵硬，采食时头部水平震颤，神经机能紊乱及心律不齐．从试验的第１８ｄ开始，两组的循环淋巴细胞中出现胞浆空泡，血清碱性磷酸酶活性、谷草转氨酶活性及血清尿素氮含量均明显升高．各组的血糖、肌酐、血钙、血钾、总蛋白、谷丙转氨酶均无明显变化．２组Ｅ－玫瑰花环形成率均显著降低（Ｐ＜００５）．２组的特征病理组织学变化均为神经细胞及实质细胞胞浆空泡化．电镜观察表明，空泡是由溶酶体样结构及线粒体肿胀所致．变异黄芪中毒和黄花棘豆中毒的症状、病理变化、临床病理学及细胞免疫功能变化的相似性充分说明，变异黄芪中毒亦可归属于疯草中毒．     

玉米浸泡液中噬淀粉乳杆菌的分离与鉴定

从玉米浸泡液中分离出３株细菌，这些细菌为兼性厌氧，革兰氏阳性，无运动性，不形成芽胞的杆菌，呈单在或短链状排列．无过氧化氢酶．４５℃生长，１５℃不生长，发酵纤维二糖、水杨苷，不发酵阿拉伯糖、棉子糖、鼠李糖，水解淀粉．这些细菌与Ｌ．Ｋ．Ｎａｋａｍｕｒａ（１９８１）所报道的噬淀粉乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）的性状完全一致，证明由玉米制淀粉的过程中有噬淀粉乳杆菌参与．     

鸡有益乳杆菌的分离鉴定

用乳杆菌选择培养基（ＬＳＣＭ）从鸡直肠内容物中分离出五株革兰氏阳性杆菌,分别是嗜酸乳杆菌２株（ＬＢ１、ＬＢ２）、唾液乳杆菌液亚种１株（ＬＢ３）、短乳杆菌１株（ＬＢ４）、发酵乳杆菌１株（ＬＢ５）。五株菌对雏鸡安全,对小白鼠无致病性。     

黄花棘豆引起山羊流产的研究

给5头妊娠54d的山羊每天饲喂黄花棘豆干粉12g/kg体重,试验羊分别于第15,21,22,33d全部流产,而对照组羊全部产下健康羊羔。流产母羊各器官,特别是卵巢和胎盘的病理组织学检查及试验羊的血浆孕酮和17β-雌二醇的放射免疫测定结果表明:卵巢黄体细胞颗粒变性、空泡化和胎盘绒毛膜上皮细胞空泡化,以及妊娠羊血浆孕酮下降。这些变化可能干扰母体对胎儿的营养供应以及毒草的毒素直接作用于胎儿导致流产。     

牛溶血性巴氏杆菌的分离鉴定

呼和浩特市某肉牛养殖场犊牛发生了以体温升高、呼吸困难、咳嗽及死亡为主的疾病.从该牛场发病死亡的犊牛采集病料,采用病料涂片镜检、细菌分离培养、生化鉴定及动物试验的方法,对导致该牛场犊牛发病死亡的病原进行了分离鉴定,结果从该牛场患病死亡犊牛的心、肝、肺中均分离出溶血性巴氏杆菌,从而确诊该牛场此次犊牛发病为牛溶血性巴氏杆菌病.     

鸡肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定

从自然病死鸡体内分离到一种革兰氏阴性的粗短杆菌，大小约０．５～０．９μｍ×０．８～１．６μｍ，两端顿圆或略尖，单个散在或两两相连，外有英膜包围，在麦康凯琼脂培养基上形成粘稠性粉红色菌落，不运动，不产生芽跑，经细菌学鉴定为肺炎克雷伯氏菌。该菌可致死小白鼠，对庆大霉素等药物敏感。     

肉仔鸡嗉囊中乳酸菌的分离与鉴定

本研究从４２ｄ龄肉仔鸡的嗉囊中分离出３株乳酸菌,对其进行生物学鉴定后,确认为２株植物乳酸杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔｅｒｕｍ）、１株粪链球菌（Ｓｔｒｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）;作为复合菌发酵剂的种菌。     

江西的亚香棒虫草菌分离鉴定

对产于江西的亚香棒虫草组织及子囊孢子进行分离培养；记述了分离物的形态和培养性状，并将分离物鉴定为霍克斯拟青霉菌（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｈａｗｋｅｓｉ）。     

玉米、胡萝卜核DNA的提取和鉴定

以胡萝卜、玉米悬浮细胞为材料,酶解后获得大量的原生质体并从原生质体中分离出大量纯净的细胞核。通过核裂解,热变性除蛋白等步骤提取到分子量大于50kb 的 DNA,DNA 制品纯度好,能满足分子克隆和遗传转化研究的要求。