氯霉素化学发光酶联免疫检测方法的建立

在常规酶联免疫法(ELISA)的基础上,用辣根过氧化物酶标记氯霉素与牛血清白蛋白偶联后免疫小鼠制得的单克隆抗体,并优化抗体工作浓度、反应时间等试验参数,建立了一种简便、快速、准确的氯霉素(CAP)残留一步式化学发光酶联免疫检测方法。结果表明:该方法最佳检测范围为20～1620 pg/mL,IC50值达59.911 pg/mL,检测限为9.3 pg/g,可检出国际规定的CAP残留标准限量值以下的残留量。与常规ELISA检测方法相比,不仅提高了检测限和灵敏度,而且反应时间缩短了60 min。采用一步式化学发光酶联免疫检测氯霉素残留,可以大幅度缩减检测时间,更符合快速检测的要求。     

沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

为建立动物源性食品中沙拉沙星（SAR）残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞争化学发光酶联免疫（ic-CLEIA）检测方法,并通过灵敏度、精密度、交叉反应率、添加回收试验对该方法进行评价。紫外扫描结果显示,完全免疫原偶联成功;制备的SAR单克隆抗体效价达1：4×10⁶;包被原浓度为0.25 μg/mL,抗体稀释比为1：750 000,4 ℃包被过夜,5%脱脂乳封闭,竞争孵育1 h,酶标二抗稀释比为1：10 000,孵育1 h为ic-CLEIA最佳反应条件;建立的ic-CLEIA方法标准曲线呈线性,线性范围为0.0625~10 ng/mL,R²=0.995,灵敏度IC₅₀为1.45 ng/mL;其平均批内和批间变异系数均<10%;除与二氟沙星的交叉反应率达到98.08%以外,与其他氟喹诺酮类药物的交叉反应率均<8%,与其他非氟喹诺酮类药物均无交叉反应;SAR标准溶液的最低检测限（LOD）为0.32 ng/mL,SAR在鸡肉样品中的LOD为0.46 μg/kg;添加回收率在88.3%~106.7%范围内,其变异系数≤12.2%。结果表明,本研究建立的ic-CLEIA方法检测速度快、灵敏度高,适用于动物源性食品中SAR残留的大量检测,为SAR残留检测提供了新的方法。     

基于免疫磁珠净化间接竞争酶联免疫吸附试验检测氟喹诺酮类药物

本研究旨在建立一种基于免疫磁珠进行分离、富集和净化前处理,检测鸡肉、鸡肝和鱼肉中氟喹诺酮类药物残留的间接竞争酶免疫吸附试验（indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA）的研究方法。通过对合成免疫磁珠及免疫磁珠净化过程中单克隆抗体添加量、偶联时间、缓冲液pH、抗原添加量、抗原捕获时间、温度及包被条件等进行优化,初步建立了基于免疫磁珠净化的icELISA检测方法。结果显示：1）在1 mg的磁珠中,沙拉沙星（sarafloxacin,SAR）单克隆抗体最佳偶联量为15 μg,偶联时间60 min,pH为4.4;2）最佳抗原添加量为1 ng·mL^-1,捕获时间40 min,缓冲液为0.01 mol·L^-1 PBS,IC₅₀为0.73 ng·mL^-1,线性范围为1.0~3.2 ng·mL^-1;3）氟喹诺酮类药物在鸡肉、鸡肝、鱼肉的检测限均不超过1.33、2.17、2.31 μg·kg^-1,回收率为76.83%~98.70%,批内变异系数批间变异系数均不超过15%,经验证,鸡肉样本检测结果与高效液相色谱法（HPLC）结果一致。结果表明,与传统仪器检测方法相比,该方法提高了检测氟喹诺酮类药物的简便性、选择性以及检测效率,为氟喹诺酮类药物的残留检测提供了新思路。     

呋喃妥因代谢物化学发光酶联免疫检测方法的研究

对呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲(AHD)进行半抗原改造,采用活化酯法将半抗原与卵清蛋白(OVA)偶联为包被原,与标准品竞争AHD单克隆抗体的抗原结合位点,加入辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗,建立了AHD间接竞争化学发光酶联免疫(CLEIA)检测法,并对化学发光液、包被原与抗体最优稀释度、包被条件、封闭液和竞争时间五项参数进行优化。结果表明:该方法具有良好的特异性,IC50为0.753 ng/m L,在鸡肉组织中的检测限为0.028μg/kg,添加回收率在80.54%~102.64%之间,变异系数均小于10%。与国标中液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)和我国出入境行业标准中酶联免疫检测法(ELISA)相比,不仅降低了检测限,而且操作简便,为动物源性食品中呋喃妥因代谢物的残留提供了准确、便捷的分析检测手段。     

进出口植物产品中甲胺磷残留量酶联免疫检测试剂盒的研究

采用直接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)对进出口植物产品中甲胺磷残留量进行快速筛选检测。将O,S-二甲基硫代磷酰氯与牛血清白蛋白偶联作为免疫原,免疫试验兔获得特异性抗体,并成功建立了甲胺磷残留直接竞争ELISA检测方法及检测试剂盒。结果:检测线性范围0.95~500μg/mL,检测低限为1μg/mL;大米、青菜、苹果、西红柿和黄瓜的加标回收率为72.6%~94.3%;重现试验变异系数为5.4%;试剂盒贮藏在4℃5个月和30℃7d质量稳定。表明本试剂盒具有操作简便、准确、快速、灵敏等特点。     

牛奶中氟喹诺酮类药物残留同步快速检测的酶联免疫吸附法研究

建立同时快速检测牛奶中环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星六种氟喹诺酮类药物残留的酶联免疫吸附法。ELISA法的操作在20℃～25℃下进行,以50%抑制浓度、最低检测限反映方法的灵敏度,同时进行加标回收试验。结果表明,本文所建立的ELISA法的最低检测限为1.48μg/L,50%抑制浓度的范围在0.254～0.361μg/L;在环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星药物添加浓度为5、25、50μg/L时的回收率为84.58%～115.92%,批内变异系数均小于15.0%,批间变异系数均小于16.0%。本方法简便快捷,灵敏度、准确度和精密度高,适用于牛奶中FQs残留的同时快速检测。     

食品中呋喃妥因代谢物酶联免疫检测试剂盒的研制

目的：开发研制快速检测呋喃妥因代谢物的酶联免疫检测试剂盒。方法：依据直接竞争ELISA原理,采用棋盘包被法确定最佳抗体包被浓度和酶标抗原工作浓度、包被条件、反应时间、底物显色时间等,并对试剂盒的各项技术指标进行确认。结果：成功的组装了呋喃妥因的酶联免疫检测试剂盒,并建立了肌肉、肝脏、水产、蜂蜜等的前处理方法,检测限均远低于1μg／kg。该试剂盒线性检测范围为0～4．05ng／mL,IC。浮动范围0．30～0．60ng／mL,样品的板内、批内、批间的变异系数均小于15％,平均回收率在65％～90％之间,与其同类药物的交叉反应率均小于O-2％。结论：本研究研制的试刺盒重复性、再现性、特异性、稳定性各项指标均符合技术要求,可用于动物源性食品中呋喃妥因代谢物残留的检测。     

克仑特罗酶联免疫试剂盒的比较评价

考察了市售18个厂家生产的克仑特罗酶联免疫试剂盒,对其用于猪尿中克仑特罗残留检测的可操作性、灵敏度、准确度、精密度等参数进行比较,试验表明目前市售的部分克仑特罗酶联免疫试剂盒可用于猪尿中克仑特罗残留的筛选监测,检测限为1 μg/L.     

酶联免疫检测试剂盒应用于牛奶中四环素残留的测定

为了加强牛奶中四环素残留量的监控，以四环素-卵清白蛋白为包被抗原，四环素-牛血清白蛋白免疫的产生的抗血清为抗体，辣根过氧化物酶-羊抗兔IgG为酶标记物，研制了四环素快速酶联免疫分析试剂盒，在3．9-2000ng/mL四环素标准浓度范围内，呈线性相关，相关系数为0．9882，批内误差小于批间误差，但其变异系数均在10％以下。与土霉素、金霉素的交叉反应分别为24.31％、6．22％。该试剂盒具有快速、灵敏、准确的特点，适用于牛奶中四环素残留量的快速筛选测定。     

14种酶联免疫检测试剂盒通过审查

根据农业部《关于加强兽药残留试剂（盒）管理的通知》农办医[2005]3号）要求，农业部组织残留专家委员会对中国兽医药品监察所等单位申请备案的克伦特罗等14种酶联免疫检测试剂盒进行了审查。经审查该14种酶联免疫检测试剂盒符台有关规定，准予备案，允许生产和用于全国兽药监控计划的检测。     

链霉素酶联免疫检测试剂盒的稳定性研究

通过对自制链霉素酶联免疫检测试剂盒和关键试剂的加速试验以及2～8℃保存6个月试验，考察试剂盒的稳定性。试验表明，加速试验后，试剂盒的标准曲线图形良好，呈双S曲线；2～8℃保存试验后，0浓度点OD值较高，100μg／L添加牛奶样品回收率在60％以上。结果说明，链霉素酶联免疫检测试剂盒可以保存6个月。     

食品中呋哺妥因代谢物酶联免疫检测试剂盒的研制

目的:开发研制快速检测呋喃妥因代谢物的酶联免疫检测试剂盒.方法:依据直接竞争ELISA原理,采用棋盘包被法确定最佳抗体包被浓度和酶标抗原工作浓度、包被条件、反应时间、底物显色时间等,并对试剂盒的各项技术指标进行确认.结果:成功的组装了呋喃妥因的酶联免疫检测试剂盒,并建立了肌肉、肝脏、水产、蜂蜜等的前处理方法,检测限均远低于1μg／kg.该试剂盒线性检测范围为0～4.05ng／mL,IC50浮动范围0.30～0.60ng/mL,样品的板内、批内、批间的变异系数均小于15％,平均回收率在65％～90％之间,与其同类药物的交叉反应率均小于0.2％.结论:本研究研制的试剂盒重复性、再现性、特异性、稳定性各项指标均符合技术要求,可用于动物源性食品中呋喃妥因代谢物残留的检测.     

检测动物组织中金刚烷胺残留的酶联免疫试剂盒的研制

通过对金刚烷胺分子结构进行改造,制备得到了金刚烷胺半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性单克隆抗体。在筛选金刚烷胺单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中金刚烷胺残留的试剂盒。该试剂盒工作范围为0.5~40.5μg/L,线性回归方程为y=-2.069x+0.493,IC_(50)为2.1μg/L,相关系数R2为0.998;试剂盒检测限为0.25μg/kg,金刚烷胺回收率在82.5%~91.0%,批内、批间变异系数均小于10%;与阿莫西林、苯唑西林、头孢噻呋三种类似结构药物均无交叉反应。该试剂盒灵敏度高、检测限低、特异性强、操作简便,可广泛用于动物组织中金刚烷胺残留量的测定。     

酶联免疫试剂盒与胶体金试纸卡评价方法研究

通过对市售酶联免疫检测试剂盒和胶体金试纸卡进行一般性检查、标准曲线、准确度和精确度、检测限和定量限、交叉反应、稳定性、失效率、假阳性率、假阴性率、清晰度、复核试验等指标检测试验,建立简便、快捷、切实可行的酶联免疫试剂盒与胶体金试纸卡评价方法。     

猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒（PRV）gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1：2 048稀释的国家参考品;与猪瘟等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数为1.13%~9.47%,批间变异系数为2.43%~14.07%,重复性和稳定性较好。通过对采集的180份临床血清检测结果进行比较,该方法与中和试验阳性符合率为94.00%,阴性符合率为96.92%,总符合率为96.11%,明显优于商品化ELISA试剂盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA检测方法可以用于PRV gB抗体的快速定量检测。     

用新城疫单抗酶联试剂盒诊断鹅副粘病毒病

近两年来,在江苏淮安楚州地区该病的发生较为严重。鹅副粘病毒病占鹅发病总数的35%,此病多发于鹅4～360日龄,常集中于30～50日龄。发病率一般为3%～75%,最高可达80%,死亡率一般为5%～65%,最高可达67%。养殖户采用多种抗菌素、磺胺类药物以及小鹅瘟血清来治疗和预防该病均未见效     

氟喹诺酮类药物的研究近况

氟喹诺酮抗菌药是喹诺酮类药物的第三代产品。第一代于1962年研制成功,以萘啶酸为代表,1964年应用于临床泌尿系统感染,但因抗菌谱窄易产生耐药性已被淘汰。第二代于1973年合成以吡哌酸、奥索利酸为代表,1979年应用临床,虽然比第一代抗菌活性有所提高,但血药浓度低,神经精神症状     

动物尿液中β-受体激动剂酶联免疫检测试剂盒使用通则的建立

酶联免疫检测法具有操作简便、灵敏度高、设备成本低、可实现批量样品的快速检测等突出特点,现已成为国内外广泛采用的检测农产品中违禁物质的手段。目前国内市场上针对动物尿液中β-受体激动剂的酶联免疫检测试剂盒种类繁多,但产品质量参差不齐。操作人员由于对产品性质、使用方法、注意事项等关键环节理解的偏差,往往造成检测结果不准确,导致阳性样品流入市场。本文建立了酶联免疫检测试剂盒的使用通则,旨在为检验检测人员采购、验收、使用该类产品提供技术参考。     

新城疫单抗酶联免疫试剂盒的完善及其应用

对初步研制的新城疫 (ND)单抗酶联免疫 (EL ISA)试剂盒进行了完善。以 2 .5 m g/ L 的抗 NDV腹水单抗 M2 2 包被酶标板 ,4 % FCS- PBS溶液为阴性对照 ,聚乙二醇 (PEG 10 0 0 0 )浓缩 L a Sota病毒液为阳性对照 ,P/ N≥ 2 .5为临诊样品阳性判定标准 ,对纯化的新城疫病毒 (NDV)蛋白的检出限为 2 μg/ L。用该试剂盒跟踪监测免疫鸡群中个体感染ND强毒后排毒动态 ,并平行测定血凝抑制 (HI)抗体。跟踪采集 2免疫鸡群泄殖腔棉拭和血液一一对应样品 2 317份 ,2实验鸡群棉拭样品 36 30份 ,血液样品 14 4 0份。结果表明 ,HI效价在 2～ 14之间的个体均可检出强毒 ,但 HI在 6以下的个体检出率最高 ,而排毒个体的高水平抗体是强毒感染刺激所致。个体感染强毒后一般排毒 1～ 3周 ,其中 HI抗体水平低者排毒时间相对较长 ;个体在感染后 3～ 6 d和 11～ 14 d出现 2个排毒高峰。强毒一旦侵入鸡群便可在群内巡回传播 ,长期维持下来。 HI抗体在感染初期先下降 ,然后迅速上升 ,且感染前低者上升速度较快 ,幅度亦较大     

氟喹诺酮类药物残留限量及检测技术研究进展

氟喹诺酮类药物(FQS)是第3代喹诺酮类抗生素,具有良好的生物利用度和耐受性,不仅对革兰氏阳性菌和阴性菌有杀菌作用,还具有抗真菌和抗病毒活性,因此被广泛应用于治疗畜牧动物养殖过程中的细菌性感染.但当人类过多食用含有FQS残留的食品后,将会损害身体多个系统并引起细菌耐药性,因此建立灵敏度高、简便的检测方法十分必要.本文综...