酸诱导分离家兔X、Y精子研究

利用X精子在酸性环境条件下的运动活性比Y精子强的原理,通过酸诱导,用王氏管分离法(实时精子分离技术)分离家兔X、Y精子,同时利用体视显微镜评定所分离精子的活率,并用喹吖因染色法进行鉴定。结果表明,在稀释液pH为5．5时分离效果最好,分离后目的精液精子活率平均达(91±1．4)％,较分离前平均精子活率(82±1．3)％提高了9．1％,两者差异极显著(P<0．01);分离后的精液中,X精子的比例为(73．3±1．0)％,Y 精子的比例为(26．7±1．0)％,与分离前精液中X、Y精子各占50％的比例差异均极显著(P<0．01),表明酸诱导条件下的王氏管分离法是X、Y精子分离简单有效的方法。     

流式细胞仪分离工作犬XY精子的研究

[目的]探索适用于犬性别控制的流式细胞仪分离精子的方法。[方法]采集昆明犬和德国牧羊犬的精液,采用不同浓度(6、8、10、12μl/ml)的Hoechst 33342对精液进行染色,探讨不同浓度的荧光染料Hoechst 33342及公犬个体对精子分离效果的影响。[结果]当Hoechst 33342浓度分别为6、8、10μl/ml时,X和Y精子的DNA差异不能被分辨成双峰,只有当Hoechst 33342为12μl/ml时,X/Y双峰能有效并稳定地分离。不同公犬的鲜精死精率与X/Y精子分离速度呈明显负相关性,而分离准确率则与鲜精死精率无明显相关性。[结论]当Hoechst 33342浓度为12μl/ml时,流式细胞仪能将警犬X、Y精子成功分离。选择适宜的种公犬对提高精子的分离效率和分离精液的品质都有重要意义。     

哺乳动物精子冷冻干燥保存技术研究进展

概述了国内外哺乳动物精子冷冻干燥保存研究工作现状,阐述了精于冷冻干燥研究历史、精子冷冻干燥保存机理、冷冻保存保护剂及相关处理研究进程,并探讨了目前研究中存在的问题和今后的研究展望.     

奶牛精子SRY基因原位杂交检测方法的建立

Sry基因是Y染色体性别决定基因,采用primer premier 6对SRY基因序列设计引物,以公牛基因组DNA为模板扩增,高效DNA地高辛标记和检测试剂盒制备探针,对X精子(Y精子纯度7％)、Y精子(Y精子纯度93％)和常规精子(Y精子纯度50％)DTT去凝集、蛋白酶K去除鱼精蛋白,杂交.结果表明:在荧光显微镜下可见标本背景清晰,精子头部成蓝色,边界清楚,X精子4.67％ (n =600)有荧光信号,Y精子86.33％(n=600)有荧光信号,常规精子46.17％有荧光信号.实验证明了所选取Sry基因序列为Y精子携带,建立了精子原位杂交方法.     

实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响

【目的】探索实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响。【方法】采用实时精子分离系统对精液进行分离优选,液氮冷冻法制作细管冻精,以未分离精液为对照,检测实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响。【结果】分离优选精子解冻后,精子活率、顶体完整率、质膜完整率、正常染色质率均明显高于对照组(P<0.01);分离组精子的正常形态率也显著高于对照组,且未受冷冻-解冻过程的影响(P>0.01);分离过程对精子密度也未产生显著影响(P>0.01)。【结论】实时精子分离系统可以显著改善猪冷冻精液的品质。     

F小体检测奶牛XY精子纯度

为了建立F小体检测奶牛精子纯度的方法,试验采用正交设计检测精子F小体不同的胰酶消化时间（40min,60min,80min）、喹吖因染色浓度（0．4％,0．5％,0．6％）和染色时间（10min,20min,30min）的优化方案,并且对分选X、Y精子及常规精液的F小体进行染色检测,评价分选X、Y精子的纯度。结果显示分选x、Y精子及常规精液在0．25％胰酶消化20min后0．5％喹吖因染色10min的条件下,纯度分别为92．7％、92．5％、48．3％与对应精子的理论纯度（93．3％,93．7％,50％）差异均不显著（P〉0．05）。因此本实验建立的F小体检测法可用于XY精子纯度的检测。     

哺乳动物XY精子分离技术的研究进展

论述了哺乳动物精子性别分离的各种方法，并对流动细胞测定技术分离法进行了详细叙述，表明其是一种效率高且准确率高的精子分离方法，具有较高的实际应用价值。     

乳酸脱氢酶C与哺乳动物精子能量代谢

哺乳动物精子能量代谢的相关研究对畜牧业与生殖医学领域的发展影响重大,因此,相关的研究一直是热点,其中乳酸脱氢酶C(LDH-C)和精子能量代谢的关系也一直被研究,大部分研究者认为,LDH-C和哺乳动物精子能量代谢相关,但多数实验证据是间接的而且比较分散。综述了对哺乳动物精子能量代谢和LDH-C两个方面的研究,提出LDH-C在精子的能量代谢中扮演着多重角色,不仅直接参与精子的能量代谢,还可能参与哺乳动物精子获能的信号途径,LDH-C和哺乳动物精子的能量代谢密切相关。     

性控冻精人工授精技术操作要点

奶牛性控冻精是一种将种公牛的精子通过精子分离仪使雌性的X精子与雄性的Y精子有效分离后而冷冻的分离冻精。目前选用的是X精子制成的冻精。根据性染色体配对的原理。用X精子给奶牛授精，奶牛就只生母牛犊。     

哺乳动物精子超微结构研究进展

精子超微结构研究是检验精液品质,揭示精子发生机制,开展受精生物学研究的一项重要内容。从哺乳动物的精子形态结构出发,综述了不同情况下精子变化的特征,论述了国内近些年来在哺乳动物精子超策结构上的一些研究进展,以及开展哺乳动物精子超微结构研究的意义。     

Sry基因探针FISH检测奶牛XY精子纯度

为探讨荧光原位杂交技术（FISH）在评价奶牛精子纯度方面的应用价值，制备地高辛标记Sry基因探针，对分选X、Y精子及常规精子标本进行RNA水平的精子荧光原位杂交分析。结果显示，荧光原位杂交测定分选X、Y精子及常规精子纯度分别为94.6%、93.3%、50.3%，与对应精子纯度比较差异不显著（P>0.05），杂交信号多出现在精子尾部中段。可见：建立的Sry基因探针FISH方法评价奶牛精子纯度鉴定结果准确可靠，为其他精子纯度评价方法提供可靠的技术支持。     

流式细胞仪在猪性别控制中的应用初探

在国内首次报道使用流式细胞仪对猪进行性别控制研究。猪精液通过流式细胞仪进行X、Y精子分离,分离精子经过数小时保存后,用于陆川母猪输卵管授精,最后产出健康仔猪。试验结果表明:①第1次(2005-10-14)精子分离的纯度为:X88%、Y83%;活力为X35%、Y21%。第2次(2006-01-13)纯度为:X70%,Y68%;活力为:X52%,Y36%。②该试验中母猪受孕率为25%,未受孕者仍然可在生产条件下继续繁殖。③受孕母猪(1头)产出健康仔猪5头,出生成活率100%,大小均匀,活力良好,哺乳期(28 d断奶)平均日增重与生产群极为接近(151.43 g1、48.93 g),但产活仔数低(生产群为8.4头/窝)。④仔猪雌性率为60%。试验结果初步表明:在该实验室现有条件下,使用流式细胞仪分离的X、Y精子,母猪通过输卵管受精可以产出健康仔猪;精子分离对仔猪哺乳期生长无明显影响;对性别比例有一定调控作用。     

马氏珠母贝精子质量形态评定中不同染色法染色效果的比较

为筛选出适宜于马氏珠母贝Pinctada martensii精子形态分析的染色方法,采用曙红Y和结晶紫染液对不同方法制作的马氏珠母贝精液抹片进行染色,并通过显微镜观察比较染色效果。结果表明：1）采用将精液先抹片后染色（0.8 mg/mL曙红Y染液）的方法时,精子头部着色不完全,染色效果不随染色时间的延长而改善,精子形态特征不明显,故该方法不适于精子形态检测;2）将精液与20 mg/mL的曙红Y染液等体积混合后抹片,精子头部着深红色,尾部着浅红色,精子各部分结构清晰,形态特征明显,背景干净,对比明显;3）用5 mg/mL的结晶紫染液对精液进行渗透染色时,精子形态染色特征明显,头部着深紫色,尾部着浅紫色,背景干净,可较准确地判断精子的形态特征;4）依精子形态对马氏珠母贝精子进行分类,并确定了主要的畸形类型及其特点,马氏珠母贝精子畸形主要集中在精子的颈部和尾部,头部畸形情况较少;5）采用两种染色方法判定的正常精子率之间无显著差异（P〈0.05）,数据稳定,因此,这两种染色方法均可用于马氏珠母贝精子形态的评价中。     

绵羊精子提取物对卵母细胞的孤雌激活作用

研究了绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞的孤雌激活作用,确定了绵羊精子提取物的最佳注射剂量,并将其孤雌激活效果与离子霉素联合6-DM AP法的激活效果进行了比较。结果表明,绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞有孤雌激活作用,最佳注射剂量为每个绵羊卵母细胞注入2~4 pL浓度5~6 m g/mL的绵羊精子提取物;绵羊精子提取物的孤雌激活效果与离子霉素联合6-DM AP法的激活效果差异不显著。     

单细胞电泳技术检测低温保存猪精子的DNA损伤

应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE),对冷冻解冻后猪精子DNA的损伤情况进行研究.结果表明,冷冻解冻会对猪精子DNA造成损伤,其彗星率与鲜精相比差异显著(P＜0.05);各组冻精之间,甘油添加量为2%～3%(v/v)时,冷冻对猪精子DNA造成的损伤最低,彗星率均低于其余各组(P＜0.05).     

应用逐步回归分析气象因素对杉木涩籽流行的影响

本文应用逐步回归分析47个影响杉木涩籽流行率的气象因素,并拟合预测模型。分析结果表明,本预测模型复相关系数达极显著水平,涩籽流行率与3月降雨量、7月相对湿度及8月降雨量呈正相关,与8月最高气温、3月日照时数、5月蒸发量、9月最高气温及7月蒸发量呈负相关。     

影响油菜高产的栽培因子研究

[目的]找出能通过充分发挥单株优势,提高油菜产量和质量,同时节省劳力、节约成本,适合大面积种植的栽培方式。[方法]对油菜品种"HRS-1"的播期、密度、施肥(N)做三因素二次回归正交旋转组合试验。[结果]播种期(X1)、密度(X2)和施肥(X3)对小区产量(Y)的数学模型为:Y=1443.45-578.25X1+642.87X2+174.94X3-588.42X1X2-195.47X1X3+106.41X2X3+556.36X12+99.61X22+302.36X32。3因素对产量的影响程度为:密度>播期>施肥。两因素互作效应分析表明:早播油菜的产量随密度的增加而增加,晚播油菜的产量随密度的增加而减少;早播油菜产量随施肥量的增加而增加,晚播油菜产量随施肥量的增加而减少。8月29至9月2日期间播种,密度为26130-31230株/hm2,施肥(纯N)为283.8-348.5kg/hm2时,平均产量可达3750kg/hm2。[结论]该研究为提高油菜产量提供了一定的试验基础。     

细鳞斜颌鲴精子活力观察

为了解细鳞斜颌鲴精子的生理特性,采用实验生态-显微观察方法研究了几种因子对细鳞斜颌鲴精子活力的影响.结果表明,精子能激活的pH范围为5.0～10.58,精子活力较好的pH范围为6.0～7.84;pH 6.9时精子激活率达（89.00±1.0）％、运动时间达25.00±2.65 s、寿命达30.67±2.08 s.精子在1.0～7.0 g/L葡萄糖溶液中均有一定比例被激活,在6.0 g/L葡萄糖浓液中激活率达（89.33±0.94）％、运动时间达25.67±1.25 s、寿命达33.67±0.94 s.精子在2～7 g/L NaCl及KCl溶液中均能激活,在5 g/L NaCl及KC1溶液中活力较好;精子在0.2～0.5 g/L MgCl2及CaCl2溶液中激活率较低,在0.1、0.6、0.7 g/L MgCl2及CaCl2溶液中出现凝集现象.精子在低温4℃下保存3h活力与鲜精基本相同.D-19和Saad稀释液能有效抑制精子运动,且重新被淡水激活后活力较好,可考虑作为精子冷冻保存用稀释液.     

不同pH人工精浆对性逆转金鳟雄鱼精子活力的影响

研究了性逆转金鳟雄鱼（XX,伪雄鱼）精子在不同pH的人工精浆（ artificial seminal plasma,ASP）溶液中的活动情况。结果显示,随着pH的提高精子活力不断增强。伪雄鱼精子在不同ASP—pHs中培养1h后,pH9．5～10．5培养组精子活力超过正常雄鱼精子（XY）活力水平,且正常雄鱼精子与pH8．5～9．5培养组的精子活力不存在显著性差异（P〉0．05）。将金鳟伪雄鱼精液培育在pH8．5～10．5的ASP中,0～180min内,pH10．5中的精子寿命和激活比例都最佳,180min之后的精子寿命超过80s,激活比例在90％以上,显著好于其他pH组（P〈0．05）。在低温储藏12h后,正常雄鱼精子在ASP—pH10．5溶液中寿命时间最长,为（284．05&#177;78．37）S,其次是同等稀释条件下的伪雄鱼精子寿命,其时间为（203．89&#177;43．68）s,正常雄鱼精液原浆精子寿命最短,为（122．19&#177;37．61）s。直接用金鳟伪雄鱼精液受精,发眼率和仔鱼上浮率仅为12．50％和8．77％,而通过pH10．5的ASP培养后,其发眼率和孵化率分别提高到了52％和49．95％。因此,在高pH的ASP中培养金鳟伪雄鱼精子能提高其活力和延长寿命。通过这种处理也能够显著的提高金鳟全雌和全雌三倍不育后代的育苗生产效率。