旋毛虫ES抗原致鼠胸腺淋巴细胞凋亡的初步研究

本试验首次以体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞为实验对象,加入旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫ES抗原做刺激物,通过(AO/EB)双荧光染色法和流式细胞术对鼠胸腺淋巴细胞的凋亡水平的检测,进而证明旋毛虫肌幼虫ES抗原能够诱导鼠淋巴细胞发生凋亡.     

旋毛虫排泄/分泌抗原研究进展

旋毛虫病由于其对人、畜危害严重历来被人们所重视 ,其免疫防制是当今国内外学者研究的重要方向。通过对旋毛虫几种抗原的对比研究 ,排泄 /分泌抗原效果最好 ,它具有双重的免疫学功能 ,成为众多学者研究的热点 ,人们对排泄 /分泌抗原成分进行了大量研究。作为蛋白质其主要成分是三种糖蛋白 (分子量分别为4.5万 ,4.9万 ,5.3万 ) ,他们可以发生免疫学交差反应。目前人们已经获得了编码这三种蛋白的基因序列 ,并通过分子生物学技术对其基因进行克隆和表达 ,将表达蛋白用于旋毛虫病的防制。本文介绍了旋毛虫排泄 /分泌抗原的组成成分与功能 ,以及检测抗原和免疫原方面研究状况。     

鸭胸腺细胞自然凋亡的电镜观察

应用透射电镜了鸭胸腺细胞自然凋亡的超微结构变化。结果表明,胸腺细胞发生凋亡时,表现为染色质凝聚、边集,细胞核呈现新月形、“C”形、花瓣状、圆环状或圆斑状;宜面内质网、线粒体、溶酶体先是大量增生,之后粗面内质网包裹各种细胞成分成自噬体并与溶酶体融合,再逐渐演变成凋亡小体;线粒体在凋亡小体内发生肿胀和空泡化;最后,凋亡细胞及凋亡小体被巨噬细胞添噬、清除。     

鹅胸腺细胞自然凋亡的电镜观察

应用透射电镜观察表明，鹅胸腺细胞发生凋亡时，细胞经历一系列的形态变化。其中，细胞核的变化最为明显，表现为染色质凝集、边集，呈现为新月形、C字形、花瓣状、圆环状或圆斑状。部分凋亡胸腺细胞可见线粒体轻度增生现象。至凋亡后期，胸腺细胞由其膜性结构分隔、包裹表成凋亡小体；最后，凋亡小体或凋亡细胞被巨噬细胞吞噬、清除。     

牛磺胆酸对小鼠胸腺细胞凋亡影响机理的研究

探讨牛磺胆酸对小鼠胸腺细胞凋亡影响的机理。采用流式细胞术检测了牛磺胆酸对凋亡过程中磷脂酰丝氨酸外翻的影响;采用分光光度法检测了牛磺胆酸对凋亡特异性蛋白酶Caspase-9、Caspase-3活性变化的影响。结果显示,高剂量牛磺胆酸可显著抑制磷脂酰丝氨酸外翻,抑制细胞凋亡,而低剂量牛磺胆酸则可显著提高caspase-9、caspase-3活性,诱导细胞凋亡。牛磺胆酸对小鼠胸腺细胞早期凋亡呈现抑制作用,而在凋亡中后期则呈凋亡诱导作用。     

旋毛虫肌幼虫可溶性抗原、排泄分泌抗原的电泳分析

本文报道了应用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）电泳及二维电泳（ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对旋毛虫肌动虫排泄分泌（ＥＳ）抗原和肌幼虫可溶性抗原的分析结果。肌幼虫ＥＳ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后用考马斯亮蓝染色蛋白质，结果显示１６条蛋白带，分子量范围２１～８０ＫＤ，其中主带９条。ＩＥＦ电泳后分别用ＰＡＳ染多糖、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染蛋白质、Ｎｉｌｅ＇ｓ蓝染脂、醋酸ａ－萘酯／坚固蓝染酪酶同工酶，结果肌幼虫ＥＳ抗原分别显示１６，２６、７及０条带；肌幼虫可溶性抗原分别显示２１、３８、４及１１条带。二维电泳后用考马斯亮蓝Ｇ－２５０染色多肤斑点，结果ＥＳ抗原显示多肽斑点６１个；肌幼虫可溶抗原显示１２２个多肽斑点。     

人工感染鸡包涵体肝炎病毒雏鸡胸腺细胞凋亡的检测

应用原位末端标记方法对人工感染鸡包涵体肝炎病毒雏鸡的胸腺细胞的凋亡进行检测，结果表明，鸡包涵体肝炎可引发胸腺细胞的凋亡，多数凋亡阳性细胞核结构完整，核内有数量不等的阳性颗粒，少部分凋亡阳性细胞核破碎或核浓缩；HE染色光学显微镜下观察，多数坏死的胸腺细胞属细胞凋亡。采用原位末端标记法可检测到早期的凋亡细胞。     

旋毛虫肌幼虫排泄／分泌物抗原的研究

为了研究在特定条件下经体外培养的肌旋毛虫幼虫排泄／分泌物（ES）抗原的特性,通过体外培养将所收集到的ES抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、琼脂扩散试验进行分析。结果经SDS—PAGE分析出现了比较明显的2条蛋白带,其分子量为45ku、49ku;经琼脂扩散试验ES抗原与犬旋毛虫阳性血清出现了明显清晰的沉淀线,而与犬蛔虫阳性血清、犬绦虫阳性血清之间未出现沉淀线,ES抗原具有较强的特异性。表明研究结果为开展ES抗原的分子生物学的研究、分子生物学基因工程苗的研制打下了良好的基础。     

新城疫病毒F48E8体内诱导鸡胸腺淋巴细胞凋亡的研究

利用光镜、透射电镜、凝胶电泳和原位末端标记技术(TUNEL)对鸡新城疫病毒(NDV)F48E8株在体内诱导鸡胸腺淋巴细胞的凋亡情况进行了观察和检测,以期探讨NDV的致病机制。经NDV感染后,鸡胸腺淋巴细胞呈现典型的凋亡特征,感染组胸腺的淋巴细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。结果表明:NDV标准强毒F48E8株可以在体内诱导胸腺淋巴细胞凋亡,由此所致的免疫抑制可能是NDV致病的重要原因。     

应用旋毛虫P53和P49 ES重组抗原建立的ELISA方法检测血清抗体的比较研究

通过大肠杆菌表达系统表达编码旋毛虫53kDa、49kDa ES基因重组蛋白P53、P49,这两种蛋白均可被感染旋毛虫(T.spiralis)小鼠阳性血清识别,应用重组蛋白P53和P49建立的两种间接ELISA检测感染鼠血清,探讨相关抗体消长规律及不同攻虫量血清抗体阳性时间差异.结果表明,血清相应抗体水平随感染时间的延长而增高,分别于27 d和31 d达到峰值,之后进入稳定期;不同数量T.spiralis攻虫后,各时期抗体阳性检出率P49-ELISA均优于P53-ELISA.综合敏感性和特异性,P49基因重组蛋白的敏感性和特异性更为适合用作检测旋毛虫病的理想抗原,并可应用于早期诊断,适合用于ELISA检测试剂盒的建立.     

旋毛虫肌幼虫期胞外囊泡对小鼠免疫保护作用

本试验通过差速超速离心法获得旋毛虫肌幼虫期胞外囊泡(Trichinella spiralis muscle larvae extracellular vesicles,Ts-ML-EVs),经透射电镜观察、纳米颗粒追踪分析、流式细胞术和Western blot鉴定。选择6～8周龄的健康雌性BALB/c小鼠,随机分为4组,每组8只。试验设计为PBS对照组(PBS组)、佐剂对照组(PBS+佐剂组)、旋毛虫肌幼虫期排泄分泌产物免疫组(Ts-ML-ES+佐剂组)以及旋毛虫肌幼虫期胞外囊泡免疫组(Ts-ML-EVs+佐剂组),分别取相应抗原与佐剂等体积混合采用多点皮下注射方式免疫小鼠。首免后第2,4周各加强免疫1次,剂量不变。三免后2周,每只小鼠灌胃300条旋毛虫肌幼虫,灌胃后6 d每组取2只剖杀,统计旋毛虫成虫减虫结果;攻虫35 d后所有小鼠全部处死,计算肌幼虫减虫率。每次免疫前、攻虫前以及处死前眼眶采血收集血清并保存,统一进行ELISA分析。结果显示：成功获得Ts-ML-EVs,随着免疫次数增加,小鼠血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgA和IgE抗体水平均显著上升,在三免后2周达到...     

Ghrelin对雌激素诱导小鼠胸腺细胞凋亡的抑制作用

6周龄BALB/c雌性小鼠80只,分为4组：雌激素＋Ghrelin组、雌激素＋生理盐水组、生理盐水组、空白对照组。雌激素＋Ghrelin组首先隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇（0.1mg/只）2周,然后采用相同方法注射Ghrelin（120μg/只）2周;雌激素＋生理盐水组首先注射苯甲酸雌二醇2周,然后注射生理盐水2周;生理盐水组注射生理盐水4周;空白对照组不注射任何试剂。测量各组小鼠的胸腺指数,同时应用光镜、电镜和流式细胞术检测胸腺的显微结构、超微结构和胸腺细胞凋亡率。结果雌激素＋Ghrelin组的胸腺指数极显著大于雌激素＋生理盐水组,胸腺细胞凋亡率极显著小于雌激素＋生理盐水组（P〈0.01）,而二者与生理盐水组和空白对照组均差异不显著（P〉0.05）;雌激素＋Ghrelin组的胸腺显微结构和超微结构基本恢复正常,并与生理盐水组和空白对照组相似。结论得出Ghrelin可以通过抑制胸腺细胞凋亡和促进胸腺细胞增殖,从而逆转雌激素诱导的小鼠胸腺萎缩。     

Thymic lymphosarcoma of T cell lineage in a koala (Phascolarctos cinereus)

Objective To diagnose and characterise thymic lymphosarcoma in a koala.
Design A pathological case.  

Animal

Seven-year-old female koala.
Procedure The neoplastic process was investigated macroscopically, haematologically, histologically and immunohistologically.
Results The koala had difficulty swallowing because of a medial swelling in the lower neck. Biopsy of this mass and blood examination revealed lymphosarcoma with a leukaemic manifestation; necropsy and histopathological examination showed the mass to be thymus. Palatine tonsils, cervical, axillary and mesenteric lymph nodes, spleen, liver, gut, bronchi, genitalia and bone marrow were infiltrated by neoplastic cells. Immunohistological staining of the thymic mass, cervical and mesenteric lymph nodes, bone marrow, spleen and gut revealed the neoplastic cells to be of T lymphocyte origin (positive for both anti-human CD3 and CD5).  

Conclusions

It is speculated that the neoplastic process originated in the thymus and was disseminated by bloodborne neoplastic cells: This first report of thymic lymphosarcoma in a marsupial confirms that antibodies raised originally to investigate human lymphoid neoplasia can cross-react with neoplastic lymphocytes in koalas.     

鼠类机会性寄生虫感染的实验研究

将住家附近诱捕到的74只黄胸鼠、43只褐家鼠和56只小家鼠随机分为实验Ⅱ组和对照组。实验Ⅰ组90只野鼠饮用1.0/L醋酸地塞米松水溶液；实验Ⅱ组66只野鼠给予皮下注射醋酸可的松；对照组不作任何处理。结果从实验Ⅰ组和实验II组的野鼠粪便和各种组织内共分离出5种机会性寄生虫，即微小隐孢子虫，结肠小袋纤毛虫，溶组织内阿米巴，弓形虫和卡氏肺孢子虫。然后将分离的虫体分别制成接种物，接种各种实验动物。接种后.经免疫处理的实验动物均出现典型的临床症状或死亡；未经免疫处理的实验动物则呈隐性感染。结果证明在机体免疫功能低下时.实验动物接种机会性病体后均能获得感染。提示我们，鼠类机会性寄生虫可能成为人体和其他动物感染的传染源，在公共卫生学上有重要意义。     

抗氧化酶在硝基苯中毒小鼠睾丸细胞凋亡中的作用

将10周龄雄性昆明小鼠随机分为硝基苯染毒组（26mg／kg、52mg／kg、105mg／kg）、花生油溶剂对照组、生理盐水对照组。对各组试验小鼠进行处理后,于第30d检测小鼠血清和睾丸中SOD、GSH-Px、CAT的活性及MDA含量,并通过DNA Ladder条带和透射电镜检测睾丸细胞的凋亡。结果,染毒组血清及睾丸中SOD、GSH—Px、CAT的活性显著或极显著（P〈0.01或P〈0．05）低于溶剂对照组,MDA含量显著或极显著（P〈0．01或P〈0,05）高于溶剂对照组,染毒组均显示DNA Ladder条带;电镜下细胞核皱缩,异染色质边聚,呈现典型凋亡现象。结果表明,硝基苯中毒能够诱使睾丸发生氧化应激,进而导致睾丸细胞发生凋亡,抗氧化酶在睾丸细胞凋亡中具有一定的作用。     

醋酸铅对小鼠卵巢组织结构和卵巢颗粒细胞凋亡的影响

将40只20日龄雌性昆明系小鼠随机分成3个处理组和1个对照组,每组10只。给3个处理组小鼠分别连续2d腹腔按体质量注射醋酸铅10,20,40mg/kg,对照组小鼠注射等体积的生理盐水。于注射后24,72h分离卵巢,用原位末端标记法(TUNEL)测定卵巢颗粒细胞的凋亡率,研究卵巢组织结构及卵巢颗粒细胞凋亡的变化。结果显示,醋酸铅可使小鼠卵巢组织结构发生病变,加速卵巢颗粒细胞的凋亡,且凋亡率随着攻毒剂量的增加和时间的延长而升高,与对照组相比,差异极显著(P0.01);表明醋酸铅对小鼠卵巢具有毒性作用,可诱导卵巢颗粒细胞发生凋亡,并呈现一定的剂量-时间依赖关系。     

磺胺喹噁啉对小鼠睾丸的病理损害及生精细胞凋亡作用

按毒理学方法给雄性小鼠灌喂不同剂量磺胺喹噁啉,检测对小鼠睾丸的病理学损害,探讨其对雄性小鼠生殖器官产生的可能危害,采用DNA Ladder条带和TUNEL法检测了磺胺喹噁啉对生精细胞凋亡的影响。结果表明：1／30LD50组和1／20LD50组精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞基本正常,仅少部分核出现形状不规则的现象。而1／10LD50组和1／10LD50组则病理变化明显,表现为部分曲精小管上皮细胞减少、分层不明显;各级生精细胞细胞膜部分破损、有细胞质溶解现象,核体积皱缩或轮廓不清,核膜有溶解,细胞内线粒体嵴减少或外膜破损;成熟的精子细胞数量减少或从支持细胞上脱落。小鼠睾丸DNA Ladder条带检测结果表明磺胺喹噁啉对诱导生精细胞凋亡没有明显的作用,原位末端标记法检测磺胺喹噁啉各用药组小鼠生精细胞凋亡指数均有所增加,但较对照组差异不显著（P〉0．05）,也没有表现出明显的正相关变化。说明大剂量使用磺胺喹噁啉会对小鼠睾丸产生器质性的损害,但对睾丸生精细胞凋亡没有明显的诱导或抑制作用。     

毒害艾美耳球虫感染对雏鸡免疫器官IL-2表达及淋巴细胞增殖能力的影响

为了探讨毒害艾美耳球虫(E.necatrix)感染雏鸡后,其免疫器官白细胞介素(IL-2)和T、B淋巴细胞增殖能力的变化,本研究应用组织匀浆涂片和酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色及细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法对E.necatrix感染雏鸡免疫器官的T淋巴细胞百分数、IL-2诱生活性、T和B淋巴细胞对C...