中国枣属植物亲缘关系的SRAP分析

 【目的】从分子水平研究中国枣属植物的系统发育,探讨枣属属下种间及种下分类单元间的亲缘关系,为自然的中国枣属植物分类系统的建立提供新的分子证据,同时为中国枣种质资源的保护和利用提供科学依据。【方法】利用SRAP标记方法对原产中国的枣属全部14个种、11个枣品种和1个外类群的基因组DNA进行分析。【结果】筛选出的19对SRAP引物组合对26份供试材料共扩增出580条DNA带,其中570条为多态带（占98.28%）,平均每个引物扩增多态性带30条。26份材料间的遗传相似系数变化范围为0.22～0.99。UPGMA聚类表明,26份材料在相似系数0.38处被划分为6个类群。【结论】SRAP标记技术能很好地用于枣属植物亲缘关系的研究,枣和酸枣应该作为1个种处理,可进一步分为2个亚种,给予新学名为原亚种枣Ziziphus jujuba Mill. subsp. jujuba;亚种酸枣Ziziphus jujuba Mill. subsp. spinosa（Bunge）J.Y. Peng,X.Y.Li et L.Li;蜀枣、山枣和大果枣应该起源于一个较近的共同祖先,蜀枣和山枣应该归并为1个种,合并后以山枣学名为准;原亚种枣下不宜设变种。     

枣树品种、品系及其近缘种的RAPD分析

 对 2 5个枣品种、品系及其 2个近缘种酸枣和毛叶枣进行了RAPD分析 ,采用类平均法进行聚类并建立了树状图。首次从DNA水平上揭示了枣属中这 3个重要种之间的亲缘关系 ;重点探讨了几组枣品种和品系的亲缘关系 ;初步建立了 2 5个枣品种、品系及酸枣和毛叶枣的RAPD指纹 ,发现仅用OPE1、OPE9和S130这 3个引物就可将其全部分开。     

枣和酸枣的分类学研究

对长期争议的枣和酸枣的分类地位、学名及其次级划分进行了研究。通过形态、解剖和生境习性比较，数量性状的统计分析，ＤＮＡ多态性检测及有关分类学资料考证，认为二者存在多方面显著差异，宜处理为两个独立种。在枣的１６个曾用名中ＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉｌｌ．是唯一合法可用的；而酸枣做为独立种其５个曾用名均不合法，鉴于其与枣近缘且果肉大多偏酸，给予了新名Ｚ．ａｃｉｄｏｊｕｊｕｂａＣ．Ｙ．ＣｈｅｎｇｅｔＭ．Ｊ．Ｌｉｕ。另据全国范围的实地考察及文献和标本考证，认为长期来被列为枣一变种的无刺枣Ｚ．ｊｕｊｕｈａＭｉｌｌ．ｖａｒ．ｉｎｅｒｍｉｓＲｅｈｄ．不能成立，应予以归并；同时在酸枣和枣下确立了５个新变型和３个新等级。     

四倍体冬枣和酸枣组织培养的研究

为了研究枣四倍体在离体条件下的表现,以四倍体冬枣和酸枣组培苗为试材,建立了冬枣和酸枣四倍体的组培快繁体系,并与其二倍体组培比较。结果表明:四倍体冬枣的最适增殖和生根培养基分别为MS+BA 3.5mg/L+IBA 0.2~0.6 mg/L和1/2MS+IBA 2.0 mg/L,增殖系数3.2,生根率100%;四倍体酸枣的最适增殖和生根培养基分别为MS+BA 2.5 mg/L+IBA 0.2~0.6 mg/L和1/2MS+IBA 1.0 mg/L,增殖系数3.6,生根率100%。经比较,冬枣和酸枣四倍体的增殖能力、生根能力和抗玻璃化能力均强于二倍体。     

提高冬枣和酸枣组培苗诱变效率的几种途径

以冬枣和酸枣组培苗丛芽和茎段为试材,以秋水仙素为诱变剂,研究了预培养、暗培养、二甲基亚砜和活性炭对秋水仙素诱导多倍体效果的影响。结果表明:将诱变处理的组培苗丛芽和茎段进行4d的预培养、15d的暗培养,以及在培养基中添加1 5g/L的活性炭或1 0%二甲基亚砜均可有效提高诱变频率,茎段诱变率最高达26 67%,丛芽诱变率最高达36 67%。     

枣树组织培养技术应用现状及展望

概述了近年来枣树组织培养过程中基本培养基的选择及激素配比、褐化及污染、试管苗炼苗与移栽问题的产生及对策、利用组培技术脱除枣疯病病原体等研究的主要进展,提出在枣树组织培养技术的应用展望,即:应深入研究枣树细胞及原生质体培养、胚及胚乳培养、突变体的选育、种质保存和次生代谢物的研究,并尽快应用于枣树的遗传育种工作,实现枣树优质新品种的培育和遗传图谱的构建.     

赞皇大枣枣疯病植原体分子分类

 【目的】枣疯病是一种重要的植原体病害,本试验旨在明确惟一已知的天然三倍体品种--赞皇大枣枣疯病植原体的分类地位,为赞皇大枣枣疯病植原体分类研究提供参考。【方法】利用植原体16S rDNA通用引物对赞皇大枣枣疯病病株的DNA进行PCR扩增和克隆测序,通过BLAST比对进行序列分析,利用临位相连法构建16S rDNA系统演化树,并应用DNAstar软件进行虚拟RFLP分析。【结果】获得的赞皇大枣枣疯病植原体16S rDNA序列长度为1 850 bp（GenBank登录号GU184180）,包括1 529 bp的16S rDNA基因全序列、264 bp的邻近间隔区序列及57 bp的23S rDNA部分基因序列。同源分析表明,赞皇大枣枣疯病病原16S rDNA序列与其它植原体的相似性在87%—98%,其中与榆树黄化 Elm yellows（EY）(GenBank登录号l33763)最高相似性为98%;与大多数二倍体枣品种的植原体序列相似率达99%以上;其虚拟RFLP图谱与4个16SrⅤ亚组的代表序列图谱差异显著,赞皇大枣枣疯病植原体延伸因子tuf基因的序列(GenBank登录号JN001985) 比对结果表明,与其它亚组序列同源性为52.3%—76.7%。【结论】三倍体赞皇大枣枣疯病病原属于榆树黄化组(16Sr V),并与其中的B亚组亲缘关系最近;与二倍体品种的病原分类地位一致,说明枣疯病植原体在系统进化上比较保守。     

枣雄性不育种质半同胞子代的遗传多样性分析

以280份种质,包括枣的雄性不育种质JMS2、‘交城五号’枣、‘邢16’酸枣、JMS2ב交城五号’的56个子代、JMS2ב邢16’的96个子代以及JMS2自然授粉获得的125个子代为材料,采用SSR分子标记技术研究枣半同胞家系的遗传多样性。10对SSR引物在277份子代中检测出35个等位基因,观测等位基因数量(Na)、有效等位基因数量(Ne)、香侬指数(I)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、基因遗传多样性(h)和基因分化系数(Fst)分别为3.500,2.108 7,0.819 2,0.573 1,0.471 4,0.470 5和0.096 0,表明277个子代的遗传多样性水平一般。在以JMS2为母本的3个子代群体中,未知父本的自然杂交子代群体遗传多样性最为丰富,I、Na和Ne分别为0.749 5,3.500 0,2.029 2。JMS2ב邢16’子代群体的遗传多样性(Na=2.30,Ne=2.067 8,I=0.722 0)小于自然杂交子代群体,但大于JMS2ב交城五号’子代群体(Na=2.3,Ne=1.829 3,I=0.615 9)。JMS2自然授粉子代可能存在多个父本,JMS2与酸枣‘邢16’较JMS2和‘交城五号’的亲缘关系远,双亲亲缘关系远和多个父本授粉可增加JMS2半同胞子代的遗传多样性。本研究可以为进一步评价和利用枣半同胞家系提供借鉴参考。     

枣树基因组DNA提取及其RAPD体系优化

以不同生长期的枣和酸枣为研究对象,采用CTAB法提取枣基因组DNA;通过单因素5水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了枣和酸枣RAPD技术最优体系,即25μl反应体系中各组分含量为10×Taq Buffer+KCl 2.5μl;Taq DNA聚合酶0.04 U/μl;MgCl22.0 mmol/L;模板DNA2 ng/μl;引物0.3μmol/L;dNTP为0.2 mmol/L。适宜的扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃循环变性50 s,36℃退火50 s,72℃延伸1.5 min,38个循环;72℃延伸10 min。     

枣果实发育过程中游离单糖含量动态研究

采用HPLC方法和碘量法对冬枣和金丝小枣果实中游离单糖的动态变化进行了测定。结果表明:枣中的游离单糖有葡萄糖、果糖、半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖。在枣果发育的各个阶段均以果糖所占比例最大,其次是葡萄糖和半乳糖,鼠李糖和阿拉伯糖含量很低;果糖、葡萄糖和半乳糖含量在枣果发育前期逐渐增加,临近白熟期达最高值,随果实着色成熟又有所下降;枣果游离单糖中的酮糖只有果糖,醛糖主要为葡萄糖和半乳糖,各约占50%,另有少量的鼠李糖和阿拉伯糖。     

水培方法在枣无菌繁殖系外植体建立中的应用

试验以婆枣为试材,应用休眠枝水培的方法在冬季获得外植体,旨在延长枣树组培试验中外植体的取材时间。试验结果表明:冬季水培休眠枝条的适宜时间为12月份至早春萌芽前;最佳水培枝条类型为一年生枝,枝条粗度(直径)在0.6~1.2 cm左右,剪截枝段长度30~40 cm左右。此方法打破了组织培养试验中生长季采样的限制,大大延长了外植体的采样时间,给试验者提供了极大便利。     

阿克苏市5个枣引种品种叶绿素荧光特征比较

测定比较了阿克苏市5个枣引种品种的初始荧光(Fo)、最大荧光(Fm)、PSⅡ最大光能转化效率(Fv/Fm)和PSⅡ最大光能转化潜力(Fv/Fo)4个叶绿素荧光参数随太阳总辐射、空气温度和空气相对湿度变化的日变化以及不同作用光强下从初始荧光上升到最大荧光一半所需时间(T1/2)的变化特征.结果表明:5个枣品种的叶绿素荧光参数Fv/Fm、Fv/Fo、Fo、Fm的品种间差异均达到了极显著水平(P＜0.001),而且在时间序列上Fv/Fm、Fv/Fo、Fo和Fm也均表现为差异极显著(P＜0.001);骏枣、金丝小枣的Fv/Fm值全天保持较高水平,灰枣、赞皇大枣的Fv/Fm日均值处于较低状态,且赞皇大枣的Fv/Fm和Fv/Fo日均值显著低于其它品种;除骏枣、金丝小枣的叶绿素荧光参数T1/2下午相比上午变化不是很明显外,其它品种均有不同程度的降低,表明下午的强光、高温和低空气湿度使得PSⅡ活性下调,PSⅡ光合电子传递链受阻,从而发生了光抑制.测试品种耐光抑制能力的强弱为:骏枣耐光抑制能力最强,金丝小枣、羊角枣其次,灰枣、赞皇大枣耐光抑制能力最弱.     

冬枣、临猗梨枣果实发育期K、Ca、Fe、Zn含量变化

对冬枣和临猗梨枣果实发育期K、Ca、Fe、Zn含量的变化规律进行研究,进一步明确矿质元素对枣果实品质的影响,旨在为枣树施肥和品质调控提供依据,结果表明:果实发育期间果实内4种矿质元素含量大小顺序为K>Ca>Fe>Zn;K在整个枣果的发育过程中维持较高水平,在开花坐果期含量最高,之后缓慢下降;Ca、Fe、Zn含量在果实发育前期较高,随果实发育呈下降的趋势。     

枣、酸枣不同部位花粉发芽率的研究

以月初、酥枣2个枣品种和酸枣为试材,采用离体培养的方法结合显微镜镜检,对树冠不同部位花的花粉发芽率进行了研究。结果表明：枣及酸枣树冠不同方位花的花粉发芽率不同,发芽率由高到低依次为：南部外围、南部内膛、北部外围、北部内膛,多重比较差异极显著;不同枝龄花的花粉发芽率由高到低依次为：多年生、二年生、一年生,多重比较差异极显著;枣吊不同节位花的花粉发芽率中部的第3、4、5节位花粉发芽率极显著高于基部的第1、2节位和顶部的第6、7节位;酸枣、酥枣同一花序不同级次花花粉发芽率由高到低依次为零级花、1级花、2级花,而月初次序为1级花、零级花、2级花、3级花,差异均达极显著水平。     

培养环境对枣组培微嫁接的影响

[目的]建立一套高效的枣组培微嫁接体系。[方法]以感染枣疯病的婆枣组培苗(以下简称染病苗)为砧木,以冬枣组培苗茎段为接穗,研究若干环境因子对枣组培微嫁接成活率的影响。[结果]将枣组培微嫁接苗置于蔗糖浓度为50 g/LMS无激素培养基中的成活率较高。适宜的培养基pH值为6。采用不同封口材料控制培养瓶内湿度的研究表明,棉塞和单层封口膜封口可保持瓶内湿度,并有利于微嫁接苗的成活。微嫁接苗在28℃进行培养较为适宜。在适宜条件下枣组培微嫁接的成活率最高,达33.3%。[结论]培养基蔗糖浓度、pH值、培养温度和湿度均会影响枣微嫁接苗成活率。     

茶壶枣离体多倍体诱导关键技术研究

目的离体多倍体育种是枣树育种的重要方法,对其关键技术的研究有利于建立和完善枣树离体多倍体育种体系,加快枣树多倍体种质的创制。方法以茶壶枣无菌叶片为材料,将预培养不同天数（7 ~ 20 d）的叶片固定后制成石蜡切片,进行细胞学观察以确定适宜的预培养时间。在此基础上,将叶片不定芽再生技术与秋水仙素染色体加倍技术相结合,在叶片预培养8、9、10、11 d后,分别用70和90 mg/L的秋水仙素处理48和72 h,并对处理后得到的不定芽进行流式细胞术倍性检测。结果通过对叶片最佳预培养时间的细胞学研究可以得出,茶壶枣无菌叶片在预培养8 ~ 9 d时,分生细胞的分裂能力最强,且未出现分化现象,在此时期用秋水仙素对叶片进行处理,可大大提高诱导率,并且可以有效避免嵌合体和混倍体的出现。染色体加倍试验发现,在预培养8 d后,用70 mg/L的秋水仙素处理72 h,其诱导率最高,达4.11%,并成功获得8株多倍体植株。通过流式细胞术确定这8株多倍体均为纯合四倍体。结论本研究探索出了将茶壶枣叶片不定芽再生体系与秋水仙素染色体加倍技术相结合,人工诱导茶壶枣多倍体的技术方法。      

基于SSR标记的255个枣品种亲缘关系和群体遗传结构分析

【目的】枣原产中国,种质资源丰富。对来自中国22个省区不同用途的255个枣品种进行SSR分析,揭示这些不同产地来源的枣种质资源之间的亲缘关系和群体遗传结构,为枣种质资源的科学管理和分子标记辅助育种提供参考。【方法】利用改良CTAB提取供试枣种质的基因组DNA,以前期枣基因组测序挖掘出的SSR引物为基础,进行高效率引物筛选,并利用SSR分子标记技术对255份枣种质资源的基因组DNA进行PCR扩增,然后利用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染后显色。根据条带有无统计数据,计算出多态性位点百分率（PIC）,用NTSYS软件进行UPGMA聚类分析;利用Structure软件分析群体遗传结构,计算出最适群体数目,构建遗传结构图。【结果】从64对SSR引物中筛选出23对高效率SSR引物,在供试材料中共检测出117个多态性位点,各引物扩增的多态性位点数为2-10条,每对引物平均扩增多态位点数为5.09个,PIC值变幅为0.359-0.727,平均为0.548,这些多态性引物可应用到其他枣种质资源的研究中;建立了只需1-2个标记就可鉴别出来的部分枣品种的SSR指纹,可用于这些品种的快速分子鉴定;255个枣品种的聚类分析将所有枣品种分为15个亚类,包括4个大类和11个小类,不同品种间的相似系数范围0.71-1.00,其中北京花生枣单独聚为一类,与其他枣品种关系较远;‘奉节鸡蛋枣’和‘溆浦鸡蛋枣’、‘陕西奶枣’和‘天津大马牙枣’的相似系数均为1.00;结合聚类图、供试品种的用途和原产地分析,不同枣品种间的亲缘关系与品种原产地有一定相关性,但和品种用途没有显著相关性。群体结构分析中,通过绘制K与ΔK的关系图,K=15时,ΔK最大,据此将255个枣品种也同样划分为15个群体,与聚类分析结果基本一致;进一步分析表明,各群体中大部分品种血缘关系比较单一,较少品种含有其他类群的遗传成分。总体看,山西或陕西的枣品种出现在绝大部分居群中,说明这两个省的资源在不同群体间的基因交流中发挥了重要作用;南方栽培区域中来自湖南的枣品种形成了相对独立的居群,可能是其起源相对单一,且在长期栽培过程中和其他产地枣品种间基因交流较少所致。上述结果表明,供试枣品种中与来源区域相关性明显的品种由相同地域内枣品种演化而来,而另一部分与来源产地相关性不明显的品种则是由不同区域间品种经过频繁的基因交流和重组选育而来,融合了不同区域品种的特点,从而没有了明显的区域特征。【结论】不同地理环境在枣品种的群体进化中发挥了较重要的作用,影响了不同产地间枣种质资源的遗传结构组成。     

枣不同品种果核性状研究

枣核是鉴定品种的重要特征,对冬枣、榆次团枣、婆婆枣、紫圆枣等37个枣品种和1个毛叶枣品种台湾青枣的果核和种仁的外部形态指标进行了详细地描述和测量,以研究枣不同品种果核、种仁各数量指标间的相关性,得出核纵径和核喙长的线性方程Y=-0.064 1+0.184X。     

丛枝菌根真菌在新疆枣苗生长、营养和水分利用中的作用

红枣原产于中国大陆,现在世界各地均有分布。新疆红枣新疆红枣果粒硕大,品质优良,是当地具有特色的林果产品。但是,新疆干旱严重,土壤贫瘠,严重影响枣树的生长发育和枣果产量。丛枝菌根真菌(AM真菌)与红枣根系有较强的亲和力,形成菌根后可促进枣苗生长、改善枣苗营养、提高水分利用和增强抗病性。在生产实践中,苗床接种AM真菌,生产菌根枣苗有益于提高红枣产量品质。     

长白柳种质试管保存研究

[目的]筛选出长白柳嫩茎离体培养各阶段的培养基。[方法]以长白柳嫩茎基部直接再生形成的丛生芽团为试材,利用＂延缓生长＂的方法在试管内对长白柳进行种质保存,应用均匀设计法探讨了影响长白柳丛生芽团试管保存的主要因子和水平,筛选最适于长白柳丛生芽团试管保存的培养基。[结果]长白柳最适宜的丛生芽团试管保存培养基为：N-68＋根皮苷3.20 mg/L＋KT0.70 mg/L,保存43个月生长率仅为0.97%。对保存前后的芽苗生根情况对比结果表明,保存后的芽苗生根速度快,生根率达99.6%以上,较未保存前的生根率99.0%高。[结论]在试管内采取＂延缓生长＂法保存长白柳丛生芽团是切实可行的新方法。