非洲猪瘟病毒及诊断技术研究进展

非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员,病毒基因组庞大,能编码100种以上的蛋白质分子。20世纪20年代该病毒首次在非洲的肯尼亚被发现,经过几十年,已经在世界多个国家不断蔓延,我国于2018年8月首次发生非洲猪瘟疫情。目前,非洲猪瘟抗原检测方法有红细胞吸附试验、荧光抗体试验、PCR技术、荧光定量PCR技术、环介导等温扩增技术等。抗体检测技术主要是酶联免疫吸附试验、胶体金试纸条法等。根据非洲猪瘟疫情在我国的发生情况,中国动物疫病预防控制中心组织了非洲猪瘟现场快速检测评审,对各种检测方法进行了技术把关,为非洲猪瘟病毒的检测和防控提供了技术保证。     

非洲猪瘟诊断技术研究进展

非洲猪瘟防控目前暂无安全有效疫苗可用,因此快速、可靠的检测方法对其防控至关重要。目前应用的非洲猪瘟诊断技术主要表现在病原、核酸、抗原与抗体四个方面:病原检测主要有红细胞吸附和病毒分离方法,核酸检测目前已开发出实时荧光定量PCR(qPCR)、多重PCR(mPCR)、微滴数字PCR(ddPCR)、巢氏PCR(nested-PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、交叉引物扩增技术(CPA)、原位杂交技术(ISH)以及生物传感器技术等,抗原检测常用荧光抗体试验(FAT)、抗原ELISA、侧向流动免疫色谱分析(LFA)等,而抗体检测主要通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接荧光抗体试验(IFA)、胶体金快速免疫层析法(GICA)、免疫印迹法(IBT)等方法。每种诊断技术都有其特点,从而为不同情况下的A SFV诊断提供了多种选择。未来,其他技术如CRISPR等与上述技术的结合应用,以及不同诊断技术的联合应用,将成为非洲猪瘟诊断技术发展的趋势。     

非洲猪瘟病毒的不同病原学检测方法比较

摘要：非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染导致的猪高死亡率的传染病,最早起源于非洲,是最复杂的猪传染性疾病之一。非洲猪瘟自首次报道至今已有1个世纪,但在没有疫苗和没有有效治疗方法的情况下,非洲猪瘟病毒的防控仍是一项巨大的挑战。当前,非洲猪瘟病毒已在我国“定殖”,该病毒的检测已经成为养猪企业的一项常规工作。实时荧光定量PCR是检测非洲猪瘟病毒最常用的方法,一些新型的核酸检测技术也被开发用于病毒检测,例如环介导等温扩增法、荧光重组酶介导等温扩增法等,均具有较好的特异性和灵敏度。本文阐述了非洲猪瘟的流行现状及不同病原学检测方法,对不同检测方法进行简单的比较,以期为非洲猪瘟病毒的检测提供参考。     

非洲猪瘟病毒检测试剂盒的研制

针对非洲猪瘟病毒（ASFV）P54基因建立荧光PCR检测方法,通过优化引物、TaqMan探针浓度及反应温度,研发了ASFV检测的荧光PCR检测试剂盒。经灵敏度的重复性试验及3种不同型号荧光PCR仪使用验证,所研发的试剂盒灵敏度为101copy/μL,适用于不同型号荧光PCR仪使用,可用于对非洲猪瘟病毒的快速检测。     

不同非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒在检测猪肉及猪肉制品中的比较

为了解不同非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒在检测猪肉及猪肉制品中的特征,采用国内外6种商品化非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测试剂盒,分别对同一样本开展稳定性试验,对相同非洲猪瘟强阳性、中阳性及弱阳性样本开展敏感性试验。结果显示:6种试剂盒扩增稳定性良好;对强阳性样本,所有商品化试剂盒均能检出;对中阳性及弱阳性样本,特别是弱阳性样本,不同试剂盒的检出情况不尽相同。因此在实际应用中,应根据具体需求选择合适检测试剂盒。本试验为一线工作者选择使用不同商品化非洲猪瘟检测试剂盒提供了一定参考。     

非洲猪瘟诊断技术研究进展

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的家猪和野猪的传染病,能引起所有品种和年龄猪的一系列综合征。论文从非洲猪瘟临床症状与病理变化、样品采集和实验室诊断等方面对非洲猪瘟诊断技术进行简述,重点介绍了血细胞吸附试验、荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链反应、荧光定量PCR、环介导等温扩增等非洲猪瘟诊断技术的最新研究进展,以期为非洲猪瘟综合防控提供借鉴和参考。     

非洲猪瘟诊断技术研究进展

非洲猪瘟是猪的一种急性、高度接触性传染病,致死率可达100%。本文综述了非洲猪瘟病原学和血清学诊断技术研究进展,包括红细胞吸附试验(HAD)、聚合酶链反应技术(PCR)、环介导恒温扩增技术(LAMP)、荧光抗体技术(FAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金快速免疫层析技术(GICA)等,并对各种方法的优缺点进行简要汇总分析,总结认为今后非洲猪瘟诊断的发展趋势在于不同诊断技术的联合应用。     

非洲猪瘟检测方法的研究进展

非洲猪瘟起源于非洲,2018年开始传入我国,对我国的养猪业造成了巨大的影响,目前非洲猪瘟疫苗的开发尚不成熟,有效检测成为了预防非洲猪瘟的主要手段。本文主要从病原学检测和血清学检测对非洲猪瘟的检测方法进行阐述,病原学检测主要包括红细胞吸附试验、聚合酶链式反应、等温核酸扩增技术,血清学检测主要包括酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析技术、免疫印迹法。通过这些方法可以有效的检测出非洲猪瘟。     

贵州香猪保种场主要疫病的血清学抗体检测分析

为了解贵州香猪资源保种场主要疫病的免疫状况,试验采集4个贵州香猪资源保种场猪群的血清样品67份,采用ELISA方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪O型口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒血清抗体进行检测。结果：贵州香猪群体中猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪O型口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒抗体阳性率分别为100%、74.6%、28.4%、0%,不同疫病免疫水平存在较大差异。结论：贵州香猪资源群体中猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒的免疫水平达到国家规定≥70%的要求;猪O型口蹄疫病毒免疫水平没有达到规定要求,需要加强免疫;非洲猪瘟由于目前还没有疫苗进行免疫,未检测到病毒抗体,表明无非洲猪瘟感染情况。     

七类消毒剂对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响

为评价戊二醛、酚、含碘类等常用消毒剂消毒后对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,按消毒剂说明书推荐选择不同工作浓度,分别与不同滴度的非洲猪瘟病毒培养物于20℃条件下作用30 min后,采用荧光定量PCR方法检测作用后产物。结果显示,与对应的阳性对照组相比,含氯类(二氯异氰尿酸钠)、过硫酸氢钾类、二氧化氯类消毒剂,消毒后对荧光定量PCR检测结果影响最显著,检测Ct值显著上升或检测不到;戊二醛类、含碘类(主要成分聚维酮碘)消毒剂,核酸降解能力相对较弱,检测Ct值稍有上升;酚类、季铵盐类、含碘类(主要成分碘、磷酸、硫酸)类消毒剂,检测Ct值基本无变化。本研究评价了7类常用消毒剂消毒对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,可为防控实践中科学、客观评价分析消毒效果提供技术参考。     

非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

为了研究检测非洲猪瘟病毒的方法,试验采用GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72基因序列设计了1对特异性引物和探针,并使用含有选定检测序列的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法.结果表明:该方法的敏感性可达100个拷贝值,具有良好的敏感性和重复性.     

猪瘟病毒胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

为建立一种猪瘟病毒的快速检测方法，采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金，选择15nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体，对胶体金标记抗体采用低温超速离心法进行纯化，组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测，同时用直接荧光抗体试验和RT—PCR做平行试验。结果显示，用试纸条检测猪瘟病毒，10min左右即可显示结果，试纸条、直接猪瘟荧光抗体试验和RT—PCR的阳性检出率依次为36．36％（4／11）、45．45％（5／11）和72．72％（8／11）。表明，用胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟病毒操作简便，需时短，可以用于猪瘟的流行病学调查。     

非洲猪瘟两种核酸提取方法的对比报告

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。目前,非洲猪瘟没有有效的疫苗。建立快速准确的诊断方法对于控制本病的传播至关重要。荧光PCR核酸检测是目前灵敏度最高的检测方法。而荧光PCR检测结果准确与否与非洲猪瘟核酸提取的质量有很大关系。笔者在检测工作中对农业部公布的常用快速检测试剂盒裂解液提取核酸与商品化试剂盒全自动核酸提取仪提取核酸,用同一检测反应液进行扩增,并从检测结果的准确性、操作简便程度、样品的使用范围、成本控制等方面进行比较,从而筛选出最佳的核酸提取方法,以期为非洲猪瘟疫情防控提供技术支撑。     

基于全面质量管理提升实验室非洲猪瘟病毒检测能力

非洲猪瘟已经成为我国养猪业防控的头号疫病,而荧光PCR方法是广泛用于各实验室非洲猪瘟病毒检测的首选方法。为提高相关实验室非洲猪瘟病毒荧光PCR检测的准确性,针对非洲猪瘟病毒荧光PCR检测过程可能存在的"假阳性"和"假阴性"现象,从全面质量管理理论的"人、机、料、法、环"等具体方面,详细阐述了这些现象产生的原因及改进措施或解决方案,从而为我国各级兽医实验室、屠宰场、养殖场、第三方检测机构等开展非洲猪瘟病毒检测提供参考,同时也为其他疫病病原的荧光PCR检测提供借鉴。     

非洲猪瘟病毒微芯片荧光PCR快速检测技术的建立及初步应用

非洲猪瘟缺乏安全有效的疫苗,其防控有赖于及时、准确的诊断和消毒灭源.本研究在对非洲猪瘟病毒(Afri-can swine fever virus,ASFV)B646L基因序列进行分析的基础上设计引物、探针,建立了基于微芯片的ASFV免提取荧光PCR检测技术.特异性试验结果显示,微芯片PCR可用于我国不同地区ASFV毒株...     

多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒

为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法。根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT—PCR扩增后将产物回收,克隆至pMDl8-T构建pMDl8-T—CSFV阳性质粒;非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成,构建pMDl8-T—ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板时建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验,结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开,灵敏度可以达到10拷贝的数量级．而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后．发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标。未知样品检出猪瘟病毒3份阳性,未检出非洲猪瘟病毒阳性。     

如何保证猪场实验室非洲猪瘟荧光PCR检测结果的准确性

非洲猪瘟在我国已经暴发近3年零5个月了,病毒已经形成一定的污染面.为精准防控非洲猪瘟,国家鼓励猪场实验室开展非洲猪瘟自检工作,非洲猪瘟病毒荧光PCR检测为猪场实验室常规检测项目.荧光PCR检测是一种技术含量很高的工作,要想做好并不容易,为保证检测结果的准确性和可靠性,笔者结合自身工作对检测环节的一些常见问题进行总结,供...     

非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及临床应用

为建立非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR方法,以非洲猪瘟病毒P72蛋白编码基因为靶基因设计引物和探针,利用正交试验方法优化反应体系及扩增程序,建立了非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR方法,并对其敏感性、特异性及稳定性进行评估。结果显示:建立的方法最低检出限为0.58 copies/μL,与荧光PCR方法相比更敏感;本方法与布鲁氏菌、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型和猪瘟病毒无交叉反应;对10倍稀释的标准物质检测10次,变异系数为8.44%,重复性好。利用建立的方法对100份临床样品进行检测,结果均为阴性,与荧光PCR检测结果一致;对5份实验室间比对样品进行检测,检测出阳性样品4份,阴性样品1份,与实验室间比对给定的样品盘结果一致。结果表明,本研究建立的微滴式数字PCR方法的敏感性、特异性和稳定性符合要求,适于非洲猪瘟病毒临床检测。     

基于非洲猪瘟检测对县级兽医实验室升级改造的经验及建议

文章介绍了基于非洲猪瘟检测对望谟县兽医实验室进行升级改造的情况,包括项目基本情况、实验室改造前状态、改造过程、检测能力提升及实验室改造经验与建议,通过新增荧光定量PCR仪等设备,不仅能进行常规动物疫病的抗体检测,还能开展非洲猪瘟病毒的核酸检测.     

不同产地待宰生猪的非洲猪瘟病毒检测

2019年广西玉林地区报告首例非洲猪瘟疫情,为探明当地防控政策措施实施以来对非洲猪瘟的阻断效果,本研究对辖区内某屠宰企业不同产地的待宰生猪采集全血制成混合血液样本,应用荧光PCR技术检测样本中是否含有非洲猪瘟病毒。检测结果得出均为阴性,说明当地有关政策的贯彻落实对防控非洲猪瘟起到了积极作用。