动物胚胎干细胞在动物科学中的应用

自Ｅｖａｎｓ等从延迟着床胚胎中分离出小鼠胚胎干细胞 (ＥＳ)以来 ,包括小鼠在内的各种动物ＥＳ细胞的分离受到国内外科学家的关注[1] 。ＥＳ细胞在克隆动物 ,生产转基因动物 ,创建人类遗传疾病动物模型 ,研究细胞分化 ,细胞与细胞的相互关系以及用人类ＥＳ细胞定向分化制造用于器官移植的组织器官等领域具有广阔的应用前景。本文对动物ＥＳ细胞克隆及其遗传操作技术在动物遗传育种、胚胎学及发育生物学领域的应用前景作一评述和展望。1　生产克隆动物1 1　利用ＥＳ细胞生产克隆动物的优势　近年来的研究表明 ,动物早期胚胎细胞、动物胚胎…     

动物胚胎干细胞遗传操作研究进展

自Ｅｖａｎｓ和Ｋａｕｆｍａｎ从延迟着床胚胎中分离出小鼠胚胎干细胞 (Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ,简称ＥＳ细胞)以来 ,包括小鼠在内的各种动物ＥＳ细胞的分离受到国内外科学家的关注。动物ＥＳ细胞在克隆动物、生产转基因动物、创建人类遗传疾病动物模型、研究细胞分化、细胞与细胞的相互关系以及用人类ＥＳ细胞定向分化制造用于人器官移植的组织器官等领域具有较为广阔的应用前景。动物ＥＳ细胞的应用前景是建立在利用分子生物学方法对胚胎干细胞进行遗传操作的基础上。本文对动物ＥＳ细胞遗传操作技术的方法及其在动物遗传育种…     

动物胚胎干细胞鉴定方法研究进展

动物胚胎干细胞 (ＥＳ细胞 )是早期胚胎经体外分化抑制培养建立的多能性和全能性细胞系。它在发育阶段类似于早期内细胞团细胞 (Ｉｎｎｅｒｃｅｌｌｍａｓｓ) ,当它被注射到囊胚胎或被注射到去核成熟卵母细胞后 ,可参与包括生殖腺在内的各种组织的形成 ,生产克隆动物。ＥＳ细胞具有多能性及核型正常的特征是其作为研究哺乳类动物胚胎发育、细胞分化、外源基因的表达以及利用基因突变ＥＳ细胞建立人类遗传病动物模型的理论基础。1　形态鉴定　　ＥＳ细胞体积小 ,细胞核大 ,有一个或多个核仁。小鼠ＥＳ细胞直径一般为 12～14 μｍ ,牛的为 11…     

胚胎干细胞研究进展及其应用

胚胎干细胞 (ＥｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌＥＳ细胞 )是从早期胚胎内细胞团 (ＩｎｎｅｒｃｅｌｌｍａｓｓＩＣＭ )或原始生殖细胞 (Ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ ｇｅｒｍｃｅｌｌｓＰＧＣＳ)分离和克隆的具有全能性的细胞[1] 。它具有无限增殖和多向分化的潜能。ＥＳ细胞研究与动物克隆、转基因动物技术相结合可使动物育种发生革命性的变革[2 ] ;更为重要的是ＥＳ细胞研究与组织工程等相结合 ,可以修复人体坏损组织或进行器官移植 ,从而使糖尿病、帕金森、心血管等当今严重威胁人类健康的疾病得到有效治疗[3] 。笔者就ＥＳ细胞的建系、鉴定…     

原始生殖细胞与胚胎干细胞

原始生殖细胞用于哺乳动物胚干细胞的分离与培养,是进入９０年代以来胚胎干细胞研究领域内的重大技术成果。在小鼠、大鼠、牛和猪等动物上,人们已由ＰＧＣｓ成功地建立了类ＥＳ细胞系。囊胚注射不仅已生出嵌合小鼠,而且其中生殖系嵌合体也已繁殖出数量可观的后代。因此,来自ＰＧＣｓ的ＥＳ细胞,业已证明具有囊胚ＥＳ细胞的全部特性。在ＥＳ细胞培养中,用ＰＧＣｓ替代桑椹胚和囊胚在取材等方面是有优势的。     

动物克隆技术

动物克隆技术,即动物核移植技术,是通过显微操作,电融合等实验手段,将发育到一定阶段的核供体(胚胎细胞或体细胞)的细胞核取出,注入相应发育阶段的去核的原核胚或成熟卵母细胞中,再将重构胚的胚胎移植,到相应生理状态的动物体内,达到大量生产遗传同质动物的一种生物工程技术。1动物克隆技术的应用克隆技术对畜牧业的发展将产生重大影响。利用动物克隆技术,可缩短育种年限。据报道,自1987年牛胚胎细胞移植成功,牛克隆胚胎的重复克隆已达6个世代,并获得第三代克隆牛,由一枚胚胎反复克隆已得到近200枚克隆胚胎,母牛繁殖后代数可以呈几何基数增…     

ES细胞克隆动物技术研究进展

ＥＳ细胞克隆动物在提高良种动物繁殖率和保护动物遗传资源领域具有重要的作用,ＥＳ细胞核移植是生产克隆动物的重要方法,ＥＳ细胞克隆率低和克隆动物生活力低是其存在的主要问题。     

哺乳动物的无性生殖

导言无性生殖亦称克隆（Clone），无需单倍体的精子和卵子受精发育产生新的个体，而是由正常的二倍体细胞通过无性系培养、发育和胚胎移植获得后代。现已研究成功的无性生殖技术有：胚胎分割、嵌合体、卵裂球纯系培养和细胞核移植。细胞核移植又包括胚胎细胞、胚胎干细胞、胎儿细胞和成年动物体细胞核的移植。近期在国内外开展大讨论的克隆技术是指通过细胞核移植产生克隆动物。研究此技术对发展畜牧业、医学和药学有重要意义。通过细胞核移植，可克隆出优质高产的畜群；加速品种改良，培育出生长快具抗病性的家畜；是保护动物资源和增加珍…     

动物胚胎分割技术诌议

正胚胎分割是采用显微手术的方法,将早期胚胎一分为二,一分为四或更多次的分割,再(或经过体外培养后)移回受体妊娠产仔,是动物克隆技术的一种。一枚胚胎经分割可以得到两个或两个以上的后代,这在加速良种繁殖方面具有重要的生产应用价值,可以提高家畜优良品种的推广速度,避免奶牛胚胎移植中的异性孪生。1胚胎分割技术的研究进展     

嵌合体猪试验成功

哺乳动物嵌合体在发育生物学研究中很有用处。家畜嵌合体研究方面,目前仅有用显微操作法获得了绵羊嵌合体(Pighill等,1968)和奶牛嵌合体(Brem等,1984)。迄今还未见猪嵌合体试验成功的报道。本通讯是报道将分离得到的胚胎细胞块注射进囊胚,首次获得嵌合体猪的试验方法和结果。     

囊胚注射转基因ES细胞制作嵌合体的研究

在小鼠胚胎成纤维细胞制作的饲养层上培养并成功的维持了携带LacZ基因的胚胎干细胞系（S8），在此基础上，以S8为供体细胞，以远交系昆明白小鼠3．5d胚胎为受体，通过显微注射法将供体细胞转移到受体的囊胚腔内，经过恢复培养，移植到代孕鼠昆明白雌鼠的子宫中；后代在嵌合体出生一周后进行判定。本试验用8～13代的S8细胞共注射胚胎597枚，经1～3h恢复培养，有585枚胚胎重新具有膨大的囊胚腔，细胞轮廓分明，滋养层细胞间连接也清晰可见，胚胎成活率为97％；胚胎移植后，代孕母鼠共移植胚胎228枚，经17～19d的妊娠期后，产仔37只（2只死胎），产仔率为16％；有35只仔鼠（雄鼠18只，雌鼠17只）存活到可以判断毛色，共获得8只S8细胞毛色嵌合体小鼠，嵌合体的产生率为21．6％。结果表明用S8细胞经囊胚注射后能够获得嵌合体，并且嵌合体明显发生了性偏离现象。本试验为国内利用囊胚注射携带LacZ基因的胚胎干细胞获得嵌合体小鼠的首例报道。     

动物乳腺生物反应器的原理及研究进展

1　基本概念1 .1　转基因动物 (ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃａｎｉｍａｌ)　转基因动物是指通过实验室的某些方法 ,将人为构建的外源目的基因导入动物的生殖细胞或早期胚胎 (原核或受精卵 ) ,使其稳定地整合到动物基因组中 ,并能遗传给后代的动物。最早的转基因动物是鸡 (Ｍｕｎｒｏ,1 968) ,其后是利用注射法和病毒感染法转基因鼠 (Ｊａｅｎｉｓｈ ,1 976)。1 .2　动物生物反应器 (ａｎｉｍａｌｂｉｏｒｅａｃｔｅｒ)　一般把目的基因在血液循环系统或乳腺中表达的转基因动物叫动物生物反应器。利用它来生产人类所需的生物活性物质或药用珍稀蛋白…     

鸡胚盘细胞的研究进展

鸡胚盘细胞存在于未孵化的新鲜种蛋中，是一种具有多潜能性的胚胎干细胞。通过胚盘细胞移植法可制备体细胞或种系细胞嵌合体。如果将外源基因转入受体胚盘，受体胚后代则可能成为转基因鸡。利用胚盘细胞作为转基因载体，生产转基因鸡是研究禽类转基因的一种理想方法。作者就胚盘细胞及其研究进展给予综述。     

胚胎融合制备嵌合小鼠

人工嵌合体小鼠(Chimeric mouse)是由两个不同基因型纯种小鼠胚胎融合而成的,这种小鼠各组织和器官都含有两种来源的细胞群体.人工嵌合体小鼠是研究胚胎发育、遗传、免疫机制等的具有特殊价值的动物模型,同时也为培育动物新品种开辟了一个周期短、见效快的崭新途径.本文旨在建立胚胎融合制备嵌合体小鼠的方法,为在其他动物进行细胞工程育种和转基因动物制备打下基础.     

山羊早期胚胎切割技术比较试验

胚胎分割是将哺乳动物附植前胚胎分成若干个具有继续发育潜力部分的生物技术,也是胚胎移植常用的辅助技术。运用胚胎分割可增加有限的优质胚胎数目以获得同卵孪生后代〔1〕。运用同卵孪生后代作实验材料,可消除遗传差异,提高实验结果的准确性,更为重要的是通过胚胎的显微切割可     

不同培养方式对昆明小鼠类ES细胞分离及培养的影响

胚胎干细胞（Embryonic stem cell,ES细胞）是从早期哺乳类动物胚胎或原始生殖细胞分离的具有全能性的细胞系。在体外分化抑制培养条件下,具有保持未分化的状态及无限增殖的能力。自Evans和Kaufman首次建立小鼠ES细胞系以来,各种动物ES细胞分离与克隆成为国际生物科学领域的热点课题之一。ES细胞可广泛应用于嵌合体的制备和克隆动物的生产。利用ES细胞遗传操作,可生产转基因动物,进行细胞基因结构与功能的关系以及细胞分化机制的研究。本研究采用不同培养方式对昆明小鼠类ES细胞进行分离及培养,供相关研究者参考。     

动物的胚胎移植及其在畜牧生产中的应用

胚胎移植(embryotransfer,ET)是指从一头(只)雌性动物的生殖道(输卵管或子宫)内取出早期胚胎,或者是通过体外受精、胚胎分割、克隆等方法获得胚胎,然后把这些胚胎移植到另外一些雌性动物生殖道的相应部位,使其着床、发育,最后产下后代。即俗称的“借腹怀胎”。在胚胎移植中,把提供胚胎的动物称为供体(donor),接受胚胎移植的则称为受体(recipient)。一般而言,供体为优良品种或优秀个体,或者是特定的畜种或个体,而受体为生产性能较差的品种或个体,以达到“借一般动物之腹怀优良品种或优秀个体之胎”的目的,从而增加良种后代的数量,迅速提高畜…     

胚胎干细胞在动物克隆中的应用

自Ｅｖａｎｓ和Ｋａｕｆｍａｎ(1981)从延迟着床的胚胎中分离出小鼠胚胎干细胞 (ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＥＳ细胞 )以来 ,ＥＳ细胞一直备受人们的关注〔1〕。 1998年 ,由基隆公司资助的汤姆森研究小组在《科学》杂志上发表了关于人的ＥＳ细胞建立等一系列工作之后 ,基隆公司的股票更是狂升了 6倍 ;1999年、2 0 0 0年 ,干细胞研究两度被美国《科学》杂志推举为2 1世纪最重要的研究领域 ;1999年 ,美国《科学》杂志还将干细胞研究评为当年世界十大科学成就之首。由此足以显示干细胞的魅力 ,而干细胞之所以如此吸引人们的注意 ,…     

逆转录病毒载体介导的蜘蛛拖丝蛋白转基因小鼠的制备

为了建立通过转基因动物获得蜘蛛拖丝蛋白的方法,试验利用前期构建的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)逆转录病毒载体侵染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),通过嵌合体法制备转基因小鼠,并用PCR技术进行鉴定。结果表明:成功获得嵌合体小鼠;目的基因2S-IRES-EGFP已整合入F0代及F1代嵌合体小鼠的鼠尾基因组中。说明利用逆转录病毒可成功获得表达蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)的转基因小鼠。     

鱼类胚胎干细胞的研究进展

胚胎干细胞是存在于早期胚胎或原始生殖嵴,具有发育全能性和无限增殖能力的一类细胞。作为实验材料,该类细胞已广泛应用于基因的表达与调控、细胞分化的机制、动物克隆及转基因动物生产等研究领域。与其他哺乳动物胚胎干细胞的研究相比,虽然鱼类胚胎干细胞的研究起步较晚,但近年来该领域的研究进展迅速。本文综述了鱼类胚胎干细胞的分离培养、生物学特性、体外分化能力及嵌合体形成等方面的研究进展。