促性腺激素对山羊卵母细胞体外成熟的影响

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,本试验研究了在成熟培养液中添加不同浓度的促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体素(luteinizing hormone,LH),不同来源的FSH+LH对山羊卵母细胞体外培养成熟效果的影响。结果表明,采用TCM199添加10%FCS,1～2mg/L17β-E2,10mmol/LHepes,0.055mg/mL丙酮酸钠,2.2mg/mL NaHCO3,500μg/mL链霉素,500μg/mL青霉素,10mg/L FSH及20mg/LLH的培养体系,有利于山羊卵母细胞的体外成熟;进口的和国产FSH和LH对山羊卵母细胞成熟有相同促进效果。     

多种激素对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

为了探讨促卵泡素(FSH)、人绒毛膜促性膜激素(HCG)、雌二醇(E_2)三种激素和丙酮酸钠在卵母细胞体外成熟培养液中的最佳添加浓度,深入研究小鼠卵母细胞体外成熟的规律,进而完善小鼠卵母细胞体外成熟培养体系,试验对小鼠卵母细胞进行体外培养,在完全培养基中单独或组合添加FSH、HCG、E_2三种激素,并在此基础上添加不同浓度的丙酮酸钠,分别测定第一极体(PB1)排出率和自然裸卵细胞(NO)死亡率。结果表明:小鼠卵母细胞经体外培养14 h后,在完全培养基中只添加FSH,1 IU/mL FSH试验组的卵母细胞体外成熟率最高,PB1排出率为52.50%, NO死亡率为15.00%;在只添加HCG以及1 IU/mL FSH和HCG组合添加试验中, 1 IU/mL HCG试验组卵母细胞体外成熟率最高,PB1排出率分别为35.70%和53.83%,NO死亡率分别为67.50%和25.00%;在只添加E_2试验中,1μg/mL E_2试验组卵母细胞体外成熟率最高,PB1排出率为47.00%,NO死亡率为0;在添加1 IU/mL FSH、1 IU/mL HCG和1μg/mL E_2的条件下添加不同浓度的丙酮酸钠,0.04 mg/mL丙酮酸钠试验组卵母细胞体外成熟率最高,PB1排出率为75.80%,NO死亡率为11.37%。说明在完全培养基中添加1 IU/mL FSH、1 IU/mL HCG、1μg/mL E_2和0.04 mg/mL丙酮酸钠,对小鼠卵母细胞PB1排出的促进作用最好,对NO体外成熟培养效果最好。     

FSH和LH对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响

实验主要研究促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响,从而提高延边黄牛体细胞克隆的效率。采集屠宰后延边黄牛卵巢,用抽吸法回收卵母细胞,然后在不同种类、浓度激素条件下进行卵母细胞的体外成熟培养,最后将成熟的卵母细胞进行核移植及重组胚的体外培养。实验分别比较了在0、5、10、15、20μg/mL条件下,单独使用FSH与LH和在15μg/mL的FSH与10μg/mL的LH共同作用下对延边黄牛卵母细胞体外成熟率、卵裂率和囊胚发育率的影响。结果表明:将卵母细胞单独置于加有浓度为15μg/mL的FSH和10μg/mL的LH的成熟液中培养,其成熟率及后期发育率优于其他浓度组(P<0.05);而2种最优浓度同时添加共同作用时要好于单独使用(P<0.05)。由试验可得出,成熟培养液中单独添加15μg/mL的FSH和单独添加10μg/mL的LH浓度对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚后期发育效果最好;使用最佳浓度进行协同作用时,其共同作用要好于单独使用的效果。     

人尿促性腺激素、雌二醇及表皮生长因子对牛卵母细胞体外成熟质量的影响

试验旨在研究不同激素配比及表皮生长因子(EGF)浓度对牛卵母细胞体外成熟及卵母细胞质量的影响。将随机分组的卵丘-卵母细胞复合体于添加FSH+LH、HMG、FSH+LH+E₂、HMG+E₂ 4种不同激素组合配比的成熟基础液中培养,对比其体外成熟率,比较了EGF对牛卵母细胞体外成熟率和孤雌胚胎体外发育的影响,并采用TUNEL法检测添加不同浓度EGF的牛孤雌激活囊胚细胞凋亡情况。结果表明,添加HMG的成熟试验结果稳定,E₂对牛卵母细胞成熟有一定的促进作用,HMG+E₂联合使用可以得到高效稳定的成熟结果;在此基础上,在成熟液中添加30 ng/mL EGF对牛卵母细胞的成熟质量、胚胎发育及降低胚胎细胞凋亡都有明显的促进作用。因此,在体外成熟培养液中添加0.075 IU/mL HMG、1 μg/mL E₂和30 ng/mL EGF对牛卵母细胞的成熟和质量较为有益。     

促卵泡素和促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本实验探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,并最终找到了其合理的使用剂量.实验选取具有3层致密卵丘细胞层及均匀细胞质的猪卵丘-卵母细胞复合物(COCs)在体外进行成熟培养.体外成熟培养液为改良的TCM-199液,根据实验设计再添加不同浓度的FSH和LH.卵母细胞体外成熟培养条件为39 ℃、5%CO2与饱和湿度下,成熟培养48 h.培养结束后,以第1极体排出作为卵母细胞成熟的标准.在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(成熟率为15.9%)相比,成熟率有显著提高,前者成熟率分别为49.1%、30.0%、36.3%.LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(P＜0.05);然后以成熟液中只添加浓度为1 IU/mL LH为对照组,实验组添加FSH浓度分别为1、5、10 IU/mL.结果表明,添加FSH浓度为5 IU/mL和10 IU/mL时其成熟率分别为40.1%、27.6%,低于对照组(49.0%).添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著(P＞0.05).试验表明,随着FSH与LH添加浓度逐渐增加,成熟率呈下降趋势.添加FSH与LH浓度均为1 IU/mL可得到最佳的成熟效果.     

激素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为研究不同激素及其组合在猪卵母细胞体外成熟及对其后孤雌胚胎发育的影响,我们对比了孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛膜促性腺激素(hCG)组合、卵泡刺激素(FSH)与促黄体素(LH)组合、雌二醇(E2)及这些卵母细胞经孤雌激活后囊胚率的影响;以及不同FSH和LH浓度组合对猪卵母细胞体外成熟率。结果表明,在卵母细胞体外成熟液中添加10 U/mL PMSG和10 U/mL hCG的成熟率和孤雌囊胚率都达到最高(85.9%和55.3%);FSH与LH的组合次之,分别为77.1%和53.5%;E2最差,成熟率仅为54.0%囊胚率为19.5%。而在FSH与LH不同浓度配比中以10 U/mL FSH和20 U/mL LH时,猪卵母细胞成熟率最高达到80.9%。     

构筑山羊卵母细胞体外成熟体系的研究

在细胞核移植过程中,体细胞必须在卵母细胞内进行重编程以恢复其全能性,卵母细胞成熟度直接影响体细胞重编程,故卵母细胞体外成熟培养是体细胞核移植极其重要的环节,而卵母细胞又受环境、培养液浓度、培养温度等影响。文章通过探讨不同浓度的FSH和LH及HMG影响山羊卵母细胞体外成熟因素的研究,建立了山羊卵母细胞体外成熟体系,为山羊核移植及以后的优良育种奠定基础。     

生殖激素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

母羊体内生殖激素在不同季节的分泌水平是不同的，这就说明在不同季节，需要不同的生殖激素浓度刺激，才能使卵母细胞体外成熟效果达到最佳。由于本试验是在夏季绵羊乏情季节进行，所以通过对比FSH、LH和雌激素不同浓度对绵羊卵母细胞的体外成熟影响，期望优化出适合晋中绵羊夏季乏情季节体外成熟培养所需的生殖激素的添加方案，完善乏情季节晋中绵羊卵母细胞体外成熟的体系。     

不同促性腺激素添加方式对猪卵母细胞生发泡染色质构型和卵母细胞成熟能力的影响

在卵母细胞体外成熟培养过程中,培养基中添加激素与否及其激素添加的先后顺序是影响猪卵母细胞核成熟和质成熟的一个重要因素.本试验将猪卵母细胞分别在FSH→不含激素、FSH→LH、FSH LH不含激素中培养48 h(培养第20～22 h后换液),并于成熟培养的第24 h(未换液)、48 h将卵母细胞进行荧光染色,观察其生发泡内染色质构型及卵母细胞核成熟情况.实验表明:(1)在IVM的前24 h,添加FSH LH组的GVIV期卵母细胞比例低于只添加FSH组,但差异不显著(8.99%比17.19%,P＞0.05);(2)在FSH存在的情况下,IVM的前期和后期添加LH能促进卵母细胞发生GVBD;(3)FSH LH培养24 h后转入不含激素培养基组,卵母细胞的核成熟比率显著高于添加FSH组和先添加FSH培养24 h后转入添加LH组(P＜0.05).     

影响小鼠卵母细胞体外成熟和体外受精效果的因素分析

研究卵母细胞发育程度和不同营养因子对小鼠卵母细胞体外成熟及体外受精率的影响。小鼠卵母细胞分别在含有FSH、BSA和胰岛素的培养液中体外成熟 ,在Whitten氏液中体外受精 ,比较体外成熟率、体外受精率。卵丘卵母细胞 (COC)较裸卵 (DO)的体外成熟率、体外受精率都低。FSH和胰岛素均能提高小鼠卵母细胞的体外成熟率、体外受精率。BSA可以降低小鼠卵母细胞体外受精率。GV期卵母细胞的体外受精率显著低于体外培养的排出第一极体的卵母细胞。 (P2 -cell <0 0 5 ,P受精 <0 0 5)。     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本试验探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(15.9%)相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49.1%、30.0%、36.3%。LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(p<0.05);然后以成熟液中只添加1 IU/mLLH为对照组,试验组分别添加1、5、10 IU/mLFSH。试验结果表明:添加FSH浓度为5和10 IU/ml时其成熟率分别为40.1%、27.6%,低于对照组(49.0%)。添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著(p>0.05)。两组试验同时得出,随着LH与FSH添加浓度的增加,成熟率呈下降趋势。通过本试验结果得出,在体外成熟培养猪卵母细胞时,各添加1 IU/mL LH与FSH时,得到最佳的成熟效果。     

不同促性腺激素添加方式对猪卵母细胞的影响

在卵母细胞体外成熟培养过程中,培养基中添加激素与否及其激素添加的先后顺序是影响猪卵母细胞核成熟和质成熟的一个重要因素。本试验将猪卵母细胞分别在FSH→不含激素、FSH→LH、FSH＋LH→不含激素中培养48h（培养第20～22h后换液）,并于成熟培养的第24h（未换液）、48h将卵母细胞进行荧光染色,观察其生发泡内染色质构型及卵母细胞核成熟情况。实验表明：1）在IVM的前24h,添加FSH＋LH组的GV Ⅳ期卵母细胞比例低于只添加FSH组,但差异不显著（8．99％vs17．19％,P〉0．05）;2）在FSH存在的情况下,IVM的前期和后期添加LH能促进卵母细胞发生GVBD;3）FSH＋LH培养24h后转入不含激素培养基组,卵母细胞的核成熟比率显著高于添加FSH组和先添加FSH培养24h后转入添加LH组（64．36％vs20．45％、36．62％、41．98％,P〈0.05）。     

FSH对绵羊卵母细胞体外核成熟的影响

为了探讨FSH对绵羊卵母细胞核成熟的影响,本试验将绵羊卵母细胞体外成熟24 h,并在成熟过程中的4个不同时间段内添加FSH,统计各个时间段卵母细胞的生发泡破裂(germinal vesicle break down, GVBD)及第一极体排出情况。结果显示：①在体外成熟培养的前4 h或前8 h添加FSH,经体外成熟的卵母细胞其生发泡破裂率与不添加FSH组无显著差异;②在体外成熟的4~24 h或8~24 h添加FSH,其第一极体排出率与不添加FSH组有极显著差异。说明,在本试验条件下,FSH对绵羊卵母细胞体外成熟具有显著的促进作用,是在减数分裂的恢复后到减数分裂完成之间的某一阶段起的促进作用。     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

促卵泡素(FSH)与促黄体素(LH)是参与卵母细胞成熟的最重要的蛋白质激素,在猪卵母细胞体外成熟培养中使用较多。大部分研究已经证实了促性腺激素(FSH、LH)在猪卵母细胞体外成熟培养中的重要作用。为进一步探讨FSH与LH对猪卵母细胞体外成熟的影响,确定其对猪卵母细胞体外成熟的作     

绵羊卵母细胞体外成熟的研究

研究了FSH／LH浓度、年龄和采卵季节对绵羊卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：①FSH／LH能促进绵羊卵母细胞体外成熟，适宜的添加浓度很重妻。本实验条件下，添加量以10μg／ml为宜。②成年绵羊卵母细胞成熟率高于性成熟前绵羊，但无显著差异。③发情季节绵羊卵母细胞较乏情季节易成熟。     

不同因素对猪卵母细胞体外成熟培养的影响

本试验旨在探讨不同外源激素组合的添加、胰岛素—转铁蛋白—亚硒酸钠(ITS)的添加、不同培养皿、石蜡油的添加对卵母细胞体外成熟培养(IVM)的影响。结果显示:①孕马血清促性腺激素+人绒毛膜促性腺激素+促卵泡素(PMSG+HCG+FSH)组高于促卵泡素+促黄体素(FSH+LH)组和尿促性腺激素(hMG)组,相互之间差异显著(80.1%、68.3%、53.3%,P<0.05);②添加1% ITS到猪卵母细胞培养液中对卵母细胞成熟率无显著提高(P>0.05),但显著提高了孤雌激活后孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率(63.3%、55.1%,18.7%、12.1%,P<0.05);③凹槽皿组猪卵母细胞成熟率显著高于四孔板和30 mm塑料皿组(73.3%、68.0%、68.3%,P<0.05);④石蜡油的添加对卵丘细胞扩展和卵母细胞体外成熟率均有显著提高(84.8%、69.9%,P<0.05)。结果表明培养液中添加PMSG+HCG+FSH和ITS及选用凹槽皿、成熟培养液上覆石蜡油可提高猪卵母细胞IVM效果。     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本试验探讨了促性腺激素（FSH、LH）对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10IU／mL时,与没有添加FSH与LH的对照组（15．9％）相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49．1％、30．0％、36．3％。LH浓度为1IU,mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组（P〈0．05）;然后以成熟液中只添加1IU/mLLH为对照组,试验组分别添加1、5、10IU/mLPSH。试验结果表明：添加FSH浓度为5和10IU/ml时其成熟率分别为40．1％、27．6％,低于对照组（49．0％）。添加FSH浓度为1IU／mL时其成熟率（49．1％）高于对照组（49．0％）,但差异不显著（P〉0．05）。两组试验同时得出,随着LH与FSH添加浓度的增加,成熟率呈下降趋势。通过本试验结果得出,在体外成熟培养猪卵母细胞时,各添加1IU／mL LH与FSH时,得到最佳的成熟效果。     

不同培养体系对金华猪卵母细胞体外成熟的影响

本试验探讨了不同培养体系对金华猪卵母细胞体外成熟的影响,共进行了4组试验。结果表明,试验组4,采用TCMl99作为体外成熟基础培养液,添加10 IU/mL促卵泡素(FSH)、10 IU/mL促黄体素(LH)、10%卵泡液(PFF)、10%血清,在成熟率上均显著高于其他试验组(P0.05),但添加10%发情金华猪血清或10%胎牛血清,对卵母细胞的成熟率无显著差异(P0.05)。说明金华猪卵母细胞在体外成熟培养时加入血清,能够促进卵母细胞的体外成熟率。     

不同浓度白术多糖及培养温度对牛卵母细胞体外成熟的影响

据大量学者研究表明中药多糖对细胞的生长、分化及增值都具有明显的促进作用.本试验试图通过在牛卵母细胞体外成熟培养液中加入不同浓度梯度的白术多糖溶液,进而对卵母细胞进行体外成熟培养,从中研究不同浓度白术多糖对卵母细胞体外成熟效果的影响,结果发现低剂量:10~50μg/ml白术多糖对牛卵母细胞体外成熟有促进作用;中剂量:50~100μg/ml白术多糖对牛卵母细胞体外成熟作用不明显;高剂量:150~200μg/ml白术多糖严重抑制牛卵母细胞的成熟,甚至使卵母细胞细胞质皱缩.其二试验通过提高卵母细胞的培养温度探索白术多糖对卵母细胞热应激的作用,结果发现最适浓度白术多糖对卵母细胞高温培养有一定的保护作用.     

影响山羊体外胚胎生产的主要因素

研究了不同成熟培养时间（21、242、7 h）、FSH剂量（0、0.02、0.04、0.06 AU/mL）和激素组合（FSH＋LH＋E2、FSH＋LH、LH＋E2、FSH＋E2）、氨基酸以及负压低氧条件（-300 mmHg2、%CO28、%～10%O2）对山羊卵母细胞体外成熟/体外受精（IVM/IVF）的影响。结果表明：山羊卵母细胞成熟培养以24～27 h较为适宜;添加FSH组的受精卵裂率显著高于未添加组（P〈0.01）,添加剂量以0.02～0.04 AU/mL效果为最佳;LH对山羊的IVM/IVF无显著影响;E2添加对山羊IVM/IVF有负面影响,使囊胚发育率显著降低（P〈0.05）。在成熟液中添加必需氨基酸（EAA）和非必需氨基酸（NEAA）均能显著提高受精卵裂率（P〈0.05）。负压低氧环境对山羊卵母细胞的体外成熟无显著影响,但是不利于山羊的体外受精,使受精卵裂率极显著降低（P〈0.01）;负压低氧环境对提高胚胎发育率的作用不明显。