警惕西尼罗病毒

西尼罗病毒 (West Nile virus,WNV)是一种主要由蚊子传播的黄病毒科中的病毒 ,感染人、马、禽等动物后 ,侵害宿主的中枢神经 ,导致部分病例发生脑膜脑炎或脑炎。该病毒自1937年被发现以来 ,曾在非洲、亚洲、中东、欧洲的 2 0多个国家或地区流行 ,最近几年还在罗马尼亚、俄罗斯和以色列引起了较大的暴发 ,但是 1999年以前从未在西半球出现过。美国纽约市于 1999年 8月首次检测到该病毒 ,标志着 WNV在西半球的登陆 ,随后迅速传播 ,2 0 0 1年即进入加拿大中南部 ,表现出流行地域上迅速扩展、感染宿主范围进一步扩大、对宿主(人、马、鸟等 )…     

新疆地区蚊类携带西尼罗病毒情况调查研究

为查明新疆地区蚊体内携带西尼罗病毒的情况,从2005年-2007年每年的7月~10月采集新疆不同地区的蚊子共计16000余只,并提取总RNA,通过RT-nest PCR的方法检测样品中西尼罗病毒。结果表明,调查样品中没有检测到西尼罗病毒,但不能就此推测新疆是否存在西尼罗病毒,至少对新疆地区和全国制定针对不同动物和人的积极防御政策有重要的公共卫生学意义。     

西尼罗病毒的基因进化分析

为更好的了解西尼罗病毒在世界各地的流行特征,从GenBank中随机选取45株西尼罗病毒的全基因或部分基因序列,进行同源性分析构建了基因进化树.发现西尼罗病毒可以分为两个谱系,1系病毒广泛分布在非洲西部、中东、东欧、印度、美国和澳大利亚等地,2系病毒分布在非洲亚撒哈拉、马达加斯加等地.1系的西尼罗病毒可进一步分为3个分支.对其中的22株西尼罗病毒部分基因序列进行同源性比较,发现1系病毒之间核苷酸同源在76.8%以上,氨基酸同源性在78.3%以上,而2系病毒与1系病毒核苷酸同源性约为64.7%～76.2%,氨基酸同源性约为64.7%～93.0%.     

西尼罗病毒套式RT-PCR检测方法的建立

从GenBank上调取西尼罗病毒的基因序列,经过分析,设计并合成2套套式RT-PCR引物,分别对西尼罗病毒灭活苗进行扩增,结果扩增出与目的片段大小一致的条带,将其克隆入pMD18-T-Vector中,进行序列测定,证实为WNV的基因。建立了套式RT-PCR检测方法,经各反应条件的优化后,发现2套nest-PCR引物能分别扩增出85个拷贝和62个拷贝的双链DNA,对乙型脑炎病毒、黄热病毒等11种病毒核酸进行扩增,发现具有良好的特异性,显示建立套式RT-PCR具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于口岸WNV的检测和监测。     

西尼罗病毒的流行特点和预防

1病原学西尼罗病毒是虫媒病毒之一,为RNA病毒,属于黄病毒科黄病毒属。它不仅与日本乙型脑炎病毒和近年来流行的登革热属同一科,而且与日本乙型脑炎病毒、圣·路易斯脑炎病毒相似,并和这两种病毒抗原关系密切。西尼罗病毒在电镜下呈球形,大小为40～60nm,有囊膜,约有10000～11000对碱基,核酸为正股不分节段RNA,病毒依赖的RNA聚合酶是复制本病毒必须的酶。2流行病学及特点2.1传染源病鸟是主要的传染源和重要的宿主。亲鸟类蚊子(包括库蚊、伊蚊和曼蚊)是自然条件下传播病毒的载体。鸟感染后通常不出现临床症状,但有一个持续时间比较长的、高…     

表达西尼罗病毒E蛋白重组腺病毒的构建及鉴定

为构建表达西尼罗病毒(WNV)E蛋白的重组腺病毒,本实验将WNV的E基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,经Pme Ⅰ酶切线性化后电转化于含有人5型缺陷腺病毒的骨架的BJ5183感受态大肠杆菌中进行同源重组,构建重组质粒pAd-WNV-E;将其经Pac Ⅰ酶切线性化后通过脂质体介导转染于人胚肾细胞Ad-293细胞,制备重组腺病毒rAd-WNV-E;经western blot以及间接免疫荧光鉴定表明WNVE蛋白在Ad-293细胞中获得有效表达.病毒滴度测定试验结果显示,该重组腺病毒与野毒型腺病毒复制能力相近.该重组腺病毒的构建为进一步研制表达WNVE蛋白的重组腺病毒的疫苗奠定了基础.     

西尼罗病毒NS1基因的原核表达与抗原性鉴定

为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP).NS1融合蛋白(MBP-NS1),其分子质量约为90 ku,约占可溶性菌体蛋白质量的50%.利用直链淀粉树脂柱对MBP-NS1纯化后的重组蛋白的纯度达到60%,westem blot和间接ELISA检测证明纯化的MBP-NS1具有良好的抗原性和特异性,为进一步开展关于WNV NS1蛋白的研究奠定了基础.     

美境内陆续发现西尼罗病毒——防疫机制提早启动

据美联社消息,去年夏天造成美国264人死亡病例的西尼罗病毒,4月24日在洛杉矶再现踪迹。洛杉矶疾病控制中心的专家凯莉·米德顿呼吁民众注意预防,远离病毒寄生的蚊虫。凯莉表示,洛杉矶地区过去1周陆续从10余只被蚊虫叮咬致死的乌鸦身上检测出带有西尼罗病毒,显示去年夏季威胁美国44个州、经由蚊虫作为媒介的传染病,今年已经提前来到。而在美国加利福尼亚州,本月初出现今年第一例西尼罗病毒案例,专家指出,因去年感染该病毒死亡的乌鸦数量较多,恐造成人类感染机率增加,因此防疫单位将提早启动防疫工作。为避免灾情惨重,加州各控制局采取比以往…     

西尼罗病毒糖蛋白第三结构域的原核表达及鉴定

根据西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)序列设计1对特异性引物,用PCR反应扩增糖蛋白第三结构域(WNVEDⅢ)基因,将PCR产物克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,获得重组表达质粒,将该质粒转化入E.coli DH5α,命名为pG-EDⅢ,鉴定正确后转入transetta表达菌中,经IPTG诱导后纯化重组蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot方法证实WNV-EDⅢ基因可在大肠杆菌中高效表达,小鼠免疫试验证明该原核表达蛋白有良好的免疫原性。     

西尼罗病毒E蛋白结构域Ⅲ在昆虫S2细胞中的表达与鉴定

根据GenBank中发表的西尼罗病毒(WNV)E domainⅢ基因序列设计1对引物,用PCR方法扩增domainⅢ基因片段,回收目的基因片段定向克隆入果蝇表达载体pMT/B/V5,构建重组表达载体pMT-DⅢ。测序验证正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,通过Blasticidin进行加压筛选,获得了抗性细胞S2-DⅢ。提取S2-DⅢ细胞的基因组DNA,用PCR方法检测目的基因在果蝇S2细胞中的整合与表达。用硫酸铜溶液诱导表达,收集无血清的细胞表达上清,样品浓缩后进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,研究成功构建了重组表达载体pMT-DⅢ,转染细胞经12mg/L的Blasticidin筛选及鉴定后获得了稳定表达WNV E do-mainⅢ蛋白的果蝇S2细胞株。