牛白血病病毒的鉴定及防控

牛白血病病毒是牛最常见的肿瘤性疾病之一,在临床医疗中并不多见,由于缺乏对该病的认识,临床上诊断经常误诊,本文通过NBCI网站查找牛白血病病毒的基因序列,利用Primer 5.0软件设计一对特异性引物,对该引物进行反应条件的优化,并利用该引物对牛白血病病毒基因进行扩增;结果显示该引物扩增的目的片段为194bp,能够作为PCR技术鉴定牛白血病病毒。     

奶牛牛病毒性腹泻病毒与冠状病毒混合感染的PCR诊断

为了对河北省石家庄市某奶牛场发病及死亡奶牛进行确诊,试验对腹泻奶牛的粪样进行了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛冠状病毒(BCoV)PCR检测,同时对病死奶牛脏器样品进行BVDV、BCoV、传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)及牛细小病毒(BPV)的PCR检测。试验结果显示,6份粪样BVDV阳性率为50%,BCoV阳性率为33.3%,同一份粪样中可同时检测出BVDV和BCoV两种病毒。小肠、肺脏和肝脏中均检出BVDV和BCoV,未检测出IBRV、BRV和BPV。结果表明,BVDV和BCoV为阳性,IBRV、BRV和BPV结果为阴性。最后确诊为BVDV和BCoV的单一感染和混合感染。     

应用聚合酶链式反应检测牛白血病前病毒DNA

牛白血病病毒（BLV）是地方流行型牛白血病的病原体，通常用AGID，ELISA试验检测病毒抗体，现用聚合酶链式反应（PCR）检测BLV，可从感染宿主检测到100ng前病毒DNA，使本试验的敏感性提高了两个对数组数，而且无论是在淋巴细胞还是在肿瘤细胞，以及各个感染时期都可检出前病毒DNA。     

牛诺如病毒及牛嵴病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用

本研究根据BNoV和BKoV基因组的保守区域设计2对特异性引物,建立了能同时检测牛诺如病毒(Bovine norovirus,BNo V)和牛嵴病毒(Bovine kobuvirus,BKo V)的双重PCR检测方法。该方法能特异性扩增BNo V和BKo V的目的条带,且未扩增出其他犊牛腹泻病毒性病原;BNoV和BKoV的最低检测限分别为5.39×105 copies/μL和2.23×106 copies/μL;对临床采集的127份犊牛腹泻样品检测结果显示,BNoV的阳性率为6.30%(8/127),BKoV的阳性率为4.72%(6/127),两者与单一PCR检测结果相一致,符合率为100%。本研究建立的双重PCR方法具有良好的敏感性、特异性、重复性,可用于BNoV和BKoV的快速检测和流行病学调查。     

牛传染性支气管炎病毒PCR诊断方法的研究

根据已发表的牛传染性鼻气管炎病毒（ＩＢＲＶ）ｇＢ基因序列,应用ｏｌｉｇｏ４．１程序设计一对引物ＰＢ１／ＰＢ２,分别对ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、ＢａｒｔｈａＮｕ／６７株、Ｂ７株、云南－１和云南－２分离株进行ＰＣＲ扩增。结果显示７株ＩＢＲ病毒ＤＮＡ均有３９９ｂｐ的特异性片段。用此引物对其同属的伪狂犬病毒（ＰＲＶ）、马立克氏病毒（ＭＤＶ）、鸡传染必喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）进行扩增。均未见特异性条带,证     

聚合酶链反应检测牛白血病病毒的研究

试验针对牛白血病病毒（ＢＬＶ）前病毒基因的特点，设计一对引物，对ＢＬＶ前病毒的ＤＮＡ提取物和细胞毒直接煮沸产物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增３０个循环后，经电泳分离，紫外灯下可见到一条明显的ＤＮＡ带，其大小为４４０ｐｂ。对连续３年琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）ＢＬＶ阳性的２０头牛血样ＤＮＡ提取物进行ＰＣＲ扩增，阳性率为７０％。本法具有敏感、特异、快速及良好的重复性等特点。     

牛白血病前病毒Taqman荧光PCR检测方法的建立

设计并合成荧光引物,建立了Taqman荧光PCR体系,可快速检测全血样品中的牛白血病前病毒DNA。所建立的荧光PCR体系可特异检测牛白血病病毒核酸,而对牛病毒性腹泻—粘膜病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)以及羊胎肾细胞(FLK)、牛布鲁氏菌扩增均呈阴性反应,对pBST-pol重组质粒的检测敏感性可达0.32拷贝。重复性实验的Ct值变异系数介于0.67%~1.16%之间,稳定性实验的Ct值变异系数为3.14%。采用建立的Taqman荧光PCR体系和OIE推荐的套式PCR对94份临床样品进行检测,两者定性符合率达到97.87%。     

PCR／PFLP鉴别伉禽白血病病毒

用PCR方法从禽白血病病毒（avian leukosis virus,ALY）亚群毒株RAV－1、RAV－2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞（CEF）分别扩增出1．2kb基因手段。RAV－1囊膜基因可初BglⅡ分为2条相近的600bp片段，RAV－2囊膜基因被BamHI分为2条约600bp片段，对照组基因片段（内源性病毒）不被BglⅡ和BamHI切割。结果显示，ALV囊膜基因PCR／RFLP可用于诊断禽白血病和鉴别不同的AVL毒株。     

控制牛白血病病毒感染的犊牛管理

<正> 牛白血病病毒(BLV)是一种致病性后病毒(retrovirus),它能使牛只引起持续性淋巴细胞增生和淋巴肉瘤。控制BLV过程中有个重要问题需要思考,即是通过适当的犊牛管理,以预防感染,其原则目的是使该病毒的传播尽可能地压缩到最低限度。     

应用灭活疫苗防制牛白血病病毒感染

检测了用感染牛白血病病毒（ＢＬＶ）的ＬＫ１５细胞系（ＬＫ１５疫苗）或蝙蝠肺细胞系（Ｂａｔ疫苗）制备的苗对牛的保护作用。１２头牛间隔４周免疫接种２次，然后于第２次接苗后４周攻毒，用ＬＫ１５疫苗接种的９头牛产生了ＢＬＶ特异性糖蛋白（ｇｐ）抗体，其琼扩试验效价为１：１６～１：６４。用１００μ１（含７０～１００个合胞体）ＢＬＶ持续感染奶牛血液攻击的４头牛均获得保护。其余５头牛用５００μ１感染牛血液攻毒，仅     

肉食兽细小病毒通用PCR诊断技术的建立

根据肉食兽细小病毒核苷酸序列高度同源的特点，设计合成了1对引物，以犬细小病毒、貂肠炎病毒和猫泛和白细胞减少症病细胞培养物为DNA模板，进行PCR特异性片段扩增，扩增片段大小为0．6kb。结果表明，扩增产物与设计的2个引物之间的序列大小一致。通过通用性、特异性与敏感性试验及对临床检样品检测，证明本法对肉食兽细小病毒通用。且具有快速、特异和高度敏感的特点。