橡胶树PR107原生质体的分离和培养研究

以橡胶树PR107花药愈伤组织建立的胚性悬浮细胞为材料,进行原生质体的酶解分离和培养研究。结果表明：在酶组合为纤维素酶1.5 %+果胶酶0.15 %+离析酶0.5 %的酶解处理下,继代培养第6天、直径小于0.5 mm悬浮细胞团获得最高产量的原生质体,达到2.2×107个/mL PCV;原生质体在看护培养基上培养1周后观察到细胞开始发生分裂,培养2周后细胞分裂形成含8-10个细胞的小细胞团。看护培养45 d后原生质体持续分裂并发育成肉眼可见的小愈伤组织。     

毛叶枣与冬枣原生质体分离体系的建立

研究了毛叶枣及冬枣的原生质体分离条件,为以后应用体细胞融合技术创造优异的毛叶枣体细胞杂种材料提供技术支持。结果表明:枣叶片分离出的原生质体活性显著高于悬浮培养物,但是产量低于悬浮培养物分离出的原生质体。毛叶枣酶解所需酶液最佳浓度为纤维素酶10g/L 离析酶4g/L 甘露醇0.7mol/L;冬枣酶解所需酶液最佳浓度为纤维素酶15g/L 离析酶4g/L 甘露醇0.7mol/L,酶解时间均为14￣16h。     

硫酸铜对小麦根尖细胞的遗传毒性

为了研究硫酸铜对小麦根尖细胞的遗传毒性,用常规染色体压片技术,观察硫酸铜胁迫下小麦根尖细胞有丝分裂的变化。结果表明,处理时间相同时,随硫酸铜浓度的增大,小麦根尖细胞有丝分裂指数和微核率均呈先升后降的趋势,而染色体畸变率呈逐渐升高的趋势;硫酸铜浓度相同时,随处理时间延长,小麦根尖细胞有丝分裂指数、微核率和染色体畸变率均逐渐升高。说明硫酸铜对小麦具有明显的遗传毒性,且表现为明显的剂量效应和时间效应。     

大豆愈伤原生质体的制备和培养方式探究

具有植物细胞全能性的原生质体是探究植物遗传转化和基因功能的理想材料,为了高效率制备大豆原生质体及其稳定培养,以交大05-133大豆未成熟子叶诱导的愈伤组织为材料,采用正交设计,对纤维素酶、果胶酶和离析酶等酶解液成分进行分析,研究原生质体高效制备方法的酶解液配比,同时探讨不同酶解时间对原生质体产量的影响,以确定最佳的原生质体酶解条件;通过对比在低熔点琼脂固体液滴培养与液体培养这两种不同培养方式下细胞的增值速率,以期建立高效的愈伤原生质体再生体系。结果显示,最佳酶解液配比为:2%纤维素酶+0. 1%果胶酶+1%离析酶,在该酶解液配比下酶解5 h,所得到原生质体产量和活力最高,达到(3. 976±0. 86)×10~6个·g~(-1)。用KP8培养基对原生质体进行培养,结果显示固体液滴的培养方式更适合原生质体的分裂,原生质体植板率高于液体培养,并且在25 d内分裂形成致密的细胞团。     

秋水仙素处理对黑麦根尖细胞有丝分裂的影响

为了解秋水仙素对黑麦根尖细胞有丝分裂的影响，以黑麦根尖为材料，在不同浓度秋水仙素（0．01％、0．05％、0．10％、0．15％、0．20％）和不同处理时间（12、24、36、48、60、72h）条件下测定了根尖细胞中期分裂指数和细胞加倍指数。结果表明，随着秋水仙素浓度的升高，细胞加倍指数增加，当秋水仙素浓度为0．15％时细胞加倍指数达到最大值（0．0362％），以后迅速下降。随着处理时间的延长，中期分裂指数逐渐下降，而细胞加倍指数在处理36h时达到最大值（0．0208％）。在浓度与时间的互作方面，0．15％的秋水仙素处理24h，细胞的中期分裂指数最高，达到0．202％；而0．15％的秋水仙素处理36h，细胞加倍指数最高，达到0．096％。     

4种洗洁精对蚕豆根尖细胞的遗传损伤

采用蚕豆根尖细胞微核技术,研究4种洗洁精的细胞遗传学效应。结果表明,处理组细胞中出现了多种染色体异常。洗洁精均可诱导微核的产生,处理组微核率明显高于对照组,4种洗洁精毒性大小排列如下：LB〉CH〉QQ〉DP。经不同含量洗洁精处理后微核率和有丝分裂指数与对照差异显著。在一定含量范围内,微核率随洗洁精含量的升高而提高,达到一定含量后,微核率反而有下降的趋势。低含量洗洁精可促进蚕豆根尖细胞有丝分裂,高含量洗洁精抑制有丝分裂。     

重铬酸钾对黑麦的细胞遗传毒性及硅的缓解作用

为了解K2Cr2O7的细胞遗传毒性及硅对铬毒害的缓解作用,采用常规染色体压片技术,观察不同浓度的K2Cr2O7(20、40、60、80、100、120mg.L-1)对黑麦根尖细胞有丝分裂的影响以及硅对铬胁迫缓解效应。结果表明,细胞有丝分裂指数、微核率和染色体畸变率均随K2Cr2O7浓度的升高呈先升后降趋势,在K2Cr2O7浓度为40.0mg.L-1时均达到最大值。与蒸馏水对照相比,6个不同浓度K2Cr2O7胁迫处理的微核率和染色体畸变率均有显著升高。对40mg.L-1 K2Cr2O7胁迫的黑麦根尖分别进行60、120和180mg.L-1的Na2SiO3处理,细胞有丝分裂指数、微核率和染色体畸变率均显著降低,且随硅浓度的增加呈下降趋势。说明K2Cr2O7对黑麦根尖细胞有丝分裂在低浓度时促进,高浓度时抑制,高低浓度处理均对染色体具有明显的致畸效应。外源硅可有效缓解K2Cr2O7对黑麦根尖细胞有丝分裂的不利影响。     

不同预处理对花生根尖细胞有丝分裂制片的影响

以花生根尖为材料,分别用不同质量浓度的秋水仙素(0,0.1,0.5,1.0,1.5 ,2.0g/L)、8-羟基喹啉(0,2,4,6,8,10mmol/L)和对二氯苯饱和水溶液预处理1～3h,分析了不同预处理剂对花生根尖细胞有丝分裂活性的影响,并比较了不同预处理剂对中期染色体形态的影响.结果表明,各预处理剂在不同浓度下对花生根尖细胞中期分裂指数和中期染色体形态的影响均不相同.用对二氯苯饱和水溶液处理时间2.5 h效果最好,获得了分散均匀的花生根尖细胞染色体的中期分裂相.     

巴西橡胶树叶肉细胞原生质体中细胞骨架结构及动态观察

细胞骨架通过结构的重排在植物响应逆境胁迫的过程中起着重要作用。本研究克隆真菌微丝结合蛋白的一段保守结构域lifeact及小鼠MAP4的微管结合结构域MBD,构建与荧光蛋白EGFP融合表达的瞬时表达载体,利用原生质体瞬时表达体系成功观察到了橡胶树叶肉细胞中微丝和微管骨架的结构,并通过对原生质体细胞进行不同处理观察胞内微丝和微管骨架的结构变化。此外,本研究还成功的捕捉到橡胶树原生质体细胞中微丝及微管的动态行为。      

橡胶树叶片染色体制片方法的优化

采用压片法、酶解去壁低渗法和悬液法等方法,对橡胶树热研7-33-97古铜期嫩叶染色体制片及其过程中预处理药剂、预处理时间、前低渗温度、酶解时间等因子进行了探讨.结果表明:悬液法更适合橡胶树叶片染色体制片.最佳预处理药剂为0.1%的秋水仙素和0.002mol/L 8-羟基喹啉混合液,预处理时间为2 h.酶解温度37℃,时间为5～7 h.     

NaCl胁迫对玉米根尖细胞染色体行为的影响

用不同浓度的NaCl处理萌发的玉米种子。结果表明,随着NaCl浓度的升高,玉米根尖细胞有丝分裂指数降低,NaCl浓度高于100 mmol/L时,引起根尖细胞染色体行为异常,异常类型有微核、多核、染色体落后、染色体粘连、染色体桥、染色体断裂等,以多核和染色体粘连为主。染色体异常行为与NaCl处理浓度呈正相关。     

木薯根尖染色体制片方法的优化

以华南6号木薯根尖为材料,采用酶解去壁低渗法和压片法,制备木薯染色体标本,并对其制片过程中的预处理药品、预处理时间、酶解时间等因子进行优化。结果表明：酶解去壁低渗法能获得较好的染色体标本,α-溴代萘与对二氯苯饱和液的混合液和0．1％的秋水仙素与0.002 mol/L 8-羟基喹啉混合液的预处理效果最好,预处理时间以2 h为宜,酶解时间4 h效果最好。     

外源腐胺对干旱胁迫下冬小麦幼苗叶片膜脂过氧化的调节效应

为了研究外源物质对小麦抗旱性的诱导作用,水培条件下研究了外源腐胺对干旱胁迫(15%PEG-6000)条件下冬小麦幼苗叶片膜脂过氧化及抗氧化酶活性的影响.结果表明,干旱胁迫48 h后冬小麦幼苗叶片含水量下降了27.43%, O_2(÷)的产生速率、丙二醛(MDA)和H_2O_2含量随时间的推移均呈增加的趋势,SOD、POD、CAT活性分别下降了23%、37%、70%.外源腐胺处理下叶片含水量仅下降了7.62%;叶片 MDA含量降低80%左右,H_2O_2的含量下降50%左右,O_2(÷)的产生速率降低了1/3,而叶片SOD、POD、CAT活性分别提高了41%、165.8%、246%.因此认为,外源腐胺可通过抑制活性氧(O_2,H_2O_2)的产生,降低MDA含量,提高抗氧化酶(SOD、POD、CAT)的活性,缓解干旱胁迫造成的冬小麦幼苗叶片细胞膜脂过氧化损伤,提高冬小麦的抗旱性.     

MG-132, an inhibitor of proteasomes and calpains,induced inhibition of oocyte maturation and aneuploidy in mouse oocytes

BACKGROUND: Although chromosome missegregation during oocyte maturation (OM) is a significant contributor to human morbidity and mortality, very little is known about the causes and mechanisms of aneuploidy. Several investigators have proposed that temporal perturbations during OM predispose oocytes to aberrant chromosome segregation. One approach for testing this proposal is to temporarily inhibit the activity of protein proteolysis during OM. We used the reversible proteasome inhibitor MG-132 to transiently perturb the temporal sequence of events during OM and subsequently analyzed mouse metaphase II (MII) for cytogenetic abnormalities. The transient inhibition of proteasome activity by MG-132 resulted in elevated levels of oocytes containing extra chromatids and chromosomes. RESULTS: The transient inhibition of proteasome-mediated proteolysis during OM by MG-132 resulted in dose-response delays during OM and elevated levels of aneuploid MII oocytes. Oocytes exposed in vitro to MG-132 exhibited greater delays during metaphase I (MI) as demonstrated by significantly (p < 0.01) higher levels of MI arrested oocytes and lower frequencies of premature sister chromatid separation in MII oocytes. Furthermore, the proportions of MII oocytes containing single chromatids and extra chromosomes significantly (p < 0.01) increased with MG-132 dosage. CONCLUSIONS: These data suggest that the MG-132-induced transient delay of proteasomal activity during mouse OM in vitro predisposed oocytes to abnormal chromosome segregation. Although these findings support a relationship between disturbed proteasomal activity and chromosome segregation, considerable additional data are needed to further investigate the roles of proteasome-mediated proteolysis and other potential molecular mechanisms on chromosome segregation during OM.     

尖叶牛樟染色体制片优化与核型分析

本研究以尖叶牛樟根尖为材料,采用酶解去壁低渗法制片,探讨不同预处理方式和酶解时间对牛樟根尖染色体制片的影响,并对其进行核型分析,以期为牛樟的起源、演化及遗传育种提供一定的理论依据。结果表明:于9:00—11:00进行取材,用0.002 mol/L 8-羟基喹啉液预处理2 h,4%果胶酶和5%纤维素酶酶解5 h,能获得较佳的染色体制片。核型分析结果表明:尖叶牛樟的染色体数目为24条,核型公式为2n=2x=24=22m+2sm,第10对染色体带有随体,属于2B类型,核型不对称系数55.81%。核型对称程度较高,这表明尖叶牛樟可能进化程度较低,属于比较原始的物种。     

微波辅助酶法制备米糠蛋白工艺对黄曲霉毒素B_1脱除及酶解效果的影响

以受黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)污染的米糠为原料,研究微波辅助酶法对米糠中AFB_1脱除效果的影响。初始米糠中AFB_1浓度为102.54μg/kg,以料液比(g∶m L)1∶10、加酶量0.50%、α-淀粉酶和纤维素酶酶解液pH6.0、温度50℃、处理时间2 h的工艺条件制备米糠蛋白。结果表明,米糠中AFB_1残留浓度为56.03μg/kg(脱除率为45.36%),米糠中蛋白质回收率为78.20%;基于该工艺研究,在单位体积微波功率750 W和处理时间10 min的条件下,由酶法提取的米糠蛋白制品中AFB_1残留浓度为4.21μg/kg(脱除率为92.48%),符合国家标准(≤10μg/kg),而蛋白质回收率达到81.36%。本研究采用免疫亲和柱净化结合HPLC-FLD检测法,提高AFB_1的检出限至0.10μg/kg。微波处理不仅对米糠蛋白中AFB_1有明显的脱除效果,且有利于蛋白回收率的提高。该法操作简单,脱除效率高,可应用于受黄曲霉毒素污染的米糠制品中。     

笋壳多糖脱蛋白方法的比较

为了研究笋壳多糖的脱蛋白工艺,以脱蛋白率、糖保留率和DPPH自由基清除能力为指标,对比研究了Sevag法、TCA法、酶法和醋酸铅法的笋壳多糖的脱蛋白效果。结果表明,最佳笋壳多糖脱蛋白方法为醋酸铅法,其脱蛋白工艺为：1 mg/mL糖液中添加醋酸铅使终浓度为1.0％,室温静置1 h,5 000 r/min离心20 min,最终脱蛋白率为80.17％,多糖保留率为81.12％,自由基清除能力为40.56％。该方法操作简便,脱蛋白效果好,且兼具良好的脱色澄清效果,适合工业上大规模生产使用。     

不同水分管理模式和播后镇压对小麦干物质积累及产量的影响

为明确不同水分管理模式和播种后镇压对小麦干物质积累及产量形成的影响,以烟农19为材料,在大田条件下设置雨养（RI）、雨养+播后镇压（RC）、传统漫灌（TI）、传统漫灌+播后镇压（TC）、微喷灌（MI）和微喷灌+播后镇压（MC）处理,研究不同处理对小麦干物质积累及产量的影响。结果表明,与RI和TI处理比较,MI处理产量分别提高了44.2%和11.0%;RI处理产量最低,是由于穗数、穗粒数和粒重的显著下降所致,而TI处理产量较MI处理下降是由穗粒数和粒重显著降低导致。雨养和传统漫灌下播后镇压较其未镇压处理显著提升了产量,分别提高14.1%和6.2%。与TI和RI处理比较,MI处理开花期和灌浆期具有较高的群体叶面积指数（LAI）、旗叶叶绿素含量（SPAD值）,籽粒平均灌浆速率和成熟期干物质积累量;相比未镇压处理,镇压后,雨养和传统漫灌下LAI提升,雨养和微喷灌处理下灌浆期旗叶SPAD值显著增加,籽粒灌浆速率提高,从而促进了粒重增加和群体干物质积累。总之,微喷灌+播后镇压能促进小麦群体的形成,延缓叶片衰老,提高小麦的穗粒数及千粒重,从而增加小麦产量,为试验区推荐小麦栽培模式。