应用PCR技术检测伪狂犬病病毒

根据伪狂犬病病毒(PRV)的gE基因序列,设计并合成了一对引物,以闽A株DNA为模板,建立了检测PRV的PCR方法。该方法能从猪细小病毒闽A株和FB株中扩增出一条长度为1 808 bp的片段,对Bartha株、gE-株检测为阴性;而以猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒和正常细胞的核酸为模板的均为阴性;敏感性试验表明,该体系可检测到10pg的猪细小病毒基因组DNA。表明该方法适用于检测猪伪狂犬病病毒野毒株或非gE基因缺失弱毒株。     

伪狂犬病病毒及其免疫研究进展（下）

（接上期）3 伪狂犬病的免疫与防治 目前在对待预防和控制伪狂犬病病毒的措施上，有很大一部分求助于疫苗免疫接种，关于疫苗研制的报道极多，目前主要分为以下几类：3．1 灭活疫苗 在人类进行疫苗研制和开发的过程中，灭活苗首先被人类应用于生产，在欧洲有两种受到重视的灭活疫苗。一种是罗马尼亚疫苗，它是用名叫“B．C”的强毒毒株经猪肾细胞培养，用皂素灭活，加氢氧化铝佐剂制成，另一种也是用强毒株经IBRS－2细胞系培养的氢氧化铝疫苗，主要用于耕牛。灭活疫苗安全性好，免疫猪后不存在排毒，但免疫效果不及弱毒疫苗，而且由于佐…     

伪狂犬病病毒分子生物学研究新进展

近年来，随着分子生物学研究的深入，对伪狂犬病病毒的研究取得很显著的进展。本文对伪狂犬病病毒的特性，基因结构特点，病毒糖蛋白种类和作用以及伪狂犬病病的毒力因子，基因工程疫苗研究现状进行了较详细综述，对同道者研究伪狂犬病病毒有重要的指导作用。     

伪狂犬病病毒的分子生物学研究进展

伪狂犬病病毒的分子生物学研究进展黄银君，周育彪（中国农业科学院兰州兽医研究所，兰州７３００４６）伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）是伪狂犬病（又叫Ａｕ－ｊｅｓｚｋｙ′ｓ病）的病原，为ａ疱疹病毒，分类名叫猪疱疹病毒—１型。伪狂犬病最早是在牛上发现的，现在则成为猪的...     

伪狂犬病病毒研究概况

伪狂犬病病毒(PRV)在猪群中具有传播快、流行范围广、传播途径多等特点,给世界养猪业造成了巨大损失。目前,PRV的基因组测序工作已基本完成,但对其各基因功能的研究还不全面。间质蛋白和囊膜蛋白是病毒的重要组成部分,一旦缺失会严重影响病毒的生理机能,这为基因工程疫苗的制备提供了基础。随着对PRV研究的不断深入,PRV载体也成为了病毒载体研究领域的一大热点。论文对PRV的基因组结构、蛋白及其功能、复制方式等方面进行了综述,旨在为该病的诊断、免疫机理研究与疫病防控提供借鉴。     

一例猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织等病料中,经PCR扩增出大小为217 bp的伪狂犬病病毒gp50的基因片段,结果证实为猪伪狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus,PRV)感染。随后采用BHK-21细胞进行猪伪狂犬病病毒的分离培养,该分离株经细胞传代培养5代后,能够产生典型的细胞病变,经PCR鉴定为伪狂犬病病毒,其病毒感染力达10^8.68 TCID₅₀/0.1mL。最后用10^7.0 TCID₅₀/mL病毒培养物接种家兔,48 h后注射部位出现典型瘙痒、皮肤破损等症状,于72 h后全部死亡。结果表明,该伪狂犬病病毒分离株对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫及诊断研究奠定了基础。     

伪狂犬病病毒实时荧光PCR的建立和应用

伪狂犬病是世界范围内严重影响养猪业发展的重要动物疫病,快速检测是有效防控该病的重要措施之一。为了建立该病的快速分子生物学检测方法,根据GenBank中登录的伪狂犬病病毒gD基因序列,选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针,通过对实时荧光PCR反应条件进行优化,建立了用于检测伪狂犬病病毒的实时荧光PCR方法。特异性试验结果表明,该检测方法只能检测到目的病毒,表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现,其最低检测限可达1.42pg/μL的总DNA,与PCR方法的灵敏度对比试验表明,其敏感度比PCR至少高10倍。对同一样品进行重复性检测,在组内及组间检测的荧光扩增曲线基本重叠,证实其重复性好。对180份临床样品进行伪狂犬病病毒核酸检测,结果发现有52份阳性样品。结果表明,所建立的实时荧光PCR方法可对伪狂犬病病毒进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高、重复性好的优点,是开展伪狂犬病的临床检测和疫情监测工作的有力工具。     

两种消毒剂对伪狂犬病病毒的杀灭效果的实验观察

PRV是疱疹病毒中抵抗力较强的病毒,在不同的液体中和物体表面至少能存活7d,对热和干燥的抵抗力较强。该病毒在pH4～9之间保持稳定,因而一些酸性消毒剂难以将其杀灭。“卫康”消毒剂为固体粉末剂型,水解常数高,干粉贮存稳定。本试验对韶山大北农生物药业有限公司生产的“卫康”消毒剂进行杀灭伪狂犬病病毒有效浓度的试验,并将“卫康”消毒剂的杀毒效果与国外同类产品作一比较,报告如下。     

伪狂犬病病毒糖蛋白研究进展

本文综述了伪狂犬病病毒糖蛋白的生物学特性与功能、免疫学作用及其毒力作用等方面的研究进展。     

伪狂犬病病毒潜伏感染的研究

论述了近折来在伪犬病病毒潜伏感染方面研究的主要进展，其中包括三个部分，即伪狂犬病病毒感染的分子机理，伪狂犬病病毒潜优感染的诊及伪狂犬病病毒基因工程缺失疫苗的潜伏感染。     

多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒

根据猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)3种病原体的基因保守序列，分别设计了与CSFV的E2基因、PPV的VP2基因和PRV的gⅡ基因序列互补的3对引物。用这3对引物对人为混合的样品中的PPV和PRV的DNA模板及CSFV反转录后的cDNA模板进行多重PCR扩增和多重PCR反应奈件的优化，结果同时得到3务与试验设计相符的288bp(CSFV)、575bp(PPV)700bp(PRV)特异性条带；敏感性检测结果表明，该多重PCR可以检测到14．5ng／L的CSFV、27．1pg／L的PPV、31．4ng／L的PRV的核酸模板。     

伪狂犬病

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的家畜和野生动物的一种急性传染病。成年猪呈隐性感染或有上呼吸道卡他性症状，妊娠母猪发生流产、死胎，哺乳仔猪出现发热、脑脊髓炎和败血症症状，最后死亡。近几年来，疫情在不断扩大，对我国养猪业构成严重威胁。     

伪狂犬病病毒gE／gB PCR鉴别方法的建立及其应用

为了检测伪狂犬病病毒(PRV)潜伏感染及确定病毒潜伏的主要部位，建立了能鉴别PRV野毒株和gE基因缺失疫苗株gE／gB的PCR诊断方法。结果表明，所建立的PCR特异性强、敏感性高、稳定性好，能用于病毒潜伏感染的检测；同时还确定PRV潜伏感染的主要部位是三叉神经节、扁桃体、嗅球、脑干、脑桥和咽黏膜。     

伪狂犬病病毒通用转移载体的构建及应用

将来自质粒pFSV40的300bpBamHI/PstI片段[其中含有SV40poly(A)和部分多克隆位点]插入到质粒pUSK相应的酶切位点中，获得重组质粒USKSV40。该重组质粒中gG基因5’端编码区缺失了428bp。将来自质粒pcDNA3.1( )的946bpBglⅡEcoRI片段（其中含CMV启动子及部分多克隆位点）插入到质粒pUSKSV40的BamHIEcoRI位点，构建了通用载体pPRVCMV-uni，其中含有CMV启动子，SV40poly(A)以及NheI,Pme1,BamHI,BstXI,EcoRI,StuI,XbaI等7个单一克隆位点，将eGFP基因插入到该通用载体的BamHI和EcoRI之间，用所获得的转移载体与TK/gG-/LacZ^ PRV基因组共转染PK-15细胞，经检测eGFP基因在重组伪狂犬病病毒中获得表达，从而证实该通用载体的构建是可行的。本研究研制以伪狂犬病病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础。     

三种兽用消毒剂对伪狂犬病病毒的灭活效果研究

为了解兽用消毒剂对DNA病毒的灭活效果,本研究选择了猪伪狂犬病病毒为模式病毒开展消毒效果评估,指导消毒灭源工作。经对三种兽用消毒剂在不同浓度、不同作用时间和不同温度下对伪狂犬病病毒的杀灭效果进行实验室评价,结果显示,在20℃和37℃条件下,0.2%戊二醛癸甲溴铵溶液作用5 min, 0.05%的碘酸混合溶液作用10 min和有效氯为300 mg/L的二氯异氰尿酸钠溶液作用20 min,均可完全灭活伪狂犬病病毒;在4℃条件下,0.2%戊二醛癸甲溴铵溶液作用30 min,有效氯为300 mg/L的二氯异氰尿酸钠溶液作用40 min仍不能完全灭活伪狂犬病病毒。表明按生产厂家说明书推荐的病毒类和疫源地消毒浓度,在常温下和高温环境下,碘酸混合液、戊二醛癸甲溴铵溶液和二氯异氰尿酸钠均可有效地灭活伪狂犬病病毒,灭活率均在99.99%以上;而低温状态下,戊二醛癸甲溴铵溶液和二氯异氰尿酸钠溶液的灭活效果有所下降,应予以重视,必要时需提高作用浓度。