一株具有抑菌活性的粉背雷公藤内生真菌的分离鉴定

从粉背雷公藤新鲜植株中分离筛选具有抑菌活性的内生真菌。采用组织块培养法分离得到107株内生真菌。以金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌、变形球菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌进行体外抑菌试验,通过滤纸片扩散法筛选出一株具有研究潜力的抑菌活性菌株(ETH-1),菌株ITS序列的系统发育分析结果表明ETH-1为拟茎点霉属真菌。     

一株具有抑菌活性的平榛内生真菌的鉴定

[目的]本研究对平榛内生真菌zs-14进行形态学及分子鉴定,并筛选其对不同供试菌株的抑菌活性。[方法]活化斜面试管保藏的内生真菌菌株zs-14,液体发酵培养3～5d,采用液氮研磨法提取菌株zs-14的基因组DNA,应用PCR方法对内生真菌zs-14的ITS序列扩增,扩增产物经测序分析,同时结合菌落形态及乳酸-棉兰染色法的显微观察,最终鉴定内生真菌zs-14的种属;采用纸片扩散法筛选zs-14菌株的抑菌活性。[结果]zs-14菌株产生的分生孢子呈球形状,其菌落为毡毛状,菌落薄,皱缩,菌丝较致密,菌落中心呈浅绿色,最外层为白色。系统进化树结果显示其与Phoma sp聚为一类,因此鉴定内生真菌zs-14为茎点霉菌;纸片扩散法结果显示zs-14菌株发酵后只对金黄色葡萄球菌有抑制活性。[结论]平榛内生真菌zs-14具有产生抑菌活性物质的能力,研究结果可为下一步深入研究其抑菌代谢产物的种类提供科学依据。     

猫儿屎内生真菌分离鉴定及抑菌活性研究

以新鲜猫儿屎为材料,采用组织分离法从其茎、叶、果实中分离内生真菌,采用形态学方法进行初步鉴定;采用滤纸片法测定猫儿屎内生真菌次生代谢产物的抑菌活性.从猫儿屎的茎、叶和果实中共分离出91株内生真菌,分别属于6目7科15属;曲霉属为优势种属,占总量的32％;91株内生真菌具有不同程度的抑菌活性,菌种DS37、DS58、DL06和DL14的抑菌活性较强.结果表明,猫儿屎内生真菌种类具有多样性,次生代谢产物具有广泛的抑菌活性.     

一株核桃树内生真菌的分离鉴定及活性研究

[目的]从核桃树皮内分离筛选具抑菌活性的内生真菌菌株。[方法]核桃树皮经自来水冲洗后置于培养基以产生真菌菌株,对获得的菌株进行形态学观察及抑菌活性测试。[结果]从核桃树皮内分离到一株产广谱、高活性抑菌物质的内生真菌。经测定对细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌共24种病原微生物有不同程度的抑制作用。形态特征表明,该菌株与拟青霉属Paecilomyces Bainier中的淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus的特征基本一致,ITS序列分析显示本菌株与各淡紫拟青霉同源性都高于99%,因此将菌株JY-1024命名为淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinusJY-1024。[结论]该研究首次从核桃树皮内分离得到淡紫拟青霉并首次报道了其抑菌活性。     

雷公藤内生真菌的分离及活性菌株的筛选

以传统药用植物雷公藤为试验材料，分离筛选能产抑制作物病原真菌的活性物质的内生真菌。通过组织分离法，从雷公藤组织中分离得到36株内生菌。发酵和抑菌试验结果表明，10号菌株的代谢产物对多种作物病害病原真菌有明显的抑制作用。10号内生真菌发酵代谢产物对水稻纹枯病菌、黄瓜立枯病菌、黄瓜枯萎病菌、葡萄炭疽病菌、菜豆炭疽病菌、西瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、柑橘炭疽病菌和香蕉炭疽病菌的抑制率分别为88．89％，100％，72．73％，85．00％，80．00％，60．00％，100％，100％，85．71％，66．67％。     

忍冬内生真菌的分离鉴定及其抑菌活性初探

从忍冬(Lonicera japonica)植物中分离得到28株内生真菌,以番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、苹果腐烂及小麦赤霉病菌为指示菌,对其抑菌活性进行了测定。结果表明,忍冬含有丰富的具有抑菌活性的内生真菌,其中有2株(T9、T25)具有广谱的抗菌活性,具有进一步研究的理论和应用价值。     

白骨壤内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

从红树植物白骨壤(Aricennia marina)的根、茎、叶中分离得到32株内生真菌,经初步鉴定,产孢的11株分属于1目3科7属,其余不产孢的20株暂归属于无孢菌群,还有1株属于担子菌纲.采用滤纸片法对内生真菌的发酵上清液进行抑菌试验,结果表明,白骨壤内生真菌中对金黄色葡萄球菌有抑制活性的有6株、占18.75％,对茄科雷尔氏菌有抑制活性的有4株、占12.50％.并首次发现白骨壤内生真菌BZ-21(青霉属)和BG-14(地霉属)发酵液的提取物对茄科雷尔氏菌有抑制活性.     

雷公藤内生真菌的分离鉴定及抗肿瘤活性菌株筛选

目的:从雷公藤根(Tripterygium wilfordii)茎及叶中分离鉴定内生真菌,并对其发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。方法:采用微生物纯化方法分离雷公藤植物的内生真菌,根据菌落形态和显微特征对菌株进行分类鉴定。选用HCT-8(人结肠癌细胞)、Bel-7402(人肝癌细胞)、BGC823(人胃癌细胞)、A549(人肺癌细胞)为指标,采用MTT法对发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果:从雷公藤不同器官中分离得到64株内生真菌,经形态观察鉴定为3目,5科,11属。其中5株内生真菌发酵产物对不同肿瘤细胞具有显著选择性细胞毒作用。结论:雷公藤内生真菌种类多样,具有很好的研究和应用价值。     

大叶黄杨内生真菌的分离及抑菌活性研究

[目的]从大叶黄杨中找到具有抗菌活性的内生真菌。[方法]采用PDA双抗培养基从大叶黄杨茎和叶中分离内生真菌,对其分别进行液体培养,将发酵后所得的发酵液用乙酸乙酯萃取处理,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌为试验菌株,用纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行了抑菌试验。[结果]从大叶黄杨茎和叶中分离得到28株内生真菌,其中有21株内生真菌的发酵液粗提物对指示菌株有一定的抑制作用,占总分离菌株的75%。[结论]大叶黄杨内生真菌的次生代谢产物中存在着丰富的天然活性抑菌物质,可为寻找新型抗菌物质提供资源。     

南蛇藤内生真菌的分离及抑菌活性初探

采用常规方法从南蛇藤的叶与果实中分离得到21株内生真菌,以PDB培养基对其进行液体培养,用高压蒸汽灭菌过的发酵处理液和丙酮粗提物对小麦赤霉菌、棉花枯萎菌、番茄叶霉菌等8种病原菌进行抑菌活性测定.结果表明,抑菌活性成分主要存在于丙酮粗提物中.筛选出1株抗菌谱较广的内生真菌Y9,其对番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、苹果炭疽病菌、西瓜枯萎病菌、苹果褐腐病菌、小麦赤霉病菌 6种病原菌有较好抑菌活性.     

1株亳菊内生菌的分离鉴定及其生物活性分析

【目的】分离筛选具有抑菌、降解纤维素及抗氧化等功能的亳菊内生菌,为其在农业上的开发应用奠定基础。【方法】以株龄9个月的安徽亳菊为材料,分别取根、茎、叶、花4部分,采用平板培养法从中分离内生菌菌株,并在平板上筛选和检测分离菌株对玉米弯孢菌、黄瓜枯萎菌、小麦赤霉菌、串珠镰刀菌、瓜炭疽菌、茶叶轮斑菌等6种植物病原菌的抑菌活性,测定目标菌株BJF10对纤维素的降解活性和DPPH的清除能力,根据菌体形态特征和ITS序列系统发育树对菌株BJF10进行鉴定。【结果】从亳菊的根、茎、叶、花中共获得了56株内生菌菌株,其中菌株BJF10对6种植物供试病原菌均有较强的拮抗作用,抑菌率均在50%以上;菌株BJF10培养第4天的纤维素降解活性达到最强,培养3d时羧甲基纤维素酶(CMCase)和滤纸酶(FPase)的活力达到最高,分别为180.32和81.46U/mL;BJF10的7d培养上清液对DPPH的清除率可达67.7%;根据形态特征及ITS序列的系统发育分析,将菌株BJF10鉴定为柄孢壳菌属(Zopfiellasp.)。【结论】柄孢壳菌属亳菊内生真菌BJF10菌株具有拮抗植物病原菌、降解纤维素、抗氧化等生物活性。     

汉麻内生菌的分离及抑菌活性研究

本研究以汉麻为植物材料,对其内生菌进行较为系统的分离,并进行抑菌活性的筛选,以期得到能够产生较高杀菌活性物质的菌株。为筛选具有生防作用的汉麻内生菌提供理论依据和技术支持。筛选出的汉麻新菌种可以用作生物农药,与多种生物肥料复配,生产出新型复合微生物菌剂。     

盐生海芦笋内生真菌S19的分离鉴定与抗氧化发酵条件优化

以盐生海芦笋中分离的1株内生真菌S19菌株为研究对象,对ITS区域序列进行PCR扩增测序并进行系统发育分析,结合形态学观察,将其鉴定为Gibberella avenacea。采用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应曲面法对S19菌株的发酵条件进行优化,最大限度地提高其抗氧化活性。优化后的最佳培养基配方为:16 g.L-酵母膏,17 g.L-1蛋白胨,300g.L-1土豆,30 g.L-1麦芽糖,30 g.L-1甘露醇,5 g.L-1葡萄糖,10 g.L-1味精,10 g.L-1氯化钠,pH为7。采用此培养基所得发酵产物对2,2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)自由基的最大清除率为78.25%,比优化前(清除率66.55%)有显著提高。     

宁夏干旱荒漠区苦豆子内生放线菌的分离鉴定

采用3种消毒时间对健康苦豆子种子内及植株体内的内生放线菌进行分离.结果表明:消毒3 min来消除非内生菌的影响效果较好;同一植株分离出内生放线菌的数量,种子最多,其次是茎部和根部,叶部较少.合并形态相同的分离物,从苦豆子种子、根、茎和叶分离出的内生放线菌,经初步鉴定分属5个属,86株为链霉菌属,占分离总数的68.8%;19株为诺卡氏菌属,占15.2%;14株为放线菌属,占11.2%,其余分属于小单孢菌属和游动放线菌属.     

一株来自红树内生拮抗真菌的鉴定

红树内生真菌在病害的生物防治方面有重要作用。本研究从秋茄的叶片和茎部共分离获得15株内生真菌,经对峙培养试验,有61.54%的菌株对目标病原菌蓖麻枯萎病菌有拮抗作用,其中从叶片组织中分离的内生真菌菌株MKA-5作用最明显。经形态学研究显示,该菌株菌落浅灰色至深灰黑色。分生孢子暗褐色,倒棒形或椭圆形,多数无喙,有纵横隔膜,分隔处溢缩,壁光滑,大小为7.0-18.5×3.0-8.8 μm,形态特征与链格孢 (Alternaria alternata)一致。进一步对该菌株的分子生物学研究,结果表明该菌株的ITS系列与链格孢模式菌株的同源性为100%。综合分析,拮抗菌株MKA-5鉴定为链格孢(A. alternata)。该菌株的鉴定对蓖麻枯萎病的生物防治有重要作用。     

1株内生真菌的分离鉴定及其对铁皮石斛的促生作用

从不同植物的茎和叶中分离获得204株真菌,通过对白菜的致病性测定筛选获得1株能显著促进白菜生长的内生真菌菌株24L-4。结合形态学特征观察进行ITS-r DNA和18S-r DNA序列分析,对其进行鉴定,确定为Devriesia lagerstroem。该菌株对铁皮石斛组培苗的株高、叶宽、茎径和干质量分别较未接种对照处理增加33.3%、65.7%、27.3%和45.1%,显著高于对照处理。同时,盆栽试验表明:D.lagerstroem铁皮石斛盆栽苗的茎径、鲜质量和干质量分别较无接种对照增加104.0%、83.9%和114.7%,显著高于对照处理。显微镜观察发现:D.lagerstroem可定殖于铁皮石斛根部的外皮层和皮层。研究结果表明,D.lagerstroem对铁皮石斛具有明显的促生作用,可用于铁皮石斛菌肥的开发。     

银杏产黄酮内生真菌的分离与鉴定

为了保护银杏资源,寻找生产黄酮类物质的替代品,采用选择性培养基,从银杏Gingkgo biloba L.的根、茎和叶中分离7株内生真菌,经高效液相色谱分析,证实3株内生真菌可产生槲皮素和山萘素类黄酮物质,其中内生真菌Enf 7的黄酮产量最高,达到70mg·100g-1干菌丝,可作为生产银杏黄酮的候选菌株.根据真菌的孢子结构、菌丝形态、菌落生长速度等形态学特征,结合核糖体RNA基因的居间序列(internal transcribed spacer,ITS)的碱基差异,确定3株产黄酮内生真菌分别属于安培菌属的白粉菌寄生菌Anpelomyces humuli、茎点霉属的头状茎点霉Phoma glomerata和镰孢属的茄镰孢Fusarium solani.     

一株溶藻真菌的初步分离鉴定及其溶藻作用研究

从水体中分离得到一株具有溶藻能力的真菌,命名为Am11.经形态学和18S rRNA序列对比分析,表明该菌株属于赤霉菌属(Gibberella).研究了该菌株对湖泊中优势藻的溶藻效果,初步探讨了其溶藻方式及溶藻物质.结果表明,该菌株对小球藻、惠氏微囊藻、栅藻和蛋白核小球藻具有一定的去除效果,对4种藻叶绿素a的去除率分别为82.5％、64.9％、63.5％和85.4％;该菌株对蛋白核小球藻是间接溶藻,且溶藻因子是菌体胞外分泌的具有热稳定性的非蛋白类物质.