二斑叶螨对阿维菌素抗性的CAPS标记

为了实现二斑叶螨Tetranychus urticae Koch对阿维菌素抗药性的快速检测,本研究建立了一种叶螨对阿维菌素抗药性的快速分子检测技术,即酶切扩增多态性序列(cleaved amplified polymorphic sequences,CAPS)标记技术,检测二斑叶螨谷氨酸门控氯离子通道(Glu Cl3)基因片段上G326E的突变频率,并采用琼脂浸叶法测定田间5个种群对阿维菌素的抗药性。结果表明,北京密云、顺义、昌平、浙江宁波和海南吉阳5个种群对阿维菌素的抗性倍数分别达1 155.63、1 317.10、844.19、314.95和1 799.69倍,均为极高抗性水平;CAPS检测发现我国二斑叶螨抗性基因存在G326E位点突变,但在供试的5个不同种群中突变频率变异很大,其中北京昌平种群G326E突变频率高达90.00%,密云和顺义种群均为26.67%,浙江宁波种群为5.00%,而海南吉阳种群不存在该位点的突变。表明该CAPS标记还需与其它抗性机制或检测技术结合来实现叶螨对阿维菌素抗性的早期检测和预警。     

阿维菌素生物农药防治二斑叶螨药效试验

７０５１杀虫素、集琦虫螨克均属阿维菌素系列生物农药,其主要特点是杀虫、杀螨、广谱、高效、低毒、安全、不易使害虫产生抗性。针对二斑叶螨寄主范围广、食性杂、繁殖速度快、抗药性强的特点,我们特选用以上两种生物农药进行试验、示范,现将结果整理如下。１材料和方...     

二斑叶螨对常用杀螨剂的抗药性测定

采用玻片浸渍法 ,测定了二斑叶螨Tetranychus urticae Koch山东寿光种群 (R1)和山东烟台种群 (R2 )对常用杀螨杀虫剂的抗性 ,与山东泰安相对敏感种群 (S)相比 ,对哒螨灵、高效氯氟氰菊酯和甲氰菊酯 3种药剂的抗性 ,R1分别达 6.67、6.33和 10.36倍 ,R2分别达 26.56、15.4 5和 31.30倍 ,R1和 R2对上述 3种药剂均产生了较高水平的抗药性。另外,R1、R2种群对其它药剂也均表现出了不同程度的抗性现象。     

二斑叶螨对螺螨酯抗药性及对18种杀螨剂交互抗性

采自甘肃兰州兴隆山公园的二斑叶螨(Tetranychus urticae Koch),用雌雄单系培养敏感品系(S),用螺螨酯处理二斑叶螨种群培养抗性品系(SP R),用室内生测法对二斑叶螨S和SP R品系进行室内毒力测定。结果表明,二斑叶螨对螺螨酯抗性发展初期较慢,中期稳定,后期较快,选育至26代抗性指数(RI)达58.83。SP R对甲氰菊酯、氯氰菊酯有一定的交互抗性,RI分别为11.54和10.03;对苯丁锡、四螨嗪、苦皮藤生物碱、阿维菌素、氯氟氰菊酯、哒螨&#8226;四螨嗪、哒&#8226;水胺硫磷、三唑锡、三氯杀螨醇、哒螨灵、氧化乐果无交互抗性(1＜RI<5.00);对浏阳霉素、毒死蜱、噻螨酮、柴油、哒螨灵、唑螨酯可能存在负交互抗性(RI<1)。     

二斑叶螨对阿维菌素抗性和敏感品系相对适合度的研究

在室内25℃条件下通过构建实验种群生命表,比较二斑叶螨对阿维菌素抗性品系(R)和敏感品系(S)的一系列生长发育和繁殖特征参数。结果表明:二斑叶螨抗性品系(R)的发育历期、孵化率、幼螨存活率、有效产卵量等诸多指标与敏感品系(S)相比均存在一定的不利性。抗性品系的相对适合度仅为敏感品系的0.53倍,存在适合度缺陷。     

抗梅岭霉素和阿维菌素二斑叶螨种群生命力和繁殖力的研究

采用营养液培养的棉苗饲养二斑叶螨Tetranychus urticae Koch,用梅岭霉素、阿维菌素对其逐代进行抗性选育,至第9代,测定了两个抗性种群的抗性水平、生命力和繁殖力。结果表明:梅岭霉素抗性种群的抗性达7.9倍,其雌成螨寿命、产卵量、卵的孵化率和后代若螨成活率分别比对照增加54.08%、39.93%、6.57%和-15.44%。阿维菌素抗性种群的抗性达5.8倍,其雌成螨寿命、产卵量、卵的孵化率和后代若螨成活率分别比对照增加15.88%、10.87%、5.86%和-9.32%。由此发现梅岭霉素和阿维菌素对二斑叶螨的生长发育和繁殖有一定有利作用,抗性风险性较大,应引起重视。     

二斑叶螨对螺螨酯的抗性选育及现实遗传力

二斑叶螨TetranychusurticaeKoch是我国蔬菜、花卉、果树上的重要害螨,对多种杀虫、杀螨剂容易产生抗药性。螺螨酯（spirodiclofen）对二斑叶螨等多种害螨防效突出,对卵和幼若螨杀伤力较强,而且对雌成螨有很强的不育作用。作者等参考Tabashnik的概率值分析法,研究二斑叶螨对螺螨酯的抗性现实遗传力（h2）,预测二斑叶螨对该药剂产生抗性的速率,以便合理使用农药。     

二斑叶螨的检疫重要性

二斑叶螨的检疫重要性程立生（华南热带作物学院植保系）１二斑叶螨（ＴｅｔｒａｎｙｃｈｕｓｕｒｔｉｃａｅＫｏｃｈ）是一种世界性的大害螨，但在我国仅局部分布于台湾岛、北京市和天水市郊。据报道，二斑叶螨在国外主要分布于美国北部、英国、土耳其、地中海沿岸、南非...     

二斑叶螨抗阿维菌素品系选育及其解毒酶系活力变化

采用室内生物测定和生化分析方法, 以采自甘肃兰州国家级森林公园兴隆山的二斑叶螨为敏感品系(SS), 研究二斑叶螨对阿维菌素的抗药性及抗性生化机理。结果表明：在室内用阿维菌素强化筛选24代, 获得了二斑叶螨抗阿维菌素品系(Ab-R24), 抗性指数(resistance index, RI)为321.5。对SS和Ab-R24解毒酶活性的分析表明, Ab-R24品系体内羧酸酯酶(CarE)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、酸性磷酸酯酶(ACP)、碱性磷酸酯酶(ALP)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)和多功能氧化酶(MFO)活性分别是SS品系的1.43、1.18、1.56、1.48、1.55倍和4.02倍, 差异达到显著水平(P < 0.05), 其中MFO的活性上升最为显著。对SS和Ab-R-24解毒酶动力学常数的分析表明, Ab-R-24品系体内AchE、GSTs和MFO的 Km分别是SS品系的1.14、2.31倍和2.58倍; Vmax分别是SS品系的1.19、2.34倍和1.76倍, 差异均达到显著水平(P <0.05)。说明二斑叶螨对阿维菌素抗性增高与MFO活性快速升高有关, AchE和GSTs也参与阿维菌素抗性的形成。     

二点叶螨对16种杀虫、杀螨剂的抗药性

以兰州吐鲁沟公园采集的二点叶螨为敏感种群（S），测定了兰州安宁区（R1）、红固区（R2）、天水（R3）、平凉（R4）、庆阳（R5）等地果园的二点叶螨抗性种群对16种杀虫、杀螨剂的抗性水平。结果表明，五地果园二点叶螨种群（R）对水胺硫磷、久效磷、克螨特、双甲脒、甲氰菊酯（R2除外）、联苯菊酯（R2除外）均已产生抗药性。其中R3种群对甲氰菊酯、克螨特、三氟氯氰菊酯、双甲脒、三氯杀螨醇的抗性最高，抗性指数（RF）分别为280．51、107．36、107．12、98．17、69．57倍；R4种群对水胺硫磷、克螨特、久效磷的RF值分别为97．15、82．94和65．39倍；其次是R1种群对甲氰菊酯、水胺硫磷、克螨特的RF值分别为75．05、60．97、60．14倍。五地果园二点叶螨抗性种群对氰久合剂、氧乐菊酯、氯马乳油、螨嗪菊酯、齐螨素、螨蚧克和四螨嗪的RF值均在14倍以下，对氧化乐果的RF值在22倍以下。     

健康和虫害菜豆对二斑叶螨、西花蓟马发育及繁殖的影响

为明确西花蓟马Frankliniella occidentalis （Pergande）和二斑叶螨Tetranychus urticae Koch取食的菜豆对后取食昆虫的影响,研究了二斑叶螨和西花蓟马分别取食健康和虫（螨）害菜豆时生长发育和繁殖情况,并组建生命表,比较生命参数的异同。二斑叶螨取食健康菜豆和西花蓟马2龄若虫为害菜豆时未成熟期没有明显区别,但各螨态的存活率在健康菜豆上较高;取食健康菜豆时,雌成螨寿命为24.56 d,内禀增长率为0.2640,均高于取食西花蓟马为害菜豆。西花蓟马的未成熟期取食两种菜豆时也没有明显的区别,但二斑叶螨为害菜豆使西花蓟马的存活率下降;西花蓟马雌成虫平均寿命和单雌日产卵量在健康菜豆上分别为33.35 d和4.02粒,显著高于螨害菜豆,在健康菜豆上净增殖率也较高,为40.4264。研究表明,西花蓟马或二斑叶螨为害后的叶片对后取食害虫的生长发育影响不大,但对其存活率和繁殖均产生不利影响,西花蓟马和二斑叶螨取食诱导菜豆产生了一定的防御反应。     

Purification and partial characterization of a glutathione S-transferase from the two-spotted spider mite, Tetranychus urticae

Glutathione S-transferases (GSTs) are known to catalyze conjugations by facilitating the nucleophilic attack of the sulfhydryl group of endogenous reduced glutathione on electrophilic centers of a vast range of xenobiotic compounds, including insecticides and acaricides. Elevated levels of GSTs in the two-spotted spider mite, Tetranychus urticae Koch, have recently been associated with resistance to acaricides such as abamectin [Pestic. Biochem. Physiol. 72 (2002) 111]. GSTs from acaricide susceptible and resistant strains of T. urticae were purified by glutathione-agarose affinity chromatography and characterized by their Michaelis-Menten kinetics towards artificial substrates, i.e., 1-chloro-2,4-dinitrobenzene and monochlorobimane. The inhibitory potential of azocyclotin, dicumarol, and plumbagin was low (IC₅₀ values > 100 μM), whereas ethacrynic acid was much more effective, exhibiting an IC₅₀ value of 4.5 μM. GST activity is highest in 2-4-day-old female adults and dropped considerably with progressing age. Furthermore, molecular characteristics were determined for the first time of a GST from T. urticae, such as molecular weight (SDS-PAGE) and N-terminal amino acid sequencing (Edman degradation). Glutathione-agarose affinity purified GST from T. urticae strain WI has a molecular weight of 22.1 kDa. N-terminal amino acid sequencing revealed a homogeneity of ≈50% to insect GSTs closely related to insect class I GSTs (similar to mammalian Delta class GSTs).     

Induction of cytochrome P450 monooxygenase activity in the two-spotted spider mite Tetranychus urticae and its influence on acaricide toxicity

Detoxification by cytochrome P450 monooxygenases is an important mechanism involved in pesticide resistance in insects and mites. The activity of these enzymes can be induced by a variety of chemicals. The aim of this study was to evaluate the effect of six P450 inducers (phenobarbital, barbital, 3-methylcholanthrene, geraniol, isosafrole, pentamethylbenzene), known to have an inducing activity in insects and mammals, on the O-deethylation activity in the two-spotted spider mite Tetranychus urticae. Treatment with barbital, phenobarbital and geraniol resulted in a dose-dependent increase in activity. Neither 3-methylcholanthrene, isosafrole nor pentamethylbenzene were effective inducers. Time course studies showed that induction by geraniol and barbital started rapidly within a period of 1-4 h after initiation of the treatment, while maximal activity was reached within 4 and 48 h, respectively. In addition, it was shown that induction with xenobiotic compounds can alter the monooxygenase-mediated acaricide tolerance in a susceptible strain of T. urticae. Although barbital induced higher levels of P450 activity, geraniol proved to be a better compound to decrease toxicity of the tested acaricides.     

加州新小绥螨对土耳其斯坦叶螨的捕食作用

为明确加州新小绥螨Neoseiulus californicus （McGregor）对土耳其斯坦叶螨Tetranychus turkestani （Ugarov et Nikolski）的捕食潜力,采用捕食功能反应方法,研究了加州新小绥螨对土耳其斯坦叶螨各螨态的捕食作用。加州新小绥螨对雌成螨、若螨、卵的选择性捕食系数分别为0.44、1.25和1.35。在不同温度条件下,加州新小绥螨对土耳其斯坦叶螨的功能反应均属于Holling-Ⅱ型;28 ℃时捕食能力最强,对土耳其斯坦叶螨雌成螨、若螨和卵的攻击系数分别是0.6279、0.7203和0.7554,最大日捕食量分别为10.81头、28.49头和 40.82粒。在相同温度下,加州新小绥螨雌成螨寻找效应随着猎物密度的增加而降低;在相同密度下,寻找效应随温度的升高先增加后减小,在28 ℃时寻找效应最高,为0.535。加州新小绥螨的捕食作用存在较强的种内干扰作用（m=0.520）,随着捕食者密度的增大,平均捕食量逐渐减少,捕食作用率也相应降低。研究表明加州新小绥螨对土耳其斯坦叶螨具有很好的控制潜力。     

苹果园二斑叶螨的经济为害水平

二斑叶螨是为害苹果的重要害螨。为经济有效地控制其为害,通过田间调查二斑叶螨种群动态,利用螨日（MD）和苹果的产量损失率建模,研究了苹果树上二斑叶螨的经济为害水平（EIL）。结果显示,苹果的产量损失率与二斑叶螨的螨日具有显著相关性,并据此建立了螨日与产量损失率的回归方程：Q=0．0157＋0．00016MD,R2=0．9567。在经济允许损失率为4．57％时,若以虫口密度作为经济允许为害水平的评价方法,则7月3日之前的EIL≤7．70头／叶,7月25日之前的EIL≤8．70头／叶;当以累计螨日评价时,7月3日之前累计螨日≤29．93,7月25日之前累计螨日≤122．95,在整个生长季的累计螨日需低于188．70。     

Tetranychus urticae Koch induced accumulation of salicylic acid in frijole leaves

The contents of free salicylic acid and conjugated salicylic acid were determined by using TLC and HPLC at different time after attack by Tetranychus urticae Koch in the first true leaf of frijole (Phaseolus vulgaris. L) plant. A maximal nine fold increase in the free salicylic acid content in the attacked leaves was observed. The increase of conjugated salicylic acid was also significant. The content of free salicylic acid in the systemic leaves increased about 500%, while the content of conjugated salicylic acid in the systemic leaves increased by two to three times.     

加州新小绥螨对朱砂叶螨的控制作用

为明确加州新小绥螨Neoseiulus californicus（McGregor）国内种群对朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus（Boisduval）的控制潜力,应用功能反应、数值反应及实验种群生命表参数评价了该捕食螨对朱砂叶螨的控制能力。加州新小绥螨对朱砂叶螨的功能反应能很好地拟合Holling Ⅱ方程。在25℃,加州新小绥螨雌成螨对朱砂叶螨卵、幼螨、若螨和成螨的功能反应参数a/T_h值分别为42.4195、81.6275、54.3044和17.9399,对朱砂叶螨幼螨、若螨和卵的控制力高于成螨。在19~31℃,加州新小绥螨对朱砂叶螨雌成螨日均捕食量和对猎物的控制能力a/T_h随温度升高而增大,在31℃时达最大值,分别为10.80头和29.5364。在28℃时,加州新小绥螨的净增殖率和内禀增长率分别为26.1522和0.2213。表明加州新小绥螨国内种群表现出重要的生物防治潜能。     

两种外源二型硫酯酶TEII对链霉菌NRRL8165产生阿维菌素的影响

利用接合转移的方法将不同来源的二型硫酯酶(TEII,type II thioesterase)导入链霉菌S.avermitilis NRRL8165中构建了两种突变株,同时研究比较了两种突变株与野生型在等量发酵时阿维菌素产量的变化。结果表明:导入Tetrocarcin A的TEII突变株阿维菌素的产量提高了96.52%;导入氯丝菌素(Chlorothricin)的TEII突变株阿维菌素的产量提高了38.06%。进一步验证了TEII对聚酮类次级代谢产物的生物合成具有编辑和纠错功能。