花生胚小叶对卡那霉素的敏感性研究

卡那霉素是植物遗传转化中常用的一种筛选剂。研究花生胚小叶对卡那霉素的敏感性,对建立利用卡那霉素筛选花生遗传转化的有效体系具有重要意义。以3个不同基因型花生弗落蔓生、麻油1-1和濮花23号为试验材料,通过计算胚小叶黄化率、丛生芽诱导率和生根数等,并观察外植体的生长状态,研究不同浓度卡那霉素对胚小叶生长发育、丛生芽分化和丛生芽生根阶段的影响,以期确定3个品种胚小叶各个分化阶段的适宜筛选浓度。结果表明,不同基因型花生对卡那霉素的敏感性不同,弗落蔓生、麻油1-1和濮花23号胚小叶丛生芽分化筛选浓度依次为:150mg/L、100mg/L和50mg/L;丛生芽生根筛选浓度分别为:弗落蔓生20mg/L、麻油1-1 20mg/L和濮花23号10mg/L。本研究筛选到不同品种胚小叶丛生芽分化和丛生芽生根阶段的适宜卡那霉素浓度,为以花生胚小叶为外植体的花生遗传转化阳性植株的筛选奠定了基础。     

叠氮化钠对花生下胚轴酯酶同工酶的影响

用不同浓度的叠氮化钠处理花生4个品种，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对花生下胚轴的酯酶同工酶谱进行测定。实验结果表明，NaN3对花生酯酶同工酶谱主要影响的酶带有M1、M和S1带。汕油27品种经0．5、1、5和10mmol·L－1NaN3处理，其酶谱出现新的酶带。     

"小粒黄"大豆子叶节丛生芽的诱导

为建立大豆子叶节高频再生体系,以"小粒黄"大豆子叶节为外植体,研究了萌发天数、6-BA及TDZ浓度对大豆子叶节丛生芽诱导的影响.结果表明: 随着萌发天数的增加丛生芽诱导率下降,萌发7 d的子叶节外植体对丛生芽诱导率最高,达到82.6%.附加不同浓度6-BA 和 TDZ的1/2MSB5的基本培养基上均能诱导出丛生芽,但丛生芽诱导率也不同,以1.5 mg·L-16-BA 和 0.2 mg·L-1 TDZ配比时,丛生芽诱导率最高,达到85.7%.     

香蕉丛生芽的试管继代保存

在室温16￣18℃和光照强度1000lx,每天24h光照的条件下,以经过1a低温保存的香蕉(MusaAAACavendish)种源材料(丛生芽)为实验材料,实验采用正交设计L(934),研究了无机盐、蔗糖、6-BA、IAA等4个因素对香蕉种质资源试管保存过程中丛生芽继代保存时间的影响,目的在于探讨能延长香蕉种源保存时间的培养基配方。实验结果表明,蔗糖浓度是决定芽增殖数量、芽高、根数及黄化的首要因素,使用高浓度蔗糖和较低浓度无机盐是推迟香蕉丛生芽发生黄化、延长保存时间的最主要技术措施。在实验9个处理中,以MS 蔗糖50g/L 6-BA1mg/L IAA0.1mg/L为配方的培养基,香蕉丛生芽继代保存时间可超过12个月。     

甜叶菊离体诱变与分子初检

以甜叶菊茎段为外植体,用不同浓度的 NaN3对其进行不同时间的处理,筛选出合适的离体化学诱变体系,并对该体系下的部分再生苗进行RAPD和SRAP检测。结果表明：NaN3处理的半致死剂量为9 mmol/L浸泡4 h,该处理下植株矮化、腋芽数减少;用2种分子技术对该处理下14株再生苗的进行检测,结果表明,共28.6％再生苗的DNA序列发生了一定程度的变异,这为使用NaN3对甜叶菊进行大规模的离体诱变奠定技术基础。     

胚中段为外植体的花生高效再生体系构建研究

参考幼叶、子叶为外植体诱导丛生芽的方法,利用花生种子胚生长旺盛的特性,以花生种子胚中段为外植体材料建立一个新植株再生体系。结果表明,在含3.0mg/L的6-BA的MS培养基上,培养30d可以诱导出丛生芽,诱导率达到92.5%;丛生芽转至1/2MS＋0.2mg/LIBA＋0.1mg/LNAA的培养基中培养2～3周,生根形成完整植株。     

大豆子叶节及苗期NaCl筛选试验研究

以NaCl为筛选剂,对5个大豆品种的子叶节诱导、丛生芽生根及大豆苗期的生长情况进行研究.结果表明:不同基因型大豆对NaCl的敏感性不同,同一基因型的不同部位对NaCl的敏感性也存在差异.最终确定了NaCl对子叶节分化、丛生芽生根以及苗期生长适宜的筛选浓度.大豆子叶节分化NaCl临界筛选浓度:吉农27和吉农17为225 ...     

负压和超声波处理对农杆菌介导的花生遗传转化效率的影响

为了提高根癌农杆菌介导的花生遗传转化效率,研究了不同强度的负压和超声波处理时间对外植体芽诱导率的影响以及对花生遗传转化的作用.结果表明,较低强度(抽拉30次)的负压处理和短时间(2min)的超声波处理对花生遗传转化有促进作用,虽然超声波处理延长了芽再生时间,但是有助于提高花生外植体芽点诱导率.     

6-BA浓度及基因型对大豆胚尖诱导丛生芽的影响

以吉林35、吉林47等5个大豆品种为材料,胚尖为外植体,研究不同浓度6-BA对丛生芽诱芽率和平均芽数的影响,同时测定吉林35在胚尖诱导丛生芽的过程中对潮霉素的耐受性.结果表明:3.0 mg·L<,-1>6-BA浓度下吉林35的诱芽率最高,综合考虑丛生芽诱芽率和平均芽数2个性状,吉林35更加适合于大豆胚尖再生系统;在遗传...     

氯化锂作为转基因大豆筛选剂的研究

以东农50大豆子叶节为材料,以大豆子叶节丛生芽黄化率和丛生芽高度为考察指标,确定氯化锂作为转基因大豆筛选剂的最佳浓度和筛选临界观察时间。在此基础上,对转基因大豆丛生芽进行GUS染色,并对转化植株进行PCR检测。通过对受体植株进行氯化锂叶片涂抹,确定适宜的表型筛选浓度。结果表明,延迟7 d进行氯化锂筛选,筛选浓度为60 mmol.L-1为宜,最佳筛选天数为10 d。抗氯化锂丛生芽的GUS染色阳性率为80%,确定叶片涂抹法的适宜筛选浓度为700 mmol.L-1,并且经氯化锂筛选得到的转基因植株后代可以正常生长发育。     

甜叶菊NaN3离体诱变技术体系的建立

采用NaN3对甜叶菊离体培养的茎段进行诱变处理,通过对各处理下的再生苗进行SRAP检测,建立其离体诱变技术体系。结果显示,较低浓度的NaN3(3 mg/L)诱变处理对再生苗伤害较小,随着诱变浓度的增加(3～7 mg/L),茎段死亡率也逐渐增加;SRAP分子检测发现,再生苗的DNA序列发生了不同程度的多态性变化,最高多态性比率为54.2%(3 mg/L处理20 d)。结果表明,较合适NaN3离体诱变技术体系为3 mg/L处理20 d。     

蝴蝶兰NaN_3离体化学诱变及再生植株RAPD检测

采用NaN3对离体培养的蝴蝶兰类原球茎薄切片进行诱变处理,研究不同浓度和不同处理时间对类原球茎薄切片生长的影响,并对再生苗DNA进行了RAPD检测。结果表明,NaN3对类原球茎薄切片生长产生重要影响,部分薄切片白化或褐化死亡,再生类原球茎生长受到抑制,再生苗数量减少,部分再生苗畸变,叶片皱缩、变厚。10条RAPD引物的PCR检测发现,再生苗DNA序列发生了一定程度的变异,产生RAPD图谱带型多态性。根据以上结果认为,本体系合适的NaN3诱变剂量为6mmol/L,处理2d。     

甜叶菊多倍体离体诱导技术体系的建立

以甜叶菊茎段为外植体,用不同浓度的秋水仙素在试管苗茎段再生植株过程中进行不同时间处理,探讨适合于甜叶菊离体多倍体诱导的最佳秋水仙素处理时间和浓度,初步建立甜叶菊离体诱导多倍体的技术体系。结果表明,秋水仙素对甜叶菊植株形成影响较大,秋水仙素处理的最佳剂量为0.1%处理3 d,再生植株总数高且多倍体比率达42.3%;同时,再生苗生根也受到了一定影响;多倍体苗叶片厚实、颜色较深、植株矮化,气孔增大,单位面积气孔数较少;多倍体细胞核体积增大,染色体数加倍。     

Mass multiplication of Bixa orellana L. through tissue culture for commercial propagation

To reduce the time period for in vitro regeneration in annatto (Bixa orellana L.), a highly efficient two-stage plant regeneration protocol had been developed that can be used commercially. Different types of explants: nodal shoot tips, shoot tips and single nodes from in vitro grown seedlings were inoculated onto the Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with different concentrations and combinations of plant growth regulators. Highest number of shoot buds was obtained when nodal shoot tip explants were inoculated onto MS medium supplemented with 31.1 μM N⁶-benzyladenine (BA) and 14.7 μM phenylacetic acid (PAA). PAA in combination with BA exhibited a synergistic effect on shoot multiplication and elongation. Sub-culturing of the shoots onto the MS medium supplemented with BA (13.3 μM) and PAA (7.3 μM) produced elongated shoots. Elongated shoots when inoculated onto the MS medium supplemented with 4.9 μM indole-3-butyric acid (IBA) produced optimal rooting. The rooted plantlets were hardened and their field survival rate after 6 weeks time was 73%.     

BA与NAA对药用黄花石蒜鳞片组织培养的影响

以野生药用植物黄花石蒜(Lycoris aurea Herb.)为材料,选用其鳞茎的内层鳞片、中层鳞片2个不同部位的外植体,研究MS培养基中9种不同BA与NAA的浓度配伍对黄花石蒜鳞片的组织培养效果。结果表明:MS+10mg/L BA+5mg/L NAA+0.7%琼脂+3%蔗糖,有利于内层鳞片和中层鳞片外植体不定芽、不定根的发生,产生褐变量也较少,其培养效果显著较好。在培养基中BA、NAA的浓度分别高于或分别低于10、5mg/L,其培养效果均显著较差。相关分析表明,2种外植体相同BA与NAA浓度配伍的培养效果为极显著正相关,这进一步说明,对一种外植体培养效果较好的BA与NAA的浓度配伍对另一种外植体的培养效果仍然较好。多重比较与相关分析均说明,在培养基中BA、NAA的浓度分别为10、5mg/L对内层鳞片外植体和中层鳞片外植体的培养效果均较好。     

二氧化氯对剑麻外植体材料消毒的应用研究

为建立高效、环保的剑麻无菌繁殖技术,以H.11648剑麻的珠芽为外植体,以1 000 mg/L HgCl2溶液对外植体材料浸泡消毒灭菌20 min作对照,以不同浓度的ClO2溶液对外植体材料进行不同时间的浸泡消毒灭菌试验。结果表明,500~3 000 mg/L ClO2溶液对剑麻珠芽外植体浸泡消毒20~50 min,可显著降低培养材料的污染率,外植体生长好,腋芽萌动快,腋芽萌发率在14.175%~47.335%,显著高于对照的4.340%,最初3次继代的增殖率为5.685~11.325倍,显著高于对照的3.040倍。剑麻珠芽外植体材料消毒灭菌的最适宜方法是1 000 mg/LClO2溶液浸泡消毒30 min。     

黄皮白肉火龙果快繁体系的建立

黄皮白肉火龙果,又名麒麟果,为建立其快繁体系,本研究选取种子萌发长出的茎段为外植体,研究其不同消毒时间、不同浓度激素配比对其愈伤组织及芽的诱导、增殖继代、根生长的影响。结果表明:用无水乙醇灭菌40 s后,再用5%次氯酸钠溶液灭菌10 min,种子萌发率最高可达97%。愈伤组织及不定芽诱导培养基最佳配方为1/2 MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,芽的诱导率最高可达97%;利用MS+2.0 mg/L 6-BA+3.0 mg/L NAA培养基进行增殖、继代培养的效果最佳,增值系数最高为4.6;在MS培养基中添加2.0 mg/L IBA,可最大程度地促进根的生长。      

Growth optimization and organogenesis of Gerbera jamesonii Bolus ex. Hook f. in vitro

Regeneration potentials in Gerbera jamesonii Bolus ex. Hook f. from tissues culture system was studied using leaf, petiole and root explants. In vitro regeneration, callus induction and root formation were optimized by manipulation of growth regulators during organogenesis. Various kinds of plant growth regulators such as 6-Benzylaminopurine (BAP), alpha-Naphthalene acetic acid (NAA), 2, 4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), Indole-3-acetic acid (IAA), Indole-3-Butyric acid (IBA), N6-[2-Isopentenyl]adenine (2iP), Kinetin and Zeatin were used to initiate cultures. These plant growth regulators were added to Murashige and Skoog medium in different combinations and concentrations. Adventitious shoots were obtained from petiole explants cultured on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 2.0 mg L(-1) BAP and 0.5 mg L(-1) NAA. Effectiveness of shoot regeneration medium, type of growth regulator used and duration of induction period were investigated. Leaf explants cultured on MS medium supplemented with 1.0 mg L(-1) BAP and 2.0 mg L(-1) 2, 4-D showed the best results for callus induction. Root explants were found to be non-regenerative in all experiments conducted. Petiole segment was identified as the best explant for regeneration of this species. Regenerated plants were rooted on Murashige and Skoog basal medium. Plantlets were then transferred to field with 75% survival rate.     

海南甘薯主栽品种再生体系的优化

本研究以海南甘薯主栽品种‘心香’、‘广薯87’、‘川山紫’、‘宁紫薯1号’、‘薯绿一号’、‘高系14’和‘三角宁’为材料,从外植体的选择、不同消毒方案、培养基配方和防褐化剂筛选等方面进行研究,建立一套适合热带地区甘薯主栽品种的脱毒快繁优化再生体系。结果表明：侧芽增殖率与存活率最高;在不同的外植体消毒处理中,依次用75%酒精消毒60 s,2% NaClO消毒15 min,以及0.1% HgCl₂消毒15 min的污染率最低;最佳的生根培养基配方为：MS+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L GA₃;茎长生长最快的培养基配方为：MS+0.1 mg/L NAA+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA₃;干重增长最快的培养基配方为：MS+0.1 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA₃;在培养基中加入5~6 g/L硫代硫酸钠和1.25 g/L聚乙烯吡咯烷酮能有效地抑制外植体的褐变。