猪瘟高免卵黄抗体的研制试验

猪瘟是危害养猪生产的主要传染病之一。病猪和带菌猪是本病的主要传染源。通过对病猪注射猪瘟高免卵黄抗体可明显遏制患猪病情恶化。注射猪瘟高免卵黄抗体后3天．试验猪抗体水平明显提高。连续观察15天，受试猪精神状态良好。未见不适症状或死亡。预防保护率达100％．     

云南省猪2型圆环病毒血清抗体调查

用免疫酶联吸附试验 (ELISA)法 ,检测 899份猪血清的猪 2型圆环病毒抗体 ,结果阳性 2 6 1份 ,阳性率为2 9%。     

猪圆环病毒2型血清抗体调查

猪圆环病毒2型（PCV-2）是最近几年新发现的一种严重威胁养猪业的病毒。由于PCV-2能够引起机体免疫抑制及混合感染和继发感染,无疑成了养猪业的一颗定时炸弹。目前该病毒已引起了世界许多国家兽医工作者的高度重视。     

高免卵黄抗体防治鸭病毒性肝炎

高免卵黄抗体防治鸭病毒性肝炎林志川国营龙海市苍坂农场３６８１０７鸭病毒性肝炎是雏鸭的一种传播迅速、高度致死的病毒性传染病。新发生的鸭群死亡率可达到９０％以上，给养鸭业造成严重的经济损失。据笔者调查龙海市每年养鸭１５００万只左右，近５００万只发生鸭病毒...     

高致病性猪蓝耳病与猪圆环病毒2型混合感染的诊断

2020年11月湖南省常德市某规模化猪场暴发了一场以仔猪呼吸困难、消瘦、皮肤发绀,并有大量死亡为特征的传染病.根据送检4头仔猪的剖检变化和实验室荧光定量PCR检测,最终确诊为高致病性猪蓝耳病、猪圆环病毒2型混合感染.经过治疗并采取严格的预防免疫措施,该猪场的发病率得到有效控制.     

鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的研制及应用

应用雏鸭病毒性肝炎病毒（DHV）弱毒疫苗和DHV油乳剂灭活苗多次免疫产蛋鸡，制备鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体，自制鸭病毒性肝炎病毒高免卵黄抗体的疗效取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间。实验室试验及临床应用结果表明，卵黄抗体的中和效价应达2^8以上，并且在感染DHV 24h以内对雏鸭进行肌肉注射，治疗效果最为理想。     

抗猪流行性腹泻病毒高免卵黄抗体的制备及临床应用研究

猪流行性腹泻具有发病急、传播快、发病率与死亡率高、波及面广等特点。近年来,在全国范围内爆发频繁。本试验主要制备一种高免卵黄抗体,并研究其在预防和治疗上的效果。研究结果表明,制备抗PEDV的特异性高免卵黄抗体对未吃初乳的仔猪保护率达90%,对仔猪流行性腹泻有很好的预防效果,对10日龄以上的仔猪有显著的治疗效果,可应用于临床实践。     

猪圆环病毒2型抗体胶体金检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,在玻璃纤维膜上包被胶体金标记PCV-2抗原(cap蛋白),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原(cap蛋白)和PCV-2单抗,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸条。该试纸条与猪圆环2型抗体酶联免疫检测试剂盒对比,符合率为94.7%,整个实验过程只需15 min,与ELISA试剂盒比较,具有操作方便、快速、直观的优点。     

抗猪链球菌病高免卵黄抗体的研制

猪链球菌病是由多种不同群的链球菌引起的不同临床类型传染病的总称.常见的有败血性链球菌病和淋巴结脓肿两种类型.前者由C群链球菌引起的,发病率和死亡率～高,危害大,在断奶后哺育期仔猪的死亡率高达4%～5%,有的甚至高达15%;后者以E群链球菌引起的,临床上最常见而且流行最广.猪链球菌是猪上呼吸道的一种早期定居菌,在5日龄即可定居,多数动物的扁桃体均可携带猪链球菌,且同一头猪可携带不同血清型的链球菌.感染猪虚弱甚至死亡,一旦感染此病就会呈顽固的地方性流行[1～3],预防和治疗费用高.为寻求防治猪链球菌病经济有效的方法,笔者进行了抗猪链球菌病高免卵黄抗体的研制.     

猪圆环病毒2型和猪瘟病毒抗体检测与分析

目的检测临汾市某县猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)的抗体水平.方法分别从该县的企业、散户、大户的猪只中采集血清186份,应用ELISA方法检测抗体水平.结果 PCV2抗体阳性率平均为83.33%,CSFV抗体阳性率平均为54.83%.结论该县猪圆环病毒2型感染严重,猪瘟疫苗免疫抗体水平偏低,与猪瘟疫苗使用不当、猪圆环病毒2型感染存在一定关系.     

抗猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒卵黄抗体制备及其临床应用研究

本研究旨在制备猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒高免卵黄抗体,研究其治疗效果。以猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻二联灭活苗免疫产蛋鸡,琼脂扩散方法检测抗体效价达到1∶64时,收集卵黄,采用氯仿抽提和硫酸铵盐析法纯化卵黄抗体,进行微生物学检测、安全性试验,通过人工感染治疗试验和临床应用,观察其治疗效果。结果人工感染治愈率为100%,临床应用治愈率为88.0%,表明制备的卵黄抗体对猪传染性胃肠炎和流行性腹泻具有显著的治疗效果。     

鸡抗猪大肠杆菌高免卵黄抗体的研制与应用

应用仔猪大肠杆菌标准菌株和地方分离菌株免疫商品蛋鸡，收获高免蛋制备多价卵黄抗体。经预防、攻毒试验及临床治疗效果观察，对仔猪免疫保护率可达90％以上，攻毒保护率98％以上，临床治愈率95％以上。     

PCR技术在猪圆环病毒2型检测中的应用

参照Gen Bank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计合成1对引物,建立了检测猪场疑似病例临床样本中PCV-2的PCR方法。结果显示,PCV-2的ORF2扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,呈现1条630 bp的特异性条带,与预期目的片段大小一致。应用该方法对安徽省3个猪场的30份病料进行了PCV-2检测,结果有9份检测出PCV-2,阳性率为30%。结果表明,该试验建立的PCR方法,是一种快速、灵敏、高效的PCV-2检测技术。     

猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染的流行病学调查及综合诊断

猪繁殖障碍与呼吸道综合征（PRRS）和猪圆环病毒2型（PCV-2）是近几年来严重危害猪群的两大免疫抑制性疾病。为研究2种病毒自然条件下混合感染的发病情况，本研究分别利用RT-PCR和PCR方法，对近2年来自山东及周边地区78家猪场的237份临床病例进行了PRRSV和PCV-2的检测，结果发现PCV-2和PRRSV混合感染病例48份，阳性率达20.2%。2种病毒混合感染已成为该地区猪病流行的重要特征。本研究对该地区猪群混合感染的现状、发病表现及病变特征等进行了系统调查分析。     

PCR检测临床病例中PCV-2、PRRSV和CSFV的混合感染

参照GenBank中已发表的有关基因序列,分别设计合成针对PCV-2、PRRSV和CSFV的3对引物,分别建立检测临床病例中PCV-2、PRRSV和CSFV感染的PCR或RT-PCR方法。结果显示,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,分别各呈现1条大小约1154,372,375bp的特异条带。采用建立的PCR方法对江西各地发病猪和死亡猪的133份临床病料进行PCV-2检测,结果总检出率53.38%(71/133)。在71份PCV-2阳性的病料中检测出PRRSV20份,阳性率28.17%(20/71);CSFV9份,阳性率12.68%(9/71);PRRSV和CSFV共同感染9份,阳性率12.68%(9/71)。     

猪圆环病毒2型继发感染大肠杆菌和副猪嗜血杆菌的诊断

江苏某猪场断奶仔猪发生以体温升高为主要临床特征的传染病,发病率和死亡率均较高。本研究对其送检的病死猪样本进行了病原学检测和病原的分离与鉴定,结果从其内脏样本中检测和分离到多种病原。通过细菌学方法分离到副猪嗜血杆菌和大肠杆菌,通过病毒学方法分离到猪圆环病毒2型（PCV-2）。通过临床诊断、病理解剖和实验室确诊,综合判断该猪场感染了PCV-2,并继发感染了副猪嗜血杆菌和大肠杆菌,造成较大损失。     

FRRSV和PCV-2双重PCR检测方法的建立及应用

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株(ATCCVR-2332)的ORF7保守序列和猪圆环病毒2型(PCV-2)(AF381175)的ORF2基因保守序列,设计合成了两对特异性引物。用这两对引物,通过优化的PCR条件,对PRRSV阳性毒株反转录后的cDNA模板和PCV-2毒株的DNA模板进行双重PCR扩增,同时得到两条与试验设计相符的432bp(PRRSV)和630bp(PCV-2)特异性条带,建立了同时检测PRRSV和PCV-2的双重PCR方法。并用此方法对在安徽省不同地区所采集的72头份病猪的淋巴结、肺、肝、脾、肾等组织进行检测,证明建立的PCR方法可用于临床诊断。     

猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及其应用

参照国内外已发表的猪圆环病毒2型（PCV-2）的ORF1的基因序列及其相关的PCR检测方法设计一对引物,扩增目的片段为493bp。通过对PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性试验,建立了一种PCV-2的PCR检测方法。应用此方法对临床样品进行了检测,阳性检出率达51.18%。该方法具有快速、敏感、特异等优点,可用于PCV-2的检测和流行病学调查等。     

猪Ⅱ型圆环病毒全基因组序列分析及其ORF1和ORF2基因的克隆与表达

猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap.本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中,进行了序列测定.将Rep和Cap基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pPROEXTMHT中,以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白.根据文献报道,致病性的PCV-2与无致病性的PCV1的型特异性抗原决定簇主要位于Cap基因的羧基端部分,本实验利用原核表达载体pGEX-6p-1融合表达了Cap基因羧基端423bp的片段.通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS-PAGE结果,重组质粒pPRO-Cap和pPRO-Rep以及pGEX-△Cap的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15.1%、30.4%和19.6%.将表达的三种蛋白作为抗原,通过酶联免疫吸附试验分别与PCV-2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应,pGEX-△Cap表达的蛋白(Cap蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强,这表明截短的Cap蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV-2感染用候选抗原.     

猪圆环病毒2型ORF2基因的表达及活性研究

根据猪圆环病毒2型(PCV-2)基因序列设计1对特异性引物,PCR扩增PCV-2去核定位信号(nuclear localization signal,NLS)的Cap蛋白基因(oRF2),经Bam H Ⅰ/HindⅢ双酶切后将其克隆到表达载体pQE30中并转化大肠埃希菌JM109,采用IPTG进行诱导表达,采用自行创新的纯化方法对表达的融合蛋白进行纯化,Western blot鉴定纯化后的重组Cap蛋白(rCap)活性.结果表明,成功克隆了无核定位信号的ORF2基因,其分子质量大小为579 bp;表达的rCap蛋白大小为24.1 ku左右,与预期大小相一致;经纯化后的rCap蛋白纯度在95%以上;Western blot鉴定结果表明,Cap蛋白可以和抗PCV-2抗体反应,具有很好的抗原性.本研究为进一步建立以Cap蛋白为包被抗原的PCV-2间接ELISA诊断方法以及PCV-2疫苗的研究奠定了基础.