猪伪狂犬病活疫苗（TP株）冻干保护剂筛选和冻干工艺的优化

通过调整蔗糖明胶保护剂中蔗糖和明胶的比例、调整病毒液和冻干保护剂的添加比例,确定蔗糖添加量为40%、明胶添加量为8%配制的保护剂,病毒液与其按8∶1的比例冻干的制品性状较好,病毒含量较高。分别采用速冻法和慢冻法对制品进行冻干,结果表明,速冻法冻干后样品性状较好,病毒含量较高,因此确定采用速冻法对样品进行冻干。对预冻时间、一期干燥第一步干燥温度、干燥时间、加热的最高许可温度及时间进行了优化,结果表明,预冻时间1 h、一期干燥第一步干燥温度为5～10℃、干燥时间为14 h、干燥温度25℃维持4 h,为最优的冻干曲线。     

布氏菌病活疫苗（Rev.1株）冻干保护剂工艺的研究

布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺借鉴、采纳布氏菌病活疫苗(S2株)成熟的冻干工艺及菌液的配比,对冻干保护剂的选择进行了优化。我们选择蔗糖明胶保护剂和蔗糖脱脂乳保护剂,保护剂与布鲁氏菌Rev.1株菌液以16的比例混合,冻干后测定其活菌含量。结果显示,3批使用蔗糖脱脂乳保护剂的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12×10^9CFUmL、12.44×10^9CFUmL、12.65×10^9CFUmL;使用蔗糖明胶再加入终浓度约1%硫脲的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.34×10^9CFUmL、12.62×10^9CFUmL、12.91×10^9CFUmL;使用蔗糖明胶的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.22×10^9CFUmL、12.64×10^9CFUmL、12.8×10^9CFUmL。3种冻干保护剂对冻干疫苗的活菌含量影响无明显差异,但使用蔗糖明胶保护剂制备冻干疫苗时加入适量硫脲可适当增加冻干疫苗的耐热性,因此我们选择10%明胶、20%蔗糖冻干保护剂与菌液以1∶6配比比例混合,再加入终浓度约为1%的硫脲作为布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺。     

猪瘟无明胶无蛋白耐热活疫苗的研制及冻干工艺

为提高猪瘟(CSF)活疫苗的耐热性能,同时避免明胶和蛋白对猪只产生的免疫副反应,用葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、氨基酸等成分设计无明胶无蛋白耐热保护剂,根据配方的共晶点、塌陷温度科学设计冻干程序,并比较了不同预冻方式对猪瘟活疫苗效价的影响。结果表明,猪瘟病毒采用无明胶无蛋白耐热保护剂配方A冻干后具有较好的耐热性能,37℃保存10,15d,病毒的耐热损失分别为0.6lg和0.9lg;对快冻、慢冻以及退火3种不同的冻干方式进行比较,发现对猪瘟病毒冻干损失由大到小依次为:退火慢冻快冻,而耐热损失则相反;与传统的含明胶含蛋白耐热疫苗相比,猪瘟无明胶无蛋白耐热疫苗耐热效果更好,可在2~8℃长期保存30个月,动物试验表明该疫苗对猪只安全、无副反应。     

植物乳杆菌冻干保护剂的筛选及冻干工艺的研究

本试验对植物乳杆菌的冻干保护剂进行了筛选,同时对冻干工艺进行了优化。结果表明:最佳冻干保护剂配方是奶粉20%,海藻糖10%,甘油2%,低聚木糖5%;最佳的预冻温度和时间分别是-70℃,6 h;菌泥与水不同比例混合冻干后,随着水分的增加,植物乳杆菌的存活率缓慢下降,建议水与菌泥最佳比列为0.5:1。经过冻干保护剂和冻干条件的优化,植物乳杆菌的存活率达到80%以上。     

D型肉毒毒素冻干剂的试验

通过保护剂的选择及冻干试验研制了D型肉毒毒素新剂型-D型肉毒冻干剂。试验确定30%蔗糖+10%明胶作为冻干剂的保护剂;室温(13℃~18℃)的保存期为10个月,37℃的保存期为6个月;水分含量为≤5%。同时制定了D型肉毒毒素冻干剂冻干曲线。     

一种复方中药冻干粉的制备及其安全性研究

目的:将一种传统复方中药制备成冻干粉,并对其进行安全性评价。方法:采用单因素试验,对保护剂的种类和用量、药品冻干浓度进行筛选,并以绿原酸、表告依春及苦参碱含量作为冻干粉质量的主要考察指标;采用正交试验方法,以冻干率为考察指标确定最佳冻干工艺参数;通过溶血性试验和过敏性试验考察其安全性。结果:20%药液中加入10%甘露醇,在冷冻机中-50℃预冻5 h、-20℃低温升华干燥14 h,30℃解析干燥10 h,冻干样品25℃条件下放置12个月稳定性良好,安全性检查无溶血和过敏反应。结论:该冻干粉处方合理,制备工艺方便可行,质量安全可控。     

禽用活疫苗耐热冻干保护剂的应用

我国现阶段常用的生物制品保护剂主要为5%的蔗糖脱脂牛奶和1.5%~3.0%明胶,一般此类生物制品要求低温保存,在常温下要求尽快用完[1]。而耐热冻干保护剂更全面地考虑了具有生物活性的制品在较高温度和较长保存时间的情况下冻干物质可能产生的物理和化学变化对活疫苗存活的影响。因此,较传统冻干保护剂更能有效地保护疫苗,保存时间更长,大大提高了疫苗的免疫成功率和免疫保护率。     

江苏省农科院兽医研究所研制成功禽类耐热冻干保护剂活疫苗

目前，在我国禽类疫苗中，冻干活疫苗仍占比较大的比例，而国内以往普遍采用5％煎糖牛奶或煎糖明胶等组方简单、保护功能差的传统保护剂作为活疫苗的冻干保护剂，疫苗在2℃～8℃条件下保存时间普遍较短(4～6个月)，一般要求在-15℃以下保存，使成品疫苗的长期保存和运输受限，经常出现疫苗由于保存和／或运输原因引起效价降低甚至失效，导致免疫失败。     

副猪嗜血杆菌冻干保护剂的研究

采用冻存实验筛选出一种冻存存活率为100％的副猪嗜血杆菌保护剂(HPS-d),通过冷冻干燥实验测定HPS-d冻干存活率为25.94％.利用单因素分析实验优化保护剂HPS-d基质,在HPS-d中添加3种保护剂基质,结果显示:当海藻糖比例为1％、L-精氨酸盐酸盐比例为3％、BHI培养基/保护剂比例为1∶2时,冻干存活率达73.65％ ～77.61％.Plackett-Burman实验设计考察了保护剂8种组分的保护效果,结果显示:D-山梨醇、L-精氨酸盐酸盐和D-海藻糖是影响冻干存活率的显著因素.冷冻干燥验证实验证明优化后保护剂HPS-d平均冻干存活率达74.77％.     

猪瘟高免血清冻干粉的初步研究

为获得高效价的猪瘟高免血清冻干粉,以设计的3种冻干保护剂及两种冻干曲线对制备的猪瘟高免血清液冻干并比较冻干前后猪瘟抗体效价与色泽、干燥度、吸水性等,筛选最佳冻干保护剂及最佳冻干曲线;对制备的血清冻干粉作稳定性试验、生物安全性试验及无菌检验。结果表明,于屠宰前40 d按每周免疫1次,屠宰前2~3 d 3倍剂量免疫,制备的高免血清按1.2∶1、1.5∶1的添加比例添加含有明胶、果糖、海藻糖及聚乙烯吡咯烷酮(PVP)冻干保护剂并经二级预冻的制备工艺能获得抗体效价为1∶512且无毒副作用的猪瘟高免血清冻干粉;-20℃保存1年血清冻干粉猪瘟抗体效价及品质均无改变,为猪瘟高免血清冻干粉较理想的贮藏温度。     

常规动物用活疫苗冻干保护剂的改良初探

目前国内动物用活疫苗仍然以5%蔗糖脱脂奶作为冻干保护剂,其冻干外型稳定,易溶性良好,成本低廉,但其耐热性能差,对病毒的保护作用较差。本试验以鸡新城疫Lasota冻干活疫苗为例,分别以不同浓度的海藻糖取代蔗糖,进行冻干保护性试验,结果表明海藻糖在2%以上时,对病毒的保护效果明显优于5%蔗糖脱脂奶组,证明其具有很好的应用前景。     

猪瘟活疫苗耐热保护剂冷冻干燥技术研究

摘　要：随着猪瘟活疫苗耐热保护剂的不断应用,冻干技术的要求也越来越高。通过对冻干工艺的不断研究,采取预冻阶段快速和慢速降温,一期升华阶段选取不同温度等方法,筛选一条合适的冻干曲线,不仅缩短冻干时间,降低生产能耗,而且有利产品质量稳定,为今后耐热保护剂的冷冻干燥提供了研究方向。     

植物乳杆菌WL-R-02冻干保护剂配方的优化

以植物乳杆菌WL-R-02为研究对象,将冻干存活率提高到90%以上。通过正交试验法对现有的保护剂成分进行优化,筛选出最优保护剂组合。获得的最佳保护剂配方组合为：脱脂乳粉13%,海藻糖4%,乳糖3%,L-半胱氨酸1%;以最佳复合保护剂配方对植物乳杆菌WL-R-02进行-40℃预冷冻2 h,-30℃,20 Pa条件下冷冻干燥38 h,活菌数为6.70×10¹⁰CFU/g,冻干存活率91.6%,4℃冷藏保存10 d,活菌数为6.63×1010CFU/g。该研究可为开发商品化专用直投式发酵菌剂提供技术支撑。     

猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂的试验

目前,弱毒活疫苗是预防畜禽传染病的主要疫苗之一,在我国动物用疫苗中,活疫苗占相当大的比例.国内疫苗企业常用的保护剂主要是蔗糖、牛奶、明胶等,组方简单,保护性能差.如果在2℃～8℃条件下,保存期只有3～6个月,多需要在-15℃以下保存[1-2].而国内传统的动物用疫苗保护剂的研制相对滞后,使疫苗的长期保存和长途运输受到很大限制,加上基层防疫部门缺乏必要的冷冻和冷藏设施,容易因免疫失效而造成疫病流行[3].所以,耐热保护剂的研究非常急需,发达国家在20世纪80年代就已开始进行耐热保护剂的研究,目前已经基本采用耐热冻干保护剂生产冻干疫苗,但由于保护剂的研究和应用属于专利资料,处于保密状况中.     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究——鸡传染性支气管炎冻干活疫苗耐热保护剂试验

本试验以水解乳蛋白、乳糖、硫脲、多聚蛋白胨、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP K90 )等为主要材料 ,配 A组保护剂 ,并加 B组保护剂 (国内常规的蔗糖脱脂乳 )和 C组保护剂 (国外疫苗保护剂 )分别与鸡传染性支气管炎病毒 (IBV H1 2 0、H52、HK肾型 )弱毒原液 ,按一定比例配苗 ,采取特定的冻干曲线制备的试验疫苗 ,在不同温度下保存后测定效价变化情况。试验证实 ,A组保护剂耐热保护性能最好 ,在 2～ 8℃条件下有效保存期达 2年以上 ,达到国外同类产品水平。     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究：鸡传染性支气管炎冻干活疫苗耐热保护剂试

本试验以水解乳蛋白、乳糖、硫脲、多聚蛋白胨、聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰＫ９０）等为主要材料，配Ａ组保护剂，并加Ｂ组保护剂（国内常规的蔗糖脱脂乳）和Ｃ组保护剂（国外疫苗保护剂）分别与鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ Ｈ１２０、Ｈ５２、ＨＫ肾型）弱毒原液，按一定比例配苗，采取特定的冻干曲线制备的试验疫苗，在不同温度下保存后测定效价变化情况。试验证实，Ａ组保护剂耐热保护性能最好，在２～８℃条件下有效保存期达２年以上，达到国外同类产品水平。     

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗耐热保护技术的研究

疫苗保护剂及其冻干工艺是影响疫苗效果的重要因素，对疫苗保存、运输及免疫效果有很大影响。为提高疫苗质量，在常规保护剂(明胶、蔗糖)基础上添加卡波姆、聚乙二醇和聚乙烯吡咯烷酮等基质，组成新型保护剂，分别在病毒液保存和疫苗冻干过程添加，并评价其病毒保护效果。结果表明：在半成品病毒液储存时加入10%新型保护剂，可使半成品保存期由原来的2个月延长至12个月。采用新型保护剂制备的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗，溶解性显著优于常规保护剂活疫苗，保存期由原来-20℃保存18个月提高到2～8℃保存36个月，且病毒活性及攻毒保护效力均优于原工艺产品，实现了储运过程中疫苗的冷藏储运，提升了疫苗的应用效果。     

屎肠球菌QW256冻干保护剂优化及菌粉贮藏稳定性研究

试验旨在探究屎肠球菌QW256菌粉制备工艺。研究屎肠球菌QW256菌粉制备过程中的离心条件、保护剂与复配、菌粉贮藏稳定性等因素对菌体存活率的影响。结果显示：菌体收集的最佳离心条件为6 000 g、10 min,悬浮基质为1.9%硫代硫酸钠溶液,优化后的最佳冻干保护剂配方为甘露醇25.38 g/L、蔗糖34.65 g/L、甘氨酸4.17 g/L和抗坏血酸钠1.57 g/L;在该条件下,屎肠球菌冻干存活率达95%以上,菌粉在25℃保藏100 d的存活率达85%以上。研究表明,复合冻干保护剂的研发对屎肠球菌的冻干及贮藏稳定性具有良好的保护作用。     

冻干益生菌微胶囊保护剂及抗性研究

本试验对嗜热链球菌微胶囊的冻干保护剂进行了筛选，对冻干工艺进行了优化，并对冻干嗜热链球菌微胶囊对胃液、肠液和贮存等胁迫作用的抵抗力进行了研究。结果显示：（1）最优的复合冻干保护剂为甘油2%，脱脂乳6%，抗坏血酸0.6%，海藻糖9%|存活率为80%|（2）添加冻干保护剂的微胶囊经模拟胃液处理150 min后,存活率为61%|未添加保护剂的微胶囊存活率为51%|（3）在模拟肠液中，添加冻干保护剂的微胶囊完全释放仅需60 min，而菌液对照组需要120 min才能释放完全|（4）4 ℃条件下贮存60 d后，嗜热链球菌冻干微胶囊存活率为77%，未冻干微胶囊存活率为62%|（5）冻干微胶囊分别在-20、4、20、37 ℃贮存60 d后，活菌数仍能达到108 cfu/g以上。试验结果表明，添加适宜的冻干保护剂可以提高嗜热链球菌微胶囊的性能，增强嗜热链球菌对胃液、肠液和贮存等体内外不良环境的抗性。 [关键词] 冻干|益生菌|微胶囊     

两歧双歧杆菌TMC3115冻干菌粉生产工艺优化

为制备高活性两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum）TMC3115冻干菌粉,对培养基初始pH值和初始接种量进行研究,同时对不同碳源和氮源进行初步筛选,进而以发酵16 h发酵液pH值、光密度和活菌数为评价指标,通过正交试验对碳源和氮源组合进行筛选。考察18 种冻干保护剂对两歧双歧杆菌TMC3115的冻干保护效果,并通过正交试验确定复合冻干保护剂配方。结果表明：两歧双歧杆菌TMC3115在培养基初始pH值7.2、接种量4%时所得发酵液活菌数最高;两歧双歧杆菌TMC3115发酵培养基配方为葡萄糖添加量25 g/L、胰酪蛋白胨20 g/L、酵母蛋白胨10 g/L、酵母浸粉FM902 15 g/L、柠檬酸氢二铵2 g/L、无水乙酸钠5 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、吐温-80 1 g/L、硫酸镁0.58 g/L、硫酸锰0.25 g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5 g/L;最佳冻干保护剂配方为：脱脂乳添加量12%、海藻糖12%、丙三醇1.2%、谷氨酸钠0.6%、L-半胱氨酸盐酸盐0.15%,此条件下,两歧双歧杆菌TMC3115冻干粉活菌数达到4.26×1011 CFU/g。