成年小鼠雄性生殖细胞的冷冻保存

在含10％小牛血清（NBS）的DMEM培养基中，分别各添加5％，10％，15％，20％和25％的二甲基亚砜（DMSO）,丙二醇（PG），乙二醇（EG）和甘油（G），对成年小鼠睾丸生殖细胞冷冻保存；复苏后台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果显示，5％－25％DMSO冻存液组的细胞复苏率分别为88.5%,88.0%,65.6%及51.3%;5%-25%PG冻存液组的细胞复苏率分别为87.2%,86.4%,79.0%,73.4%及40.1%.;5%-25%EG冻存液组的细胞复苏率分别为6.6%,80.9%,60.8%,51.3%及30.0%;5%-25%G冻存液组的细胞复苏率分别为86．5％，86．3％，65．3％，36．0％及31．4％。其中各抗冻剂5％和10％组的细胞复苏率最高，与15％组相比均存在显著或极显著差异。4种抗冻剂的最高细胞复苏率之间无显著差异。DMSO，PG，EG和G分别冷冻保存成年小鼠睾丸生殖细胞对的最小损失率分别为4．8％，6．1％，6．7％，6．8％。结果表明，采用慢速冷冻时，DMSO，PG，EG及G均适宜用作成年小鼠睾丸生殖细胞的抗冷冻剂，最佳使用含量均为5％－10％。成年小鼠睾丸生殖细胞分别在含5％－10％的DMSO，PG，EG和G的DMEM（含10％NBS）冻存液中，2步慢速降温，液氮储存，37℃水浴复苏，是一种具有较高复苏率的冷冻保存方法。     

昆明白小鼠胚胎生殖细胞的分离与培养

以昆明白品系小鼠胎儿生殖嵴为材料，以不同的培养液分离培养胚胎生殖细胞（EG cells），发现小鼠胎儿肝细胞条件培养液的效果好于未添加白血病抑制因子（LIF）的基础培养液，而差于添加了1000IU／mL LIF的基础培养液。同时，试验对比了从不同胎龄胎儿分离培养原始生殖细胞（PGCs）的情况，鉴定了EG细胞的生物学特性；EG细胞经体外培养，可以分化为神经样细胞、上皮样细胞和简单类胚体。     

阿维菌素对小鼠雌性生殖细胞的致突变性研究

阿维菌素是我国生产的一种高效广谱抗寄生虫抗生素，对动物的消化道线虫和外寄生虫有很强的驱杀作用。本文选择了第二次减数分裂中期相（ＭＩＩ）卵母细胞和第一次分裂中期相合子染色体畸变分析方法，研究其对哺乳动物雌性生殖细胞的遗传毒性。１．ＭＩＩ卵母细胞染色体畸变分析：根据阿维菌素的小鼠急性毒性试验结果（小鼠经口ＬＤ５０＝１９．１９ｍｇ／ｋｇ），设以下剂量组：１．９２、３．８４和９．６０ｍｇ／ｋｇ（约相当于１     

山楂提取物对雄性小鼠生殖细胞突变抑制作用的研究

本实验研究山楂提取物对小鼠生殖细胞突变作用的影响,结果表明山楂提取物对雄性小鼠生殖细胞不具有致突变作用,并且对小鼠生殖细胞有一定保护作用。     

小鼠原始生殖细胞在生殖嵴的定位

试验以昆明小鼠胚胎为材料,采用普通石蜡切片和冰冻切片技术,对不同胚龄小鼠生殖嵴进行形态学比较研究。通过对原始生殖细胞(PGCs)在生殖嵴中的碱性磷酸酶(AP)染色定位观察,比较其数量的增殖规律。结果表明,11.5~12.5 dpc(配后天数)阶段为采集PGCs的最佳时间。     

实验性乳腺炎小鼠乳腺肥大细胞的变化

应用改良甲苯胺蓝染色法和苏木精-伊红染色法对金黄色葡萄球菌诱发实验性乳腺炎小鼠乳腺肥大细胞的数量、分布、活性进行了研究。正常对照组小鼠乳腺组织中肥大细胞主要分布于乳腺小叶之间的结缔组织中,有些围绕血管或乳腺导管分布,腺上皮之间没有肥大细胞分布;阳性试验组小鼠乳腺肥大细胞主要分布在相邻腺泡周围或腺导管上皮周围,胞质内充满异染颗粒,脱颗粒状态显著,甚至表现有颗粒耗竭现象,腺泡中有一定程度的肥大细胞浸润。肥大细胞计数结果显示,阳性试验组母鼠乳腺内的肥大细胞数急剧增多,显著高于正常对照组(P<0.05),而脱颗粒肥大细胞数阳性试验组与正常对照组相比极显著增多(P<0.01)。结论:肥大细胞在小鼠乳腺炎的致病机制中发挥重要作用,参与了乳腺炎的发病过程。     

实验性小鼠蓖麻毒素中毒的血液学试验

为研究蓖麻毒素中毒对小鼠的血液生化指标影响,选择体重15 g左右小鼠36只,随机分成3组,肌肉注射蓖麻毒素0.1 mL/kg体重.攻毒前及攻毒后2h、4h、6h后采血,制备血涂片观察红细胞形态学变化,同时以血常规学方法检查血液生化指标.结果表现为攻毒4h后,红细胞出现变形和融合现象;血小板在攻毒2h后变化差异显著;白细胞在4h后变化差异显著;红细胞比积变化差异显著;血糖显著降低;ALT、AST、ALP显著增加.     

体外培养小鼠生殖细胞的碱性磷酸酶活性研究

研究小鼠生殖细胞体外培养时碱性磷酸酶 (AP)活性表达 ,为鉴别精原细胞提供依据。分别培养 2日龄 ,6日龄 ,12日龄仔鼠及成年鼠生精上皮细胞 2 4～ 4 8h,进行 Gomori- Takamat-su组化染色 ,观察各类细胞形态及染色特性。结果表明 ,体外培养 2 4～ 4 8h,管周细胞为铺展面积较大的不规则形状 ,细胞表达 AP活性。支持细胞 (Sertoli cell)为不规则形状 ,不表达 AP活性。生殖细胞均为圆球形。性原细胞和精原细胞均表达 AP活性 ,部分精母细胞也表达 AP活性。 AP活性表达可作为检测培养体系中小鼠精原细胞的一个辅助指标     

猫隐睾手术及并发症的探讨

隐睾是猫不育症的重要原因之一,不仅可导致猫生育能力低下甚至不育,而且可以导致睾丸癌变等严重后果。当猫表现出隐睾不良症状时需要进行手术治疗。介绍了1例猫隐睾手术经过及术后护理,并对常见的并发症进行了探讨。     

禽类原始生殖细胞与转基因研究进展

综述了鸟类原始生殖细胞的特性、起源、迁移等以及对 PGCs进行操作和培养 ,转基因鸡的研究现状和进展     

哺乳动物PGCs用于胚胎干细胞培养的研究

本文综述了哺乳动物原始生殖细胞（PGCs）的研究进展；归纳了影响用PGCs分离胚胎干培养的因素。阐述了在PGCs用于胚胎干细胞培养研究中存在的问题及应用前景。     

性成熟前小鼠生精细胞的发育过程

用光镜、电镜观察了生后 1～ 1 8d昆明白小鼠的生精上皮。结果显示 ,生后 1～ 3 d,曲细精管内只有生殖母细胞和支持细胞 2类形态结构截然不同的细胞 ,前者位于管中部 ;生后 4～ 5d,少数生殖母细胞已附着在基膜上 ;生后 6～ 7d,原始 A型精原细胞大量出现并附着在基膜上 ;生后 8d,A型精原干细胞大量出现 ,B型精原细胞开始出现 ;生后 1 0 d,B型精原细胞大量出现 ;生后 1 2～ 1 3 d,前初级精母细胞出现 ,少数曲细精管的管腔开始出现 ;生后 1 4～ 1 5d,多数曲细精管管腔基本形成 ,前初级精母细胞大量出现。本试验的结果表明 ,7～ 8d小鼠的睾丸最适于分离精原干细胞     

由体外受精囊胚获得ICR小鼠ES细胞

收集鼠卵母细胞和精子，采用体外受精技术，获得早期胚胎。体外培养胚胎至囊胚，分离内细胞团，获得ICR小鼠的ES细胞。结果不但获得了来自体外受精囊胚的ICR小鼠ES细胞，而且表明用体外受精方法获得的小鼠早期胚胎的数量明显大于常规方法，且比较稳定。ICR小鼠ES细胞的获得，为研究小鼠的ES细胞分化提供了条件。     

重组逆转录病毒介导的neo~R基因在公鼠生殖系细胞的转移

将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基因转移研究。注射后 45 d,采集公鼠精液 ,进行精液品质与 PCR检测。结果表明 ,在优化的注射条件下 ,曲细精管内注射重组逆转录病毒后 ,不会干扰小鼠精子的正常发育能力 ,并能够将外源基因整合到精子基因组 ,从而首次通过重组逆转录病毒成功地实现了 neo R基因在公鼠生殖系细胞的转移     

四种抗冻剂20℃时对小鼠生精上皮单细胞存活率的影响

将小鼠生精上皮单细胞置20℃含不同抗冻剂的冻存液中一定时间后，台盼蓝染色测定细胞存活率，以筛选冷冻保存小鼠生精上皮细胞的侯选抗冻剂及使用浓度。结果，20℃30min，10％浓度的二甲基亚砜（DMSO）、丙二醇（PG）及乙二醇（EG）对7日龄小鼠生精上皮单细胞存活率均无显著影响，而10％甘油（G）则使细胞存活率显著下降；20℃ 30min,10%浓度的DMSO、PG、EG及G对成年小鼠生精上皮单细胞存活率均无显著影响；20℃ 5min,25%浓度的DMSO、PG、EG及G均使7日龄及成年小鼠生精上皮单细胞存活率显著下降。实验结果表明，10％DMSO、PG及EG可作为7日龄小鼠生殖细胞慢速冷冻保存时的侯选抗冻剂，10％DMSO、PG、EG及G可作为成年小鼠生殖细胞慢速冷冻保存时的侯选抗冻剂；在高浓度抗冻剂超速冷冻保存小鼠生殖细胞时，平衡时间应短于5min，或在4℃进行。     

牛胚胎生殖细胞的分离与培养

以牛胎儿为材料,从原始生殖细胞（PGC）分离培养出胚胎生殖细胞（EG）,并进行传代和鉴定,对影响胚胎生殖细胞分离与培养的因素进行了探讨,研究发现以共培养方式培养牛原始生殖细胞时,原代培养都可以出现大量形态较好的EG细胞集落,说明同源的体细胞可以很好地支持PGC的生长和增殖,组织块培养细胞克隆数目较少,PGC很难增殖,不能形成典型的集落,传代也不理想,只传了一代.同时比较了不同传代方法对牛胚胎生殖细胞细胞传代的影响,发现消化＋机械分离法和消化＋吹打法都可以用于EG细胞的传代.消化＋吹打法操作简单,省时省力,也能够很好的保持细胞的增殖活力.原代培养的牛原代胚胎生殖细胞进行了细胞表面标志抗原SSEA-1,3,4鉴定,呈弱阳性.细胞体外培养可以分化为成纤维样细胞、上皮样细胞和类胚体.     

ICR小鼠胚胎干细胞建系初步研究

实验旨在探讨消化方式和胚胎发育阶段对ICR小鼠胚胎干细胞(ES细胞)建系效率的影响。ICR小鼠3.5 d囊胚在饲养层上贴壁后采用单一酶消化或机械化与酶消化法相结合分离隆起的细胞集落,进行传代培养;然后选择二者中较优消化方式对不同发育时期囊胚所形成的细胞集落进行处理。结果表明:采用机械化与胰酶消化相结合的方式,形成的类ES细胞超过7代的比率(85.0%)要显著高于单一的胰酶消化(15.0%)(P<0.05);当用二者相结合的方式对ICR小鼠3.5 d(早期囊胚)、4.0 d(扩张囊胚)和4.5 d(孵化囊胚)所形成的细胞集落进行消化传代培养,三者在贴壁率和形成原代细胞集落率上均无显著差别(P>0.05),但传代超过7代的效率上早期囊胚和扩张囊胚均高于孵化囊胚(P<0.05)。结果提示,采用机械化与酶消化法相结合更适合于3.5～4.0 d ICR小鼠囊胚的ES细胞建系。