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小麦原生质体的电激介导基因转移 总被引:7,自引:0,他引:7
从小麦品种“Bodalin”胚性悬浮细胞分离出原生质体,通过电激将质粒PBC1DNA(携带β-葡萄糖苷酸酶(GUS)标记基因和潮霉素抗性基因hph)导入原生质体。采用BTX电激系统和ASP电激缓冲液,最佳电激条件为300V(750V/cm)和50ms(约1000μF),转化的原生质体内GUS的活性最高;质粒DNA的有效使用浓度为25μg/ml。电激处理后,原生质体培养2~3天,GUS基因表达最强,宜于检测其瞬时表达;牛胸腺DNA可协助提高GUS基因的导入效果。质粒PBC1DNA处理的原生质体培养于添加潮霉素的KMP培养基。经4个月抗性筛选,选择获得15个潮霉素抗性克隆 相似文献
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为了完善细胞融合技术,提高融合细胞的分化再生能力,对原生质体的游离、融合、培养条件进行了系统研究,筛选出了既简单又高效率的细胞融合方法多聚鸟氨酸法(poly –L-ornithine, PLO)以及初始、继代、分化培养基,获得了马铃薯花培后代Удача×Жуковский ранний细胞融合再生植株。 相似文献
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原生质体分离及再生体系现已被广泛用于生理、生化、遗传、分子生物学、基因组学、蛋白质组学、代谢组学的研究中,并能够为植物遗传转化提供良好的受体系统,从而达到优化遗传性状,丰富种质资源的目的等。园艺植物由于其观赏性强、倍性高的特点,具有很高的研究价值,但目前具有稳定的原生质体分离体系的园艺植物数量很少。本研究总结了园艺植物原生质体分离及培养时的各种影响因素:原生质体分离的植物材料;原生质体的酶解条件和纯化;原生质体的培养方法;原生质体的培养基成分,以及原生质体在各领域的应用,为建立更多植物原生质体分离及再生体系提供参考,为将原生质体系统更广泛的应用于多种植物中提供帮助。 相似文献
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《分子植物育种》2021,19(16):5475-5481
获得甜瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. melonis)具有再生功能的原生质体,是构建其高效遗传转化体系的重要途径之一。本研究采用单因素分析法分析了甜瓜枯萎病菌菌丝摇培时间、裂解酶浓度、酶解时间和温度、渗透压稳定剂的种类和浓度及p H对原生质体释放的影响,并对再生培养基种类和培养基琼脂浓度等再生条件进行优化,建立了高效制备甜瓜枯萎病菌原生质体的稳定体系。结果表明,将分生孢子培养18 h后收集菌丝体,以1.2 mol/L的KCl作为稳定剂,在pH 6.0的条件下,加入10 mg/m L的裂解酶,32℃酶解4 h,获得的原生质体产量最高,在琼脂浓度为0.5%(W/V)的SR固体培养基中进行原生质体再生,再生率最高,可达26.32%。本研究结果为甜瓜枯萎病菌的分子生物学研究和抗病育种提供技术支持。 相似文献
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光敏核不育水稻(31301s)原生质体培养再生成株 总被引:1,自引:0,他引:1
从光敏核不育水稻31301s胚性细胞悬浮系分离培养原生质体,成功地实现了植株再生,原生质体在KPR培养基中植板率达2.4%,在SKPR(除去KPR中复杂的有机成分,以及葡萄糖以外的糖类)中获得了较高的植板率(1.8%),在高压灭菌取代过滤除菌的SKPR中也能培养成功。31301s原生质体再生细胞团直接分化的分化率达10%,再生细胞团在含3%蔗糖和500mg/L脯氨酸的N6培养基上增殖后再分化,可明 相似文献
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小麦胚性细胞系的建立及原生质体的培养 总被引:10,自引:0,他引:10
近年来利用胚性细胞无性系游离原生质体,在禾谷类原生质体培养中已取得了重大进展。但从报道看,较多地注意原生质体游离前细胞状态的选择和对游离培养条件的优化,很少把组织培养和细胞状态的调控,与原生质体培养结合起来,而这正是解决那些原生质体难以培养的植物类型或基因型再生 相似文献
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甘薯(Ipomoea batatas(L.)Lam.)及其近缘野生种原生质体的… 总被引:5,自引:0,他引:5
对甘薯品种高系14号及其近缘野生种I.trilobaL.和I.lacunosaL.进行原生质体植株再生研究。从离体培养植株的叶柄分离出原生质体,将其培养在含有0.005mg/L2,4-D和0.5mg/L激动素(KT)的MS培养基中,从原生质体获得了高频率的愈伤组织。培养8-12周后,将直径达2-3mm的小愈伤组织转移到添加0.05mg/L2,4-D的MS培养基上,转移3-6周后,将愈伤组织进一步转 相似文献
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PEG介导的棉花枯萎病菌原生质体转化体系的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
通过酶解尖孢镰刀菌萎蔫专化型(Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum)FOV1和FOV4菌株幼嫩菌丝的细胞壁产生原生质体,PEG8000介导外源DNA随机插入的方法,分别获得具有抗潮霉素及荧光信号的转化子27个和39个,转化效率(以单位质量的DNA的转化子数计)分别为1350 mg-1和1950 mg-1。选取FOV1和FOV4菌株的代表性转化子各3株,经过5代继代培养后,其产孢量、荧光稳定性和致病性均无明显变化。因此,可以认为棉花枯萎菌原生质体的这种转化方法是一种比较稳定高效的遗传转化体系。 相似文献
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甘薯(Ipomoea batatas (L.) Lam.)及其近缘野生种原生质体的植株再生 总被引:5,自引:0,他引:5
对甘薯品种高系14号及其近缘野生种I.triloba L、和I.lacunosa L,进行原生质体植株再生研究。从离体培养植株的叶柄分离出原生质体,将其培养在含有0.05mg/L 2,4-D和0.5mg/L激动素(KT)的MS培养基中,从原生质体获得了高频率的愈伤组织。培养8-12周后,将直径达2—3mm的小愈伤组织转移到添加0.05mg/L 2,4-D的MS培养基上。转移3-6周后,将愈伤组织进一步转移到添加吲哚乙酸(IAA)和6-苄基嘌呤(BAP)的MS培养基上,一些愈伤组织再生出植株。未再生植株的愈伤组织进一步在MS基本培养基上培养,它们也再生出植株。本研究从I.triloba原生质体获得高频率的植株再生;首次从I.lacunosa原生质体再生出植株;从高系14号原生质体也再生出完整植株。 相似文献
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原生质体融合技术在枣育种中的应用展望 总被引:2,自引:0,他引:2
在枣树育种中,由于枣树自身的遗传特性,决定了枣树不能广泛运用常规杂交育种技术。针对这一困难,本文提出了应用枣树原生质体融合技术来实现枣树优良基因的重新组合,达到创造新种质,获得新品种的目的。通过对有关文献的分析,本文主要对原生质体及原生质体融合技术的研究进展和这一育种技术在枣育种中应用的先进性、实际应用中的可行性及应用过程中的关键步骤进行了综述。并对这一技术在枣树育种中的研究进展情况及应用中的问题和困难进行了探讨。 相似文献
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提高马铃薯原生质体细胞分裂频率的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
为了提高马铃薯原生质体培养时的细胞分裂频率, 对原生质体游离、 纯化, 培养过程中 的几个重要环节进行了研究。 结果表明: 以蔗糖作为渗透压调节剂游离原生质体时, 原 生质体的损伤小、 活力好、 分裂频率高、 原生质体自发融合频率低; 采用看护培养时, 在同一属内, 马铃薯物种的异同, 饲养层愈伤组织与培养细胞的 相似文献